發(fā)布時間：2021-08-04 15:27

　　目的:探討血管緊張素Ⅱ1型受體相關蛋白（Angtiotensin Ⅱ type 1 receptor associated protein,ATRAP）對體外培養(yǎng)的血管平滑肌細胞（Vascular smooth muscular cell,VSMC）凋亡的影響及相關機制;腺病毒過表達的ATRAP對頸動脈球囊損傷引起的內(nèi)膜增生的作用。從而豐富ATRAP抑制頸動脈內(nèi)膜增生的作用機制,并為臨床治療頸動脈術后再狹窄提供新的治療方向。方法:體外實驗:1 VSMC的獲得、培養(yǎng)與鑒定VSMC購自廣州吉妮歐生物科技有限公司。取自大鼠胸主動脈段組織,酶消化法獲得。在添加10%胎牛血清（FBS）的DMEM的培養(yǎng)基中常規(guī)培養(yǎng),在leica倒置顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài)、匯合度等;用α-SM-actin鑒定VSMC細胞表型。2 TUNEL檢測腺病毒過表達的ATRAP對VSMC凋亡的影響2.1構建ATRAP過表達腺病毒與對照病毒由漢恒生物科技（上海）有限公司構建ATRAP的腺病毒過表達載體并提供對照腺病毒。2.2 TUNEL測定ATRAP過表達對VSMC凋亡的影響VSMC培養(yǎng)至5-7代,匯合度達90%,胰酶消化后... 

【文章來源】：鄭州大學河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．３?ａ－ＳＭ－ａｃｔｉｎ鑒定大鼠血管平滑肌細胞??

３．１?ＶＳＭＧ的獲得、培養(yǎng)與鑒定??倒置熒光纖維鏡下可見細胞貼壁生長，單個細胞呈細長梭形，細胞生長致??密處平行排列成束，典型的“峰谷狀”生長。（圖１．２）用ａ－ＳＭ－ａｃｔｉｎ染色后，通??過倒置熒光顯微鏡鑒定，血管平滑肌細胞呈綠色熒光。（圖１．３）??圖１．２光鏡下大鼠ＶＳＭＣ典型的“峰谷狀”生長??ｗｉｉｉ??圖１．３?ａ－ＳＭ－ａｃｔｉｎ鑒定大鼠血管平滑肌細胞??３．?２腺病毒過表達ＡＴＲＡＰ促進離體的大鼠ＶＳＭＣ凋亡??２４??

３．?２．?１腺病毒轉(zhuǎn)染效率??結果發(fā)現(xiàn)腺病毒轉(zhuǎn)染ＶＳＭＣ?２４ｈ后，Ａｄｖ．ＡＴＲＡＰ組和Ａｄｖ．ＧＦＰ組轉(zhuǎn)染率達??９０％以上。（圖１．４）??Ａｄｖ．ＡＴＲＡＰ?Ａｄｖ．ＧＦＰ??圖１．４腺病毒轉(zhuǎn)染ＶＳＭＣ的轉(zhuǎn)染效率圖??３．?２．?２腺病毒轉(zhuǎn)染２４ｈ后，檢測ＡＴＲＡＰ蛋白表達情況，結果顯示，ＡＴＲＡＰ??高表達，而且沒有與ＧＦＰ形成融合蛋白。??Ａｄｖ．ＧＦＰ?Ａｄｖ．ＡＴＲＡＰ??ＧＦＰ?寒一??ＡＴＲＡＰ??ｇａｐｄｈ??圖１．５腺病毒轉(zhuǎn)染后蛋白ＡＴＲＡＰ的表達??３．?２．?３?ＴＵＮＥＬ檢測腺病毒轉(zhuǎn)染過表達的ＡＴＲＡＰ對離體ＶＳＭＣ凋亡的影響??為了確定ＡＴＲＡＰ參與調(diào)控ＶＳＭＣ凋亡的吋能性，我們利用ＴＵＮＥＬ法檢測??ＡＴＲＡＰ過表達對體外ＶＳＭＣ凋亡的影響。腺病毒轉(zhuǎn)染ＡＴＲＡＰ至培養(yǎng)的ＶＳＭＣ?２４??小時，更換０．１％?ＦＢＳ的高糖ＤＭＥＭ培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)２４ｈ，繼而加入Ａｎｇｌｌ繼續(xù)培??養(yǎng)２４小時后進行ＴＵＮＥＬ／ＤＡＰＩ染色發(fā)現(xiàn)，Ａｄｖ．ＡＴＲＡＰ＋Ａｎｇ?ＩＩ?相比Ａｄｖ．ＧＦＰ＋Ａｎｇ??ＩＩ?組，ＶＳＭＣ凋亡率顯著增加（１１．５０?±１．６６％?ｖｓ?１．１３?±０．２７％，尸?＜０．０５），??Ａｄｖ．ＡＴＲＡＰ組樸丨比Ａｄｖ．ＧＦＰ組，ＶＳＭＣ凋亡率顯著增加（１３．１７±０．４８％ｖｓ?１．２０土??２５??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]INHIBITORY EFFECT OF ANGIOTENSIN II TYPE 1 RECEPTOR-ASSOCIATED PROTEIN ON VASCULAR SMOOTH MUSCLE CELL GROWTH AND NEOINTIMAL FORMATION[J]. Zhen Li1,2, Zhong-gao Wang1,3, Xiu Chen1, and Xiao-dong Chen21Department of Vascular Surgery, the Second Artillery General Hospital, Beijing 1000882Department of General Lab and Vascular Surgery, the First Affiliated Hospital of Guangdong Medical College, Zhanjiang 5240013Department of Surgery, Vascular Institute and Xuanwu Hospital, Capital University ofMedical Sciences, Beijing 100053.  Chinese Medical Sciences Journal. 2007(01)
[2]血管緊張素-（1-7）對大鼠血管平滑肌細胞PKC和ERK1/2的抑制作用[J]. 鐘健,祝之明,楊永健.  生理學報. 2001(05)



本文編號：3321947