本文關(guān)鍵詞：鈉氫交換體NHE1在高鹽誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞增殖和鈣離子調(diào)控中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本課題旨在觀察鈉氫交換體(Na+/H+exchanger,NHE1)在高鹽誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞增殖中的表達(dá),并初步探討其在高鹽誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞增殖中作用。方法:(1)鹽濃度、NHE1阻斷劑(Amiloride)濃度及作用時間的確定:取大鼠腹主動脈采用組織塊貼壁法培養(yǎng)大鼠血管平滑肌細(xì)胞(VSMC),實驗分為對照組(Na+濃度139mmol/L),高鹽組(Na+濃度159mmol/L),高鹽+阻斷劑組(Na+濃度159mmol/l+Amiloride濃度10μM、20μM、30μM、40μM)。利用MTT比色法檢測不同濃度的Amiloride對高鹽干預(yù)的VSMC增殖的影響,以確定Amiloride的最佳干預(yù)濃度。(2)效應(yīng)和機(jī)制分析:VSMC無血清同步化24h后,實驗分為對照組(Na+濃度139mmol/L),對照+阻斷劑組(Na+濃度139mmol/L+Amiloride濃度30μM),高鹽組(Na+濃度159mmol/L),高鹽+阻斷劑組(Na+濃度159mmol/l+Amiloride濃度30μM)繼續(xù)培養(yǎng)72h后進(jìn)行以下實驗:超微量Ca~(2+)-ATPase測試試劑盒測定細(xì)胞膜鈣泵活性;細(xì)胞免疫熒光、real-time PCR及Western Blot檢測大鼠VSMC中NHE1、NCX-1、PMCA4基因與蛋白表達(dá),應(yīng)用比率熒光法檢測各組VSMC內(nèi)鈣離子的濃度及細(xì)胞內(nèi)p H值。結(jié)果:MTT法顯示高鹽+阻斷劑組(Amiloride濃度為30μM)增殖能力較高鹽組明顯減弱。與對照組比較,高鹽組NHE1、NCX-1、PCNA蛋白表達(dá)增加,PMCA4蛋白表達(dá)降低,細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度及p H值明顯增加,(P㩳0.05)。同時,NHE1、NCX-1 m RNA表達(dá)增加(P㩳0.05),PMCA4 m RNA表達(dá)無明顯差別(P㧐0.05);與高鹽組相比,高鹽+阻斷劑組NHE1、NCX-1、PCNA蛋白以及NHE1、NCX-1 m RNA表達(dá)下調(diào)(P㩳0.05),PMCA4蛋白和m RNA表達(dá)無明顯差別(P㧐0.05),細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度及細(xì)胞內(nèi)p H值明顯降低(P㩳0.05)。結(jié)論:(1)高鹽能誘導(dǎo)大鼠血管平滑肌細(xì)胞發(fā)生增殖,并且細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度和p H值升高;(2)高鹽上調(diào)了NHE1的表達(dá),阻斷細(xì)胞NHE1的表達(dá)能夠部分抑制高鹽誘導(dǎo)VSMC的增殖,降低細(xì)胞內(nèi)NCX-1的表達(dá)及細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度和p H值。
【關(guān)鍵詞】：高鹽 血管平滑肌細(xì)胞 鈉氫交換體 阿米洛利
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R544.1
【目錄】：

• 中英縮略詞對照表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 材料與方法11-23
• 結(jié)果23-37
• 討論37-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-44
• 綜述44-51
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 致謝51-52
• 作者簡介52

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：352011