本研究旨在探索脂肪細(xì)胞因子內(nèi)臟脂肪素（Visfatin）能否誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞（VEC）發(fā)生炎癥及壞死性凋亡（Necroptosis）,并初步探討其機(jī)制。體外分離培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）,單獨(dú)使用Visfatin刺激或在阻斷氧化低密度脂蛋白受體1（LOX-1）后給予Visfatin刺激,采用Western blot、RT-PCR、免疫細(xì)胞化學(xué)法、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、MTT、流式細(xì)胞化學(xué)法等觀察細(xì)胞炎癥及Necroptosis的發(fā)生情況。結(jié)果顯示,100 ng/mL的Visfatin作用24 h可誘導(dǎo)HUVECs中單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）和LOX-1的mRNA及蛋白水平表達(dá)顯著上調(diào);而LOX-1抑制劑聚肌苷酸預(yù)處理可明顯降低Visfatin誘導(dǎo)的MCP-1表達(dá)。另外,100 ng/mL的Visfatin作用24 h可明顯誘導(dǎo)HUVECs中出現(xiàn)壞死樣特征,且Necroptosis特異性基因BMF的mRNA表達(dá)顯著增加,細(xì)胞增殖率降低;而聚肌苷酸預(yù)處理后,細(xì)胞增殖率升高,BMF的基因表達(dá)下調(diào)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,Visfatin通過(guò)LOX-1介導(dǎo),引起了血管內(nèi)皮細(xì)胞炎... 

【文章來(lái)源】：生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志. 2020,37(05)北大核心EICSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【部分圖文】：

Visfatin刺激誘導(dǎo)HUVECs中LOX-1的表達(dá)a.分離培養(yǎng)的HUVECs，圖中標(biāo)尺=100μm;b-c.LOX-1的基因（b）和蛋白（c）表達(dá)；d.免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)HUVECs中LOX-1的蛋白表達(dá)。*P<0.05 vs control,#P<0.05 vs visfatin,n=3

為深入探究Visfatin對(duì)細(xì)胞發(fā)生Necroptosis和凋亡的影響及其可能機(jī)制，我們應(yīng)用RT-PCR方法對(duì)Visfatin、AngⅡ以及Leptin干預(yù)后細(xì)胞中Necroptosis特異性基因BMF[16]和凋亡特異性基因Caspase3的基因表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。如圖4所示，與對(duì)照組相比，Visfatin可明顯上調(diào)HUVECs細(xì)胞中BMF的m RNA表達(dá)（P<0.05），但對(duì)凋亡特異性基因Caspase3表達(dá)則無(wú)明顯的上調(diào)作用。而AngⅡ、Leptin 16μg/m L組可以顯著上調(diào)Caspase3的基因表達(dá)（P<0.05）。此外，流式細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)結(jié)果也顯示，Visfatin刺激組中細(xì)胞并無(wú)明顯凋亡峰，AngⅡ刺激組中出現(xiàn)了明顯的凋亡峰（見(jiàn)表2）。說(shuō)明此濃度的Visfatin可誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生Necroptosis，而非凋亡。圖3 Visfatin對(duì)HUVECs超微結(jié)構(gòu)變化的影響（圖中標(biāo)尺=100 nm)

圖2 Visfatin通過(guò)LOX-1促進(jìn)HUVECs中炎癥因子MCP-1的表達(dá)a和c.MCP-1的基因（a）和蛋白（c）表達(dá)；b.ELISA法檢測(cè)HUVECs分泌MCP-1蛋白的變化。*P<0.05 vs control,#P<0.05 vs visfatin,n=3進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)，加用LOX-1特異性抑制劑Polyinosinic acid或Necroptosis特異性抑制劑Necrostatin-1(Nec-1）后，與單純Visfatin刺激組相比，BMF的基因表達(dá)水平顯著降低，而Caspase3的表達(dá)卻出現(xiàn)明顯增加（P<0.05）（見(jiàn)圖4）。流式細(xì)胞化學(xué)法結(jié)果顯示，Polyinosinic acid+visfatin組中，凋亡峰較Visfatin單獨(dú)刺激組明顯（見(jiàn)表2）。以上結(jié)果說(shuō)明，LOX-1參與介導(dǎo)Visfatin誘導(dǎo)HUVECs發(fā)生Necroptosis。


本文編號(hào)：3321584