本研究旨在探索脂肪細胞因子內(nèi)臟脂肪素（Visfatin）能否誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細胞（VEC）發(fā)生炎癥及壞死性凋亡（Necroptosis）,并初步探討其機制。體外分離培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVECs）,單獨使用Visfatin刺激或在阻斷氧化低密度脂蛋白受體1（LOX-1）后給予Visfatin刺激,采用Western blot、RT-PCR、免疫細胞化學(xué)法、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、MTT、流式細胞化學(xué)法等觀察細胞炎癥及Necroptosis的發(fā)生情況。結(jié)果顯示,100 ng/mL的Visfatin作用24 h可誘導(dǎo)HUVECs中單核細胞趨化蛋白-1（MCP-1）和LOX-1的mRNA及蛋白水平表達顯著上調(diào);而LOX-1抑制劑聚肌苷酸預(yù)處理可明顯降低Visfatin誘導(dǎo)的MCP-1表達。另外,100 ng/mL的Visfatin作用24 h可明顯誘導(dǎo)HUVECs中出現(xiàn)壞死樣特征,且Necroptosis特異性基因BMF的mRNA表達顯著增加,細胞增殖率降低;而聚肌苷酸預(yù)處理后,細胞增殖率升高,BMF的基因表達下調(diào)。實驗結(jié)果提示,Visfatin通過LOX-1介導(dǎo),引起了血管內(nèi)皮細胞炎... 

【文章來源】：生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志. 2020,37(05)北大核心EICSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

Visfatin刺激誘導(dǎo)HUVECs中LOX-1的表達a.分離培養(yǎng)的HUVECs，圖中標尺=100μm;b-c.LOX-1的基因（b）和蛋白（c）表達；d.免疫細胞化學(xué)法檢測HUVECs中LOX-1的蛋白表達。*P<0.05 vs control,#P<0.05 vs visfatin,n=3

為深入探究Visfatin對細胞發(fā)生Necroptosis和凋亡的影響及其可能機制，我們應(yīng)用RT-PCR方法對Visfatin、AngⅡ以及Leptin干預(yù)后細胞中Necroptosis特異性基因BMF[16]和凋亡特異性基因Caspase3的基因表達進行檢測。如圖4所示，與對照組相比，Visfatin可明顯上調(diào)HUVECs細胞中BMF的m RNA表達（P<0.05），但對凋亡特異性基因Caspase3表達則無明顯的上調(diào)作用。而AngⅡ、Leptin 16μg/m L組可以顯著上調(diào)Caspase3的基因表達（P<0.05）。此外，流式細胞化學(xué)法檢測結(jié)果也顯示，Visfatin刺激組中細胞并無明顯凋亡峰，AngⅡ刺激組中出現(xiàn)了明顯的凋亡峰（見表2）。說明此濃度的Visfatin可誘導(dǎo)細胞發(fā)生Necroptosis，而非凋亡。圖3 Visfatin對HUVECs超微結(jié)構(gòu)變化的影響（圖中標尺=100 nm)

圖2 Visfatin通過LOX-1促進HUVECs中炎癥因子MCP-1的表達a和c.MCP-1的基因（a）和蛋白（c）表達；b.ELISA法檢測HUVECs分泌MCP-1蛋白的變化。*P<0.05 vs control,#P<0.05 vs visfatin,n=3進一步實驗中我們發(fā)現(xiàn)，加用LOX-1特異性抑制劑Polyinosinic acid或Necroptosis特異性抑制劑Necrostatin-1(Nec-1）后，與單純Visfatin刺激組相比，BMF的基因表達水平顯著降低，而Caspase3的表達卻出現(xiàn)明顯增加（P<0.05）（見圖4）。流式細胞化學(xué)法結(jié)果顯示，Polyinosinic acid+visfatin組中，凋亡峰較Visfatin單獨刺激組明顯（見表2）。以上結(jié)果說明，LOX-1參與介導(dǎo)Visfatin誘導(dǎo)HUVECs發(fā)生Necroptosis。


本文編號：3321584