目的:中期因子（Midkine,MK）是一種肝素結(jié)合生長因子,研究表明,血清MK水平與動脈粥樣硬化（atherosclerosis,As）相關性的缺血性心血管疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關,但其作用及具體機制尚不明確。因此,本研究的目的是探討MK對巨噬細胞膽固醇流出的影響及其可能機制。方法:RAW264.7巨噬細胞用含有50 mg/L氧化低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL）的無血清培養(yǎng)基孵育48h,使其荷脂,分別進行以下實驗:1.不同濃度（0,50,100,200,400ng/ml）的MK處理16 h或200 ng/m L濃度的MK處理不同時間（0,6,12,24,48 h）,采用油紅O染色法及NBD-Cholesterol熒光標記法檢測細胞內(nèi)脂滴數(shù)量及膽固醇含量,液體閃爍計數(shù)（liquid scintillation counting,LSC）檢測細胞膽固醇流出率及氧化酶法檢測胞內(nèi)脂質(zhì)含量;細胞免疫熒光法、Western blot免疫印跡及實時定量PCR（Quantitative real time PCR,q RT-PCR）檢測細胞... 

【文章來源】：南華大學湖南省

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

ox-LDL致RAW264.7巨噬細胞脂質(zhì)蓄積（10×40）

噬細胞16 h，采用油紅O染色法觀察細胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，細胞體積增大，胞內(nèi)脂滴增加，且胞內(nèi)脂滴的含量隨MK濃度的增加而逐漸增加（圖2）。

圖 2 油紅 O 染色法觀察不同濃度的 MK 處理對 RAW264.7 巨噬細胞胞內(nèi)脂滴含量的影（10×40）用NBD-Cholesterol 孵育RAW264.7巨噬細胞后，熒光顯微鏡下觀察胞內(nèi)的強度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，隨著MK濃度的增加，胞內(nèi)綠色熒光強漸增加（圖3），提示胞內(nèi)膽固醇的含量逐漸增加。這說明了MK促進RAW巨噬細胞脂質(zhì)蓄積，且其效應具有濃度依賴性。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Role of AMPK in atherosclerosis via autophagy regulation[J]. Hanxiao Ou,Chuhao Liu,Wenjie Feng,Xinwen Xiao,Shengsong Tang,Zhongcheng Mo.  Science China（Life Sciences）. 2018(10)

博士論文
[1]紅景天苷改善血管內(nèi)皮功能及其抗動脈粥樣硬化的作用與分子機制[D]. 邢莎莎.華中科技大學 2014

碩士論文
[1]二甲雙胍通過P53-IFI16-AMPK通路抑制原代人主動脈平滑肌細胞的增殖和遷移[D]. 郝彪.貴州醫(yī)科大學 2017



本文編號：3561370