發(fā)布時間：2017-07-01 07:08

  本文關(guān)鍵詞：熱休克蛋白70碳末端反應(yīng)蛋白（CHIP）參與高糖誘導(dǎo)的心肌損傷，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:大量研究表明熱休克蛋白70碳末端反應(yīng)蛋白(CHIP)在細(xì)胞損傷、凋亡、熱應(yīng)激等方面起非常重要的作用。本次研究探討CHIP在高糖誘導(dǎo)的心肌損傷中的作用,假設(shè)通過敲減CHIP在心肌細(xì)胞的表達可加重高糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷。方法:1、提取原代心肌細(xì)胞后分為6個實驗組:低糖(LG)組,高糖(HG)組,低糖+病毒(CHIP+LG)組,高糖+病毒(CHIP+HG)組,低糖+空病毒(LV-NC+LG)組,高糖+空病毒(LV-NC+HG)組;應(yīng)用LV-CHIP-RNAi和LV-NC慢病毒轉(zhuǎn)染原代心肌細(xì)胞;高糖培養(yǎng)應(yīng)用25.5mmol/L葡萄糖濃度培養(yǎng)24h,低糖培養(yǎng)應(yīng)用5.5mmol/L葡萄糖濃度培養(yǎng)24h。2、檢測各組上清液中LDH的活性;ELISA試劑盒檢測IL-1β、IL-6的表達;Annexin V-PE/7-AAD試劑盒檢測細(xì)胞凋亡;qRT-PCR法檢測CHIP、Bcl-2、Bax、Caspase3 mRNA水平。結(jié)果:1、在顯微鏡下,體外培養(yǎng)的心肌細(xì)胞,形態(tài)呈現(xiàn)不規(guī)則多邊形,培養(yǎng)72小時后大部分細(xì)胞融合生長,全屏視野內(nèi)大部分細(xì)胞搏動,搏動頻率約為60次/分。通過熒光顯微鏡觀察,在轉(zhuǎn)染慢病毒72小時后,可見熒光表達最強,顯示60%以上的心肌細(xì)胞表達綠色免疫熒光。2、各實驗結(jié)果:1)HG組和LG組相比:LDH活性升高;炎癥因子IL-1β、IL-6含量升高;心肌凋亡率升高;CHIP mRNA、Bax mRNA、Caspase3 mRNA水平上調(diào),Bcl-2mRNA水平下調(diào)。2)LV-NC+LG組和LG組、LV-NC+HG組和HG組相比:LDH活性、IL-1β、IL-6含量、心肌凋亡率無明顯差別;Bax m RNA、Bcl-2 mRNA、Caspase3 mRNA的水平無明顯改變。3)CHIP+HG組和LV-NC+HG組相比:LDH活性明顯升高;IL-1β升高,IL-6明顯升高;心肌凋亡率顯著升高;Bax m RNA、Caspase3 mRNA水平顯著上調(diào),Bcl-2 mRNA水平顯著下調(diào)。結(jié)論:1、高糖培養(yǎng)上調(diào)心肌細(xì)胞CHIP mRNA水平。2、高糖培養(yǎng)可誘導(dǎo)心肌凋亡及炎癥。3、敲減CHIP基因能加重高糖誘導(dǎo)的心肌凋亡及炎癥。
【關(guān)鍵詞】：CHIP 心肌細(xì)胞 高糖 損傷 炎癥 凋亡
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R542.2
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 材料與方法12-23
• 2.1 實驗材料12-13
• 2.1.1 實驗動物12
• 2.1.2 主要試劑及耗材12-13
• 2.1.3 主要儀器13
• 2.2 實驗方法13-22
• 2.2.1 實驗器材的準(zhǔn)備13-14
• 2.2.2 相關(guān)液體的配制14-15
• 2.2.3 心肌細(xì)胞的提取及培養(yǎng)15-16
• 2.2.4 實驗分組16-17
• 2.2.5 LV-CHIP-RNAi慢病毒載體和LV-NC慢病毒載體轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞17-18
• 2.2.6 檢測各組心肌細(xì)胞LDH活力18-19
• 2.2.7 ELISA法檢測各組細(xì)胞IL-1β、IL-619-20
• 2.2.8 熒光定量PCR檢測各組心肌細(xì)胞CHIP及凋亡基因Bax、Bcl-2、Caspase 3mRNA的表達20-21
• 2.2.9 Annexin V-PE/7-AAD法檢測細(xì)胞凋亡21-22
• 2.3 統(tǒng)計學(xué)分析22-23
• 第3章 結(jié)果23-34
• 3.1 心肌細(xì)胞的生長特點23-24
• 3.2 高糖培養(yǎng)上調(diào)CHIP mRNA的表達24-25
• 3.3 LV-CHIP-RNAi慢病毒載體和LV-NC空載慢病毒載體轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞的結(jié)果25-26
• 3.4 特異性慢病毒下調(diào)CHIP mRNA的表達26-27
• 3.5 檢測各組LDH活力27
• 3.6 檢測各組炎癥因子IL-1β、IL-6 的表達27-29
• 3.7 檢測各組凋亡因子Bax、Bcl-2、Caspase3 mRNA的表達29-32
• 3.7.1 檢測基因Bax mRNA的水平29-30
• 3.7.2 檢測基因Bcl-2 mRNA的表達30-31
• 3.7.3 檢測基因Caspase3 mRNA的表達31-32
• 3.8 檢測各組細(xì)胞凋亡率32-34
• 第4章 討論34-38
• 第5章 結(jié)論與展望38-39
• 5.1 結(jié)論38
• 5.2 展望38-39
• 致謝39-40
• 參考文獻40-43
• 綜述43-48
• 參考文獻47-48

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