本文關(guān)鍵詞：骨髓增生異常綜合征患者骨髓單個核細胞自噬水平的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的研究骨髓增生異常綜合征(MDS)患者骨髓單個核細胞Beclin1、哺乳動物雷帕霉素靶點(mTOR)、微管相關(guān)蛋白輕鏈3(LC3)水平,初步探討MDS患者骨髓原代細胞自噬水平的改變。材料與方法38例MDS患者為實驗組(MDS組),26例非惡性貧血患者為對照組。骨髓細胞鐵染色檢測骨髓細胞內(nèi)、外鐵含量和環(huán)形鐵粒幼細胞;流式細胞儀檢測骨髓單個核細胞活性氧(ROS)水平;透射電鏡觀察骨髓單個核細胞內(nèi)自噬泡數(shù)量;丹(磺)酰戊二胺(MDC)法檢測骨髓單個核細胞自噬泡水平;免疫熒光法觀察觀察骨髓單個核細胞中微管相關(guān)蛋白輕鏈3(LC3)蛋白表達,qPCR法檢測自噬相關(guān)基因Beclin1、LC3、mTOR mRNA表達,Western blottiing檢測Beclin1、LC3蛋白的表達。結(jié)果(1)骨髓細胞鐵染色發(fā)現(xiàn)MDS患者細胞外鐵、細胞內(nèi)鐵和環(huán)形鐵粒幼細胞數(shù)量均較對照組增加。(2)流式細胞術(shù)檢測到MDS組(n=7)患者骨髓單個核細胞ROS水平(1352.41±667.51)高于對照組ROS水平(n=5,596.46±233.99,P0.05)。(3)透射電鏡觀察到MDS患者骨髓細胞內(nèi)存在雙層膜結(jié)構(gòu)自噬泡,內(nèi)含溶酶體。(4)MDC染色發(fā)現(xiàn)MDS組(n=4)染色陽性(自噬泡)細胞數(shù)目比例(9.75%±2.63%)顯著高于對照組(n=5,2.90%±0.89%,P0.05)。(5)免疫熒光法觀察到MDS組(n=4)LC3陽性細胞數(shù)目比例(6.13%±1.03%)顯著高于對照組(n=4,1.5%±0.58%,P0.05)。(6)qPCR法檢測到低危/中危-1 MDS組(n=14)骨髓單個核細胞Beclin1mRNA表達水平(3.61±3.02)顯著高于對照組(n=11,1.55±1.03,P0.05);中危-2/高危MDS組(n=8)Beclin1 mRNA表達水平為2.63±2.79,高于對照組,但沒有統(tǒng)計學差異,P0.05;低危/中危-1MDS組(n=10)骨髓單個核細胞LC3A mRNA水平(6.56±3.97)顯著高于對照組(n=7,1.21±0.95,P0.05);低危/中危-1MDS組(n=9)骨髓單個核細胞的自噬負性調(diào)控基因mTOR mRNA水平(0.39±0.37)顯著低于于對照組(n=9,1.50±1.03,P0.05);中危-2/高危MDS組(n=4)mTOR mRNA表達水平為1.73±1.69,高于對照組,但沒有統(tǒng)計學差異,P0.05。(7)Western blotting發(fā)現(xiàn)Beclin1、LC3蛋白表達MDS組高于對照組。結(jié)論MDS患者ROS水平升高,低危/中危-1MDS組患者較對照組骨髓單個核細胞自噬水平升高,中危-2/高危MDS組患者較對照組骨髓單個核自噬水平無明顯改變,提示自噬對MDS患者細胞可能起保護性作用,自噬水平相對不足可能與患者高危險性向AML轉(zhuǎn)化相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：骨髓增生異常綜合征 活性氧 自噬 急性髓系白血病
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R551.3
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-12
• 前言12-15
• 研究目的、方法13-15
• 第一部分：MDS 患者骨髓單個核細胞鐵含量及 ROS 水平變化15-21
• 1.1 對象和方法15-17
• 1.1.1 研究對象15
• 1.1.2 主要試劑和材料15-16
• 1.1.3 實驗方法16-17
• 1.1.4 統(tǒng)計學分析17
• 1.2 結(jié)果17-18
• 1.2.1 MDS患者骨髓細胞鐵含量檢測17
• 1.2.2 MDS患者骨髓單個核細胞內(nèi)活性氧水平17-18
• 討論18-20
• 小結(jié)20-21
• 第二部分 MDS 患者骨髓單個核細胞自噬泡數(shù)量的改變21-38
• 2.1 對象與方法21-31
• 2.1.1 研究對象21
• 2.1.2 主要試劑與儀器21-26
• 2.1.3 實驗方法26-31
• 2.1.4 統(tǒng)計學分析31
• 2.2 結(jié)果31-35
• 2.2.1 透射電鏡觀察 MDS 患者骨髓細胞自噬泡31-32
• 2.2.2 MDC 染色觀察 MDS 患者骨髓單個核細胞中自噬泡32-33
• 2.2.3 免疫熒光法觀察細胞中 LC3 蛋白的表達33-34
• 2.2.4 qPCR 方法檢測細胞自噬相關(guān)基因表達34-35
• 2.2.5 Western blotting 檢測各組細胞自噬相關(guān)蛋白表達35
• 討論35-37
• 小結(jié)37-38
• 第三部分：MDS 患者骨髓單個核細胞自噬水平的研究38-51
• 3.1 研究對象和方法38-46
• 3.1.1 研究對象38
• 3.1.2 主要試劑與儀器38-42
• 3.1.3 研究方法42-46
• 3.1.4 統(tǒng)計學分析46
• 3.2 結(jié)果46-48
• 3.2.1 qPCR 方法檢測細胞自噬相關(guān)基因表達46-47
• 3.2.3 Western blotting 檢測各組細胞自噬相關(guān)蛋白表達47-48
• 討論48-50
• 小結(jié)50-51
• 全文結(jié)論51-53
• 參考文獻53-62
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明62-63
• 綜述63-73
• 參考文獻67-73
• 致謝73

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