背景和目的:動(dòng)脈粥樣硬化（Atherosclerosis,AS）是一種慢性炎癥反應(yīng),會(huì)增加患心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn),而心血管疾病是全球范圍內(nèi)死亡的主要原因。其病理學(xué)特征主要是內(nèi)皮功能障礙以及在血管內(nèi)膜上逐漸積累脂質(zhì)、壞死細(xì)胞碎片和細(xì)胞外基質(zhì)蛋白,最終導(dǎo)致血管閉塞或血栓形成并發(fā)癥。目前在動(dòng)脈粥樣硬化病變中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)許多免疫細(xì)胞浸潤(rùn),在對(duì)抗原性物質(zhì)的局部炎癥或免疫應(yīng)答中這些免疫細(xì)胞被激活。并且在動(dòng)脈粥樣硬化血管的局部組織和周圍系統(tǒng)中發(fā)現(xiàn)包括腫瘤壞死因子（Tumor necrosis factor,TNF-α）,白細(xì)胞介素1a（IL-1a）,白細(xì)胞介素1b（IL-1b）,白細(xì)胞介素4（IL-4）、干擾素-c（IFN-c）和白細(xì)胞介素18（IL-18）等炎癥細(xì)胞因子。其中動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中IL-18的表達(dá)水平較高,IL-18通過與靶細(xì)胞膜上特異性受體結(jié)合激活相應(yīng)的信號(hào)途徑而發(fā)揮作用,并且IL-18結(jié)合蛋白（Interleukin 18 binding protein,IL-18BP）能夠降低動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成風(fēng)險(xiǎn),提示IL-18在動(dòng)脈硬化發(fā)病中可能發(fā)揮重要作用。IL-18處理血管平滑肌細(xì)胞（vasc... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

不同濃度IL-18對(duì)VSMC細(xì)胞中TNF-α、IL-6、IL-8的mRNA表達(dá)水平的影響（*p<0.05）；b不同時(shí)間IL-18（30ng/ml）對(duì)VSMC細(xì)胞中TNF-α、IL-6、IL-8的mRNA表達(dá)水

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文30經(jīng)過ELISA檢測(cè)分析IL-18對(duì)VSMC細(xì)胞中TNF-α、IL-6、IL-8的蛋白水平表達(dá)的影響。圖2結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，IL-18（30ng/ml）能夠顯著增加VSMC上清液中TNF-α、IL-6、IL-8的蛋白質(zhì)水平的表達(dá)，且與空白對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05，F(xiàn)TNF-α=74.008，F(xiàn)IL-6=274.065，F(xiàn)IL-8=168.253，n=3）。圖2IL-18處理后VSMC中TNF-α、IL-6、IL-8的蛋白水平表達(dá)的影響（n=3,*p<0.05）Figure2EffectofTNF-α,IL-6,andIL-8proteinexpressioninVSMCsafterIL-18treatment（n=3,*p<0.05）3.3Westernblot分析IL-18對(duì)VSMC細(xì)胞信號(hào)通路的影響為了進(jìn)一步探討IL-18對(duì)VSMC細(xì)胞IL-6、IL-8、TNF-α調(diào)控的可能機(jī)制，我們分析了IL-18對(duì)細(xì)胞中p38MAPK及PI3K/AKT信號(hào)通路的影響。Westernblot的結(jié)果分析顯示，IL-18（30ng/ml）單獨(dú)處理0、10、30、60、120min后分別pp38MAPK在60min、pAKT在120min蛋白質(zhì)表達(dá)水平達(dá)到峰值，與空白對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05，n=3）；而對(duì)AKT的表達(dá)沒有顯著影響（n=3，見圖3）。3.2ELISA法分析蛋白水平表達(dá)

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文31圖3IL-18對(duì)VSMC細(xì)胞中p38MAPK及PI3K/AKT信號(hào)通路的影響Figure3EffectofIL-18onp38MAPKandPI3K/AKTsignalingpathwayinVSMCcells3.4IL-18刺激VSMC后TNF-α、IL-6、IL-8的蛋白的表達(dá)水平與p38MAPK及PI3K/AKT信號(hào)通路相關(guān)性的研究為了進(jìn)一步探討IL-18增加TNF-α、IL-6、IL-8的表達(dá)是否與p38MAPK及PI3K/AKT信號(hào)途徑激活激活相關(guān)，特異性抑制劑SB203580(10μM，p38MAPK抑制劑)及LY294002(50μM,PI3K/AKT抑制劑)處理VSMC細(xì)胞并分析其對(duì)IL-18誘導(dǎo)細(xì)胞因子表達(dá)的影響。圖4a,b結(jié)果顯示，SB203580及LY294002分別特異性部分阻斷IL-18激活的p38MAPK及PI3K/AKT信號(hào)途徑。如圖5ELISA實(shí)驗(yàn)分析顯示，特異性抑制劑SB203580(10μM，p38MAPK抑制劑)能部分阻斷IL-18誘導(dǎo)的TNF-α、IL-6、IL-8表達(dá)，與空白對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05，n=3）；特異性抑制劑LY294002(50μM,PI3K/AKT抑制劑)能部分阻斷IL-18誘導(dǎo)的TNF-α、IL-6、IL-8表達(dá)，與空白對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05，n=3）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]IL-18和TNF-α增加3T3-L1脂肪細(xì)胞及RAW264.7巨噬細(xì)胞IL-18Rβ的水平[J]. 金國(guó)璽,張燕,畢婭欣,于磊.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2015(09)



本文編號(hào)：3517153