本文關(guān)鍵詞：濾泡輔助T細(xì)胞在骨髓增生異常綜合征發(fā)病機(jī)制中作用的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的通過(guò)研究骨髓增生異常綜合征(Myelodysplastic syndromes,MDS)小鼠模型(NUP98-HOXD13轉(zhuǎn)基因小鼠)外周血象及骨髓象變化、脾臟和骨髓濾泡輔助T細(xì)胞(Follicular helper T cells,Tfh)數(shù)量及其表面誘導(dǎo)性共刺激分子(ICOS)、程序化死亡分子-1(PD-1)、CD40L、OX40的表達(dá)情況,以探討其在MDS發(fā)病機(jī)制中的作用,進(jìn)一步闡明機(jī)體免疫耐受及免疫監(jiān)視功能在骨髓增生異常綜合征發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的具體機(jī)制,為骨髓增生異常綜合征的免疫靶向治療提供理論依據(jù)。方法實(shí)驗(yàn)對(duì)象MDS小鼠模型即NUP98-HOXD13轉(zhuǎn)基因小鼠(NHD13小鼠)(Strain Name:C57BL/6-Tg(Vav-NUP98/HOXD13);Stock Number:010505)購(gòu)自美國(guó)Jackson實(shí)驗(yàn)室,對(duì)照選用同源野生型C57BL/6J小鼠。實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組各5-10只,雄性,6-8周齡。飼養(yǎng)地點(diǎn)為中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所動(dòng)物中心,飼養(yǎng)環(huán)境符合SPF級(jí)別。第一部分觀察NHD13小鼠外周血象及骨髓象變化。分別選取13只雄性NHD13小鼠及8只與其同源的野生型C57BL/6J小鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,使用全血細(xì)胞自動(dòng)分析儀對(duì)其進(jìn)行外周血細(xì)胞計(jì)數(shù),外周血及骨髓細(xì)胞涂片經(jīng)瑞氏染色后顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。第二部分觀察NHD13小鼠脾臟淋巴濾泡結(jié)構(gòu)等病理變化,并用免疫組化方法檢測(cè)5只NHD13小鼠和5只野生型小鼠脾臟細(xì)胞表面CXCR5的表達(dá)情況。第三部分研究NHD13小鼠脾臟及骨髓來(lái)源濾泡輔助T細(xì)胞數(shù)量及其表面分子ICOS、PD-1、CD40L、OX40的表達(dá)情況。分別選取10只雄性NHD13小鼠及其同源的野生型C57BL/6J小鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,用流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)脾臟及骨髓來(lái)源濾泡輔助T細(xì)胞數(shù)量及其表面分子ICOS、PD-1、CD40L、OX40的表達(dá)情況。第四部分研究NHD13小鼠脾臟來(lái)源細(xì)胞及骨髓單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)ICOS、PD-1、CD40L、OX40 mRNA的表達(dá)。用實(shí)時(shí)定量PCR方法分別檢測(cè)8只NHD13小鼠及其同源的野生型c57bl/6j小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞、脾臟來(lái)源細(xì)胞icos、pd-1、cd40l、ox40mrna的表達(dá)。結(jié)果第一部分nhd13小鼠外周血白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板數(shù)量均明顯低于野生型小鼠,且差異具有顯著性(p0.05)。nhd13小鼠紅細(xì)胞及血小板體積較野生型小鼠明顯增大,差異具有顯著性(p0.05),nhd13小鼠表現(xiàn)為大細(xì)胞性貧血。nhd13小鼠紅細(xì)胞分布寬度及血小板分布寬度均較野生型小鼠明顯增大,二者差異具有顯著性(p0.05);與野生型小鼠相比,nhd13小鼠的紅細(xì)胞及血小板相對(duì)大小不均。nhd13小鼠外周血涂片顯示白細(xì)胞數(shù)量、紅細(xì)胞數(shù)量和血小板數(shù)量均較野生型小鼠減少。轉(zhuǎn)基因小鼠紅細(xì)胞體積明顯增大。轉(zhuǎn)基因小鼠骨髓中可見(jiàn)雙核紅細(xì)胞、環(huán)狀核粒細(xì)胞和紅系造血島等。第二部分與野生型小鼠相比,nhd13小鼠脾臟內(nèi)淋巴濾泡及生發(fā)中心均明顯減少,紅髓增寬。免疫組化結(jié)果顯示nhd13小鼠脾臟細(xì)胞表面cxcr5的表達(dá)明顯低于野生型小鼠,而pd-1的表達(dá)明顯增高。第三部分nhd13小鼠脾臟來(lái)源tfh細(xì)胞數(shù)量明顯少于野生型小鼠(p0.05),其表面分子icos、cd40l、ox40的表達(dá)均明顯低于野生型小鼠(p0.05),pd-1的表達(dá)明顯高于野生型小鼠(p0.05)。nhd13小鼠骨髓來(lái)源tfh細(xì)胞數(shù)量明顯少于野生型小鼠(p0.05),其表面分子ox40的表達(dá)均明顯低于野生型小鼠(p0.05),pd-1的表達(dá)明顯高于野生型小鼠(p0.05),icos及cd40l的表達(dá)在二者之間無(wú)明顯差異(p0.05)。第四部分nhd13小鼠脾臟細(xì)胞內(nèi)icos、cd40lmrna的表達(dá)明顯低于野生型小鼠,差異具有顯著性(p0.05)。nhd13小鼠脾臟細(xì)胞內(nèi)pd-1mrna的表達(dá)明顯高于野生型小鼠,差異具有顯著性(p0.05)。nhd13小鼠與野生型小鼠脾臟細(xì)胞內(nèi)ox40mrna的表達(dá)無(wú)明顯區(qū)別(p0.05)。nhd13小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)icos、cd40l、ox40mrna的表達(dá)明顯低于野生型小鼠,差異具有顯著性(p0.05)。nhd13小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)pd-1mrna的表達(dá)明顯高于野生型小鼠,差異具有顯著性(p0.05)。結(jié)論1、nhd13小鼠外周血三系血細(xì)胞均明顯低于野生型小鼠,且紅細(xì)胞、血小板體積偏大,且與野生型小鼠相比,其紅細(xì)胞及血小板的體積相對(duì)大小不均;NHD13小鼠骨髓中可見(jiàn)雙核紅細(xì)胞、環(huán)狀核粒細(xì)胞、粒紅系造血島等異常。2、NHD13小鼠脾臟內(nèi)淋巴濾泡及生發(fā)中心均明顯減少,紅髓增寬,即免疫相關(guān)的功能性結(jié)構(gòu)較少;免疫組化結(jié)果顯示NHD13小鼠脾臟細(xì)胞表面CXCR5的表達(dá)明顯降低,說(shuō)明脾臟內(nèi)CXCR5+T細(xì)胞數(shù)量減少,而且免疫抑制性分子PD-1的表達(dá)升高,由此可推斷脾臟免疫功能降低。3、NHD13小鼠脾臟來(lái)源Tfh細(xì)胞數(shù)量減少,其表面免疫共刺激分子ICOS、CD40L、OX40的表達(dá)減低,免疫抑制分子PD-1的表達(dá)明顯升高;NHD13小鼠骨髓來(lái)源Tfh細(xì)胞數(shù)量減少,其表面免疫共刺激分子OX40的表達(dá)減低,免疫抑制分子PD-1的表達(dá)升高。與野生型小鼠相比,NHD13小鼠免疫功能低下,免疫耐受功能及免疫監(jiān)視功能減弱,造成惡性克隆增生。
【關(guān)鍵詞】：骨髓增生異常綜合征 濾泡輔助性T細(xì)胞 誘導(dǎo)性共刺激分子 程序化死亡分子-1
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R551.3
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明12-14
• 前言14-18
• 研究現(xiàn)狀、成果14-16
• 研究目的、方法16-18
• 1.對(duì)象和方法18-26
• 2.結(jié)果26-48
• 3.討論48-53
• 結(jié)論53-54
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 發(fā)表論文及參加科研情況58-59
• 綜述59-76
• 綜述參考文獻(xiàn)70-76
• 致謝76-77

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本文編號(hào)：475610