研究背景與目的:血管內(nèi)再狹窄是經(jīng)皮冠狀動脈介入治療（percutaneous coronary intervention,PCI）術(shù)后,血管內(nèi)皮創(chuàng)傷而再次發(fā)生管腔狹窄、阻塞的病理過程。盡管隨著藥物支架和藥物球囊的出現(xiàn)使再狹窄發(fā)生率從最初的10%-30%降低至目前的5%左右,大大改善了冠心病患者預(yù)后,使冠心病的治療發(fā)生里程碑式改變,但再狹窄的防治始終未獲得突破性進展,特別是在糖尿病和復(fù)雜病變?nèi)鐝浡∽�、小血管、分叉病變等尤為突�?再狹窄率可達20%以上,并且藥物洗脫支架或球囊并不能用于治療所有的新生內(nèi)膜斑塊的形成。因此,解決血管內(nèi)再狹窄成為刻不容緩的重大課題。間充質(zhì)干細胞（mesenchymal stem cells,MSC）是一種多能干細胞,他們可以從大量的結(jié)締組織中獲得,如:骨髓,脂肪、臍帶血等,具有自我更新的特性,可分化為多種類型的細胞,如成骨細胞、脂肪細胞、神經(jīng)細胞、平滑肌細胞（smooth muscle cells,SMC）等。MSC多能分化及易于擴大培養(yǎng)的特性使得其治療研究倍受關(guān)注。作為細胞之間傳遞功能物質(zhì)的橋梁,外泌體在細胞間相互作用的微環(huán)境中受到越來越廣泛的重視。外泌體作... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

MSC表面標志物鑒定

西南大學(xué)碩士學(xué)位論文16⑤以300×g離心力離心5min，去除上清，每組各加200μLPBS，隨后分別加入1μLCD29、1μLCD90、1μLCD11b和三者各1μL并輕輕混勻（空白組不作處理）；⑥室溫條件下避光孵育15-20min，以300×g離心力離心5min去除上清，加600μL/管PBS，緩慢混勻，上機檢測；⑦檢測前用空白組調(diào)節(jié)電壓，單染組調(diào)節(jié)補償，隨后檢測三染組。3.4實驗結(jié)果3.4.1MSC形態(tài)特征培養(yǎng)至2-7代的MSC用于后續(xù)實驗，第一代（passage1,P1）和第三代（passage3,P3）細胞形態(tài)如圖3.1所示，P1的MSC形態(tài)具有觸角等針狀形狀出現(xiàn)，P3的MSC呈現(xiàn)出梭形、紡錘狀不規(guī)則形態(tài)。圖3.1MSC形態(tài)特征3.4.2流式細胞術(shù)鑒定流式細胞術(shù)分析提取的MSC表面標志物CD29、CD90和CD11b的表達情況，如圖3.2所示。以空白組細胞為陰性對照，鑒定細胞CD29的陽性率為99.6%，CD90的陽性率為99.8%，CD11b的陽性率為0.17%。圖3.2MSC表面標志物鑒定3.5討論

西南大學(xué)碩士學(xué)位論文24②加2mL胎牛血清以中止過度染色，將標記的外泌體以110000×g離心力超速離心1h以去除殘余染料，隨后將外泌體沉淀重懸于200μLPBS中，于4℃冰箱避光保存，可用于后續(xù)的攝取實驗；③用共聚焦培養(yǎng)皿培養(yǎng)EC，將標記后的外泌體（20μg/mL的作用濃度）添加到EC中，37℃細胞培養(yǎng)箱避光孵育8h；④小心去除細胞培養(yǎng)液，用PBS洗滌1-2次；⑤每個樣品中加入1mL4%多聚甲醛固定液，避光孵育10min；⑥吸去固定液，用PBS洗滌1-2次，每次2min，水平搖床輕微振蕩；⑦每個樣品中加入500μL1×Hoechst33342染液，避光孵育5min；⑧吸去1×Hoechst33342染液，用PBS洗滌三次，每次2min，水平搖床輕微振蕩；⑨最后在共聚焦皿中加入1mLPBS（以免細胞完全干燥），避光保存，共聚焦顯微鏡觀察對照組及實驗組的熒光顯色情況。4.4實驗結(jié)果4.4.1MSC-Exo透射電子顯微鏡分析結(jié)果通過TEM，我們在不同的倍數(shù)下觀察提取的MSC-Exo的形狀，如圖4.1所示，黑色箭頭所指即外泌體，從圖中可知MSC-Exo呈不規(guī)則橢圓形、類似盤狀，并且大小不一。圖4.1MSC-Exo形態(tài)特征4.4.2MSC-Exo粒徑分析結(jié)果

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Stem cell-derived exosomes as a therapeutic tool for cardiovascular disease[J]. Etsu Suzuki,Daishi Fujita,Masao Takahashi,Shigeyoshi Oba,Hiroaki Nishimatsu.  World Journal of Stem Cells. 2016(09)



本文編號：3515922