發(fā)布時(shí)間：2022-01-01 01:55

　　近年來(lái)，心血管疾病已經(jīng)成為世界范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率最高的疾病之一。盡管基因治療已經(jīng)取得了令人滿意的效果，但是安全有效的傳遞載體仍然是瓶頸所在。常用的心肌轉(zhuǎn)運(yùn)載體可分為病毒載體和非病毒載體。由于具有較高的轉(zhuǎn)染效率，病毒載體的應(yīng)用仍然具有絕對(duì)優(yōu)勢(shì)。但是，由于病毒載體引起的機(jī)體免疫反應(yīng)較強(qiáng)，使其臨床應(yīng)用受到制約。作為病毒載體的有效補(bǔ)充，近年來(lái)非病毒載體的研究日益深入。本論文旨在構(gòu)建特異靶向心肌細(xì)胞并具有較高轉(zhuǎn)染效率和較低的細(xì)胞毒性的新型基因傳遞載體，為缺血性心臟病基因治療的相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。本論文設(shè)計(jì)構(gòu)建了四種含有心肌特異性啟動(dòng)子的重組質(zhì)粒：pGL3-α-MHC-Luc， pGL3-α-MHC-RFP及pGL3-epo-α-MHC-Luc、pGL3-epo-α-MHC-RFP并對(duì)其進(jìn)行性質(zhì)表征。分別在常氧、缺氧條件下，考察pGL3-epo-α-MHC-Luc和pCMV-Luc在H9C2中的表達(dá)水平，以評(píng)價(jià)缺氧特異性啟動(dòng)子的效果。分別在大鼠心肌細(xì)胞H9C2和對(duì)照細(xì)胞L929、C2C12、HELA中，定量分析重組質(zhì)粒的蟲熒光素酶（Luciferease）的表達(dá)，以評(píng)價(jià)啟動(dòng)子的心肌特異性。pGL3... 

【文章來(lái)源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第1章 前言
    1.1 缺血性心臟病
    1.2 治療基因的選擇
    1.3 傳遞載體的選擇
        1.3.1 病毒載體
        1.3.2 非病毒載體
    1.4 基因表達(dá)的調(diào)控策略
        1.4.1 基因在靶組織特異性表達(dá)的調(diào)控
        1.4.2 基因在缺氧條件特異表達(dá)的調(diào)控
    1.5 立題依據(jù)及實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        1.5.1 立題依據(jù)
        1.5.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)儀器、試劑與材料
        2.1.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 心肌靶向重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.1 pGL3-epo-α-MHC-Luc 的構(gòu)建
        2.2.2 pGL3-epo-α-MHC-RFP 的構(gòu)建
        2.2.3 pGL3-α-MHC-Luc 的構(gòu)建
        2.2.4 pGL3-α-MHC-RFP 的構(gòu)建
    2.3 心肌靶向重組質(zhì)粒的表征
        2.3.1 大鼠心肌細(xì)胞系的培養(yǎng)
        2.3.2 心肌靶向重組質(zhì)粒的表達(dá)
        2.3.3 缺氧調(diào)控性質(zhì)表征
        2.3.4 心肌特異性表征
    2.4 NLS 基因傳遞載體
        2.4.1 DNA/NLS 的制備及性質(zhì)考察
        2.4.2 DNA/NLS/Lipo2000 的制備及優(yōu)化
    2.5 LDH 基因傳遞載體
        2.5.1 LDH 的制備及優(yōu)化
        2.5.2 LDH 的結(jié)構(gòu)表征
        2.5.3 LDH 穩(wěn)定性考察
        2.5.4 DNA/LDH 的制備及優(yōu)化
第3章 結(jié)果與討論
    3.1 心肌靶向重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.1.1 pGL3-epo-α-MHC-Luc 的構(gòu)建
        3.1.2 pGL3-epo-α-MHC-RFP 的構(gòu)建
        3.1.3 pGL3-α-MHC-Luc 的構(gòu)建
        3.1.4 pGL3-α-MHC-RFP 的構(gòu)建
    3.2 心肌靶向重組質(zhì)粒的表征
        3.2.1 心肌靶向重組質(zhì)粒的表達(dá)
        3.2.2 缺氧調(diào)控性質(zhì)表征
        3.2.3 心肌特異性表征
    3.3 NLS 基因傳遞載體
        3.3.1 DNA/NLS 的制備及性質(zhì)考察
        3.3.2 DNA/NLS/Lipo2000 的制備及優(yōu)化
    3.4 LDH 基因傳遞載體
        3.4.1 LDH 的制備及優(yōu)化
        3.4.2 LDH 結(jié)構(gòu)表征
        3.4.3 LDH 的穩(wěn)定性考察
        3.4.4 DNA/LDH 的制備及優(yōu)化
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介
致謝



本文編號(hào)：3561424