本文關鍵詞：濾泡輔助T細胞在骨髓增生異常綜合征發(fā)病機制中作用的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的通過研究骨髓增生異常綜合征(Myelodysplastic syndromes,MDS)小鼠模型(NUP98-HOXD13轉基因小鼠)外周血象及骨髓象變化、脾臟和骨髓濾泡輔助T細胞(Follicular helper T cells,Tfh)數(shù)量及其表面誘導性共刺激分子(ICOS)、程序化死亡分子-1(PD-1)、CD40L、OX40的表達情況,以探討其在MDS發(fā)病機制中的作用,進一步闡明機體免疫耐受及免疫監(jiān)視功能在骨髓增生異常綜合征發(fā)生、發(fā)展過程中的具體機制,為骨髓增生異常綜合征的免疫靶向治療提供理論依據(jù)。方法實驗對象MDS小鼠模型即NUP98-HOXD13轉基因小鼠(NHD13小鼠)(Strain Name:C57BL/6-Tg(Vav-NUP98/HOXD13);Stock Number:010505)購自美國Jackson實驗室,對照選用同源野生型C57BL/6J小鼠。實驗組及對照組各5-10只,雄性,6-8周齡。飼養(yǎng)地點為中國醫(yī)學科學院放射醫(yī)學研究所動物中心,飼養(yǎng)環(huán)境符合SPF級別。第一部分觀察NHD13小鼠外周血象及骨髓象變化。分別選取13只雄性NHD13小鼠及8只與其同源的野生型C57BL/6J小鼠作為實驗對象,使用全血細胞自動分析儀對其進行外周血細胞計數(shù),外周血及骨髓細胞涂片經瑞氏染色后顯微鏡下觀察細胞形態(tài)。第二部分觀察NHD13小鼠脾臟淋巴濾泡結構等病理變化,并用免疫組化方法檢測5只NHD13小鼠和5只野生型小鼠脾臟細胞表面CXCR5的表達情況。第三部分研究NHD13小鼠脾臟及骨髓來源濾泡輔助T細胞數(shù)量及其表面分子ICOS、PD-1、CD40L、OX40的表達情況。分別選取10只雄性NHD13小鼠及其同源的野生型C57BL/6J小鼠作為實驗對象,用流式細胞術分別檢測脾臟及骨髓來源濾泡輔助T細胞數(shù)量及其表面分子ICOS、PD-1、CD40L、OX40的表達情況。第四部分研究NHD13小鼠脾臟來源細胞及骨髓單個核細胞內ICOS、PD-1、CD40L、OX40 mRNA的表達。用實時定量PCR方法分別檢測8只NHD13小鼠及其同源的野生型c57bl/6j小鼠骨髓單個核細胞、脾臟來源細胞icos、pd-1、cd40l、ox40mrna的表達。結果第一部分nhd13小鼠外周血白細胞、中性粒細胞、淋巴細胞、紅細胞、血紅蛋白、血小板數(shù)量均明顯低于野生型小鼠,且差異具有顯著性(p0.05)。nhd13小鼠紅細胞及血小板體積較野生型小鼠明顯增大,差異具有顯著性(p0.05),nhd13小鼠表現(xiàn)為大細胞性貧血。nhd13小鼠紅細胞分布寬度及血小板分布寬度均較野生型小鼠明顯增大,二者差異具有顯著性(p0.05);與野生型小鼠相比,nhd13小鼠的紅細胞及血小板相對大小不均。nhd13小鼠外周血涂片顯示白細胞數(shù)量、紅細胞數(shù)量和血小板數(shù)量均較野生型小鼠減少。轉基因小鼠紅細胞體積明顯增大。轉基因小鼠骨髓中可見雙核紅細胞、環(huán)狀核粒細胞和紅系造血島等。第二部分與野生型小鼠相比,nhd13小鼠脾臟內淋巴濾泡及生發(fā)中心均明顯減少,紅髓增寬。免疫組化結果顯示nhd13小鼠脾臟細胞表面cxcr5的表達明顯低于野生型小鼠,而pd-1的表達明顯增高。第三部分nhd13小鼠脾臟來源tfh細胞數(shù)量明顯少于野生型小鼠(p0.05),其表面分子icos、cd40l、ox40的表達均明顯低于野生型小鼠(p0.05),pd-1的表達明顯高于野生型小鼠(p0.05)。nhd13小鼠骨髓來源tfh細胞數(shù)量明顯少于野生型小鼠(p0.05),其表面分子ox40的表達均明顯低于野生型小鼠(p0.05),pd-1的表達明顯高于野生型小鼠(p0.05),icos及cd40l的表達在二者之間無明顯差異(p0.05)。第四部分nhd13小鼠脾臟細胞內icos、cd40lmrna的表達明顯低于野生型小鼠,差異具有顯著性(p0.05)。nhd13小鼠脾臟細胞內pd-1mrna的表達明顯高于野生型小鼠,差異具有顯著性(p0.05)。nhd13小鼠與野生型小鼠脾臟細胞內ox40mrna的表達無明顯區(qū)別(p0.05)。nhd13小鼠骨髓單個核細胞內icos、cd40l、ox40mrna的表達明顯低于野生型小鼠,差異具有顯著性(p0.05)。nhd13小鼠骨髓單個核細胞內pd-1mrna的表達明顯高于野生型小鼠,差異具有顯著性(p0.05)。結論1、nhd13小鼠外周血三系血細胞均明顯低于野生型小鼠,且紅細胞、血小板體積偏大,且與野生型小鼠相比,其紅細胞及血小板的體積相對大小不均;NHD13小鼠骨髓中可見雙核紅細胞、環(huán)狀核粒細胞、粒紅系造血島等異常。2、NHD13小鼠脾臟內淋巴濾泡及生發(fā)中心均明顯減少,紅髓增寬,即免疫相關的功能性結構較少;免疫組化結果顯示NHD13小鼠脾臟細胞表面CXCR5的表達明顯降低,說明脾臟內CXCR5+T細胞數(shù)量減少,而且免疫抑制性分子PD-1的表達升高,由此可推斷脾臟免疫功能降低。3、NHD13小鼠脾臟來源Tfh細胞數(shù)量減少,其表面免疫共刺激分子ICOS、CD40L、OX40的表達減低,免疫抑制分子PD-1的表達明顯升高;NHD13小鼠骨髓來源Tfh細胞數(shù)量減少,其表面免疫共刺激分子OX40的表達減低,免疫抑制分子PD-1的表達升高。與野生型小鼠相比,NHD13小鼠免疫功能低下,免疫耐受功能及免疫監(jiān)視功能減弱,造成惡性克隆增生。
【關鍵詞】：骨髓增生異常綜合征 濾泡輔助性T細胞 誘導性共刺激分子 程序化死亡分子-1
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R551.3
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 縮略語/符號說明12-14
• 前言14-18
• 研究現(xiàn)狀、成果14-16
• 研究目的、方法16-18
• 1.對象和方法18-26
• 2.結果26-48
• 3.討論48-53
• 結論53-54
• 參考文獻54-58
• 發(fā)表論文及參加科研情況58-59
• 綜述59-76
• 綜述參考文獻70-76
• 致謝76-77

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本文編號：475610