第一部分:磁性分離法分離培養(yǎng)小鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞目的:通過磁性分離法分離小鼠原代肺動脈平滑肌細(xì)胞,提高細(xì)胞分離的成功率,為體外培養(yǎng)原代肺動脈平滑肌細(xì)胞并構(gòu)建低氧模型打下良好的實驗基礎(chǔ),同時對小鼠原代肺動脈平滑肌細(xì)胞的分離方法提出新思路和新參考。方法:1.選取體重20g左右的健康成年C57BL/6J小鼠,在無菌條件下采用腹腔注射4%水合氯醛（0.01ml/g）對小鼠進(jìn)行麻醉。2.麻醉后,解剖小鼠使其暴露腎臟并切斷腎動脈除血,之后暴露胸腔,自右室向肺動脈方向緩慢注入滅菌的PBS液3-5ml,直到肺變白,用鈍性分離器分離暴露氣管。3.向肺右室內(nèi)緩慢注入PA agarose 3-5ml,直到肺變成灰色。將Lung agarose 2-3ml注入氣管內(nèi),直到凝膠充滿肺組織。取走心肺,置入冰冷PBS液約5分鐘,使凝膠凝固。4.棄掉肺動脈主干及左右肺動脈分支,切碎肺組織,移入50ml滅菌離心管中,連接磁鐵,此時含鐵組織會移至靠近磁鐵的離心管管壁上,吸出PBS液,用滅菌的PBS液5ml清洗肺組織3次。5.向離心管中加入6ml膠原酶溶液,倒入培養(yǎng)皿,37℃消化1小時。1小時后,用20ml注射器反復(fù)抽吸肺... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

小鼠的麻醉與解剖

圖 2-2-1 免疫熒光鑒定肺動脈平滑肌細(xì)胞（×600）。A.藍(lán)色為細(xì)胞核，B.綠色熒in 表達(dá)陽性，C.紅色熒光表示 smooth muscle myosin heavy chain 陽性，D 為 A圖的疊加。3 討 論脈平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于肺血管疾病等方面的研究，壓發(fā)生發(fā)展機(jī)制的重要手段。Davies P[34]曾報道低氧 5 天引起大鼠滑肌細(xì)胞病理性肥大，而此時直徑大于 100 m 的肺動脈平滑肌還沒此，肺小動脈的平滑肌細(xì)胞與肺大動脈的平滑肌細(xì)胞生物學(xué)特性是不小動脈平滑肌細(xì)胞是肺動脈高壓發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵因素[35]，所以能遠(yuǎn)端的肺小動脈組織，對實驗的意義將會更大。肺小動脈平滑肌細(xì)可以說是眾多肺動脈高壓疾病研究的基礎(chǔ)，關(guān)系到實驗?zāi)Ｐ偷慕?

CCK-8 檢測不同低氧處理時間下肺動脈平滑肌細(xì)胞增，Mean±SD，n=6，*P>0.05 vs Normoxia 24h，#P>0.05 vs Normoxia 48h，aP<0.05 vs Normoxia 72h。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3368075