發(fā)布時(shí)間：2017-06-23 14:08

  本文關(guān)鍵詞：骨髓增生異常綜合征患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞自噬水平的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的研究骨髓增生異常綜合征(MDS)患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞Beclin1、哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶點(diǎn)(mTOR)、微管相關(guān)蛋白輕鏈3(LC3)水平,初步探討MDS患者骨髓原代細(xì)胞自噬水平的改變。材料與方法38例MDS患者為實(shí)驗(yàn)組(MDS組),26例非惡性貧血患者為對(duì)照組。骨髓細(xì)胞鐵染色檢測(cè)骨髓細(xì)胞內(nèi)、外鐵含量和環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞;流式細(xì)胞儀檢測(cè)骨髓單個(gè)核細(xì)胞活性氧(ROS)水平;透射電鏡觀察骨髓單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)自噬泡數(shù)量;丹(磺)酰戊二胺(MDC)法檢測(cè)骨髓單個(gè)核細(xì)胞自噬泡水平;免疫熒光法觀察觀察骨髓單個(gè)核細(xì)胞中微管相關(guān)蛋白輕鏈3(LC3)蛋白表達(dá),qPCR法檢測(cè)自噬相關(guān)基因Beclin1、LC3、mTOR mRNA表達(dá),Western blottiing檢測(cè)Beclin1、LC3蛋白的表達(dá)。結(jié)果(1)骨髓細(xì)胞鐵染色發(fā)現(xiàn)MDS患者細(xì)胞外鐵、細(xì)胞內(nèi)鐵和環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞數(shù)量均較對(duì)照組增加。(2)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)到MDS組(n=7)患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞ROS水平(1352.41±667.51)高于對(duì)照組ROS水平(n=5,596.46±233.99,P0.05)。(3)透射電鏡觀察到MDS患者骨髓細(xì)胞內(nèi)存在雙層膜結(jié)構(gòu)自噬泡,內(nèi)含溶酶體。(4)MDC染色發(fā)現(xiàn)MDS組(n=4)染色陽(yáng)性(自噬泡)細(xì)胞數(shù)目比例(9.75%±2.63%)顯著高于對(duì)照組(n=5,2.90%±0.89%,P0.05)。(5)免疫熒光法觀察到MDS組(n=4)LC3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目比例(6.13%±1.03%)顯著高于對(duì)照組(n=4,1.5%±0.58%,P0.05)。(6)qPCR法檢測(cè)到低危/中危-1 MDS組(n=14)骨髓單個(gè)核細(xì)胞Beclin1mRNA表達(dá)水平(3.61±3.02)顯著高于對(duì)照組(n=11,1.55±1.03,P0.05);中危-2/高危MDS組(n=8)Beclin1 mRNA表達(dá)水平為2.63±2.79,高于對(duì)照組,但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P0.05;低危/中危-1MDS組(n=10)骨髓單個(gè)核細(xì)胞LC3A mRNA水平(6.56±3.97)顯著高于對(duì)照組(n=7,1.21±0.95,P0.05);低危/中危-1MDS組(n=9)骨髓單個(gè)核細(xì)胞的自噬負(fù)性調(diào)控基因mTOR mRNA水平(0.39±0.37)顯著低于于對(duì)照組(n=9,1.50±1.03,P0.05);中危-2/高危MDS組(n=4)mTOR mRNA表達(dá)水平為1.73±1.69,高于對(duì)照組,但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P0.05。(7)Western blotting發(fā)現(xiàn)Beclin1、LC3蛋白表達(dá)MDS組高于對(duì)照組。結(jié)論MDS患者ROS水平升高,低危/中危-1MDS組患者較對(duì)照組骨髓單個(gè)核細(xì)胞自噬水平升高,中危-2/高危MDS組患者較對(duì)照組骨髓單個(gè)核自噬水平無(wú)明顯改變,提示自噬對(duì)MDS患者細(xì)胞可能起保護(hù)性作用,自噬水平相對(duì)不足可能與患者高危險(xiǎn)性向AML轉(zhuǎn)化相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：骨髓增生異常綜合征 活性氧 自噬 急性髓系白血病
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R551.3
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明10-12
• 前言12-15
• 研究目的、方法13-15
• 第一部分：MDS 患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞鐵含量及 ROS 水平變化15-21
• 1.1 對(duì)象和方法15-17
• 1.1.1 研究對(duì)象15
• 1.1.2 主要試劑和材料15-16
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)方法16-17
• 1.1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析17
• 1.2 結(jié)果17-18
• 1.2.1 MDS患者骨髓細(xì)胞鐵含量檢測(cè)17
• 1.2.2 MDS患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)活性氧水平17-18
• 討論18-20
• 小結(jié)20-21
• 第二部分 MDS 患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞自噬泡數(shù)量的改變21-38
• 2.1 對(duì)象與方法21-31
• 2.1.1 研究對(duì)象21
• 2.1.2 主要試劑與儀器21-26
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)方法26-31
• 2.1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析31
• 2.2 結(jié)果31-35
• 2.2.1 透射電鏡觀察 MDS 患者骨髓細(xì)胞自噬泡31-32
• 2.2.2 MDC 染色觀察 MDS 患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中自噬泡32-33
• 2.2.3 免疫熒光法觀察細(xì)胞中 LC3 蛋白的表達(dá)33-34
• 2.2.4 qPCR 方法檢測(cè)細(xì)胞自噬相關(guān)基因表達(dá)34-35
• 2.2.5 Western blotting 檢測(cè)各組細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白表達(dá)35
• 討論35-37
• 小結(jié)37-38
• 第三部分：MDS 患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞自噬水平的研究38-51
• 3.1 研究對(duì)象和方法38-46
• 3.1.1 研究對(duì)象38
• 3.1.2 主要試劑與儀器38-42
• 3.1.3 研究方法42-46
• 3.1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析46
• 3.2 結(jié)果46-48
• 3.2.1 qPCR 方法檢測(cè)細(xì)胞自噬相關(guān)基因表達(dá)46-47
• 3.2.3 Western blotting 檢測(cè)各組細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白表達(dá)47-48
• 討論48-50
• 小結(jié)50-51
• 全文結(jié)論51-53
• 參考文獻(xiàn)53-62
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明62-63
• 綜述63-73
• 參考文獻(xiàn)67-73
• 致謝73

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本文編號(hào)：475270