發(fā)布時(shí)間：2021-08-04 15:27

　　目的:探討血管緊張素Ⅱ1型受體相關(guān)蛋白（Angtiotensin Ⅱ type 1 receptor associated protein,ATRAP）對(duì)體外培養(yǎng)的血管平滑肌細(xì)胞（Vascular smooth muscular cell,VSMC）凋亡的影響及相關(guān)機(jī)制;腺病毒過表達(dá)的ATRAP對(duì)頸動(dòng)脈球囊損傷引起的內(nèi)膜增生的作用。從而豐富ATRAP抑制頸動(dòng)脈內(nèi)膜增生的作用機(jī)制,并為臨床治療頸動(dòng)脈術(shù)后再狹窄提供新的治療方向。方法:體外實(shí)驗(yàn):1 VSMC的獲得、培養(yǎng)與鑒定VSMC購自廣州吉妮歐生物科技有限公司。取自大鼠胸主動(dòng)脈段組織,酶消化法獲得。在添加10%胎牛血清（FBS）的DMEM的培養(yǎng)基中常規(guī)培養(yǎng),在leica倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)、匯合度等;用α-SM-actin鑒定VSMC細(xì)胞表型。2 TUNEL檢測腺病毒過表達(dá)的ATRAP對(duì)VSMC凋亡的影響2.1構(gòu)建ATRAP過表達(dá)腺病毒與對(duì)照病毒由漢恒生物科技（上海）有限公司構(gòu)建ATRAP的腺病毒過表達(dá)載體并提供對(duì)照腺病毒。2.2 TUNEL測定ATRAP過表達(dá)對(duì)VSMC凋亡的影響VSMC培養(yǎng)至5-7代,匯合度達(dá)90%,胰酶消化后... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１．３?ａ－ＳＭ－ａｃｔｉｎ鑒定大鼠血管平滑肌細(xì)胞??

３．１?ＶＳＭＧ的獲得、培養(yǎng)與鑒定??倒置熒光纖維鏡下可見細(xì)胞貼壁生長，單個(gè)細(xì)胞呈細(xì)長梭形，細(xì)胞生長致??密處平行排列成束，典型的“峰谷狀”生長。（圖１．２）用ａ－ＳＭ－ａｃｔｉｎ染色后，通??過倒置熒光顯微鏡鑒定，血管平滑肌細(xì)胞呈綠色熒光。（圖１．３）??圖１．２光鏡下大鼠ＶＳＭＣ典型的“峰谷狀”生長??ｗｉｉｉ??圖１．３?ａ－ＳＭ－ａｃｔｉｎ鑒定大鼠血管平滑肌細(xì)胞??３．?２腺病毒過表達(dá)ＡＴＲＡＰ促進(jìn)離體的大鼠ＶＳＭＣ凋亡??２４??

３．?２．?１腺病毒轉(zhuǎn)染效率??結(jié)果發(fā)現(xiàn)腺病毒轉(zhuǎn)染ＶＳＭＣ?２４ｈ后，Ａｄｖ．ＡＴＲＡＰ組和Ａｄｖ．ＧＦＰ組轉(zhuǎn)染率達(dá)??９０％以上。（圖１．４）??Ａｄｖ．ＡＴＲＡＰ?Ａｄｖ．ＧＦＰ??圖１．４腺病毒轉(zhuǎn)染ＶＳＭＣ的轉(zhuǎn)染效率圖??３．?２．?２腺病毒轉(zhuǎn)染２４ｈ后，檢測ＡＴＲＡＰ蛋白表達(dá)情況，結(jié)果顯示，ＡＴＲＡＰ??高表達(dá)，而且沒有與ＧＦＰ形成融合蛋白。??Ａｄｖ．ＧＦＰ?Ａｄｖ．ＡＴＲＡＰ??ＧＦＰ?寒一??ＡＴＲＡＰ??ｇａｐｄｈ??圖１．５腺病毒轉(zhuǎn)染后蛋白ＡＴＲＡＰ的表達(dá)??３．?２．?３?ＴＵＮＥＬ檢測腺病毒轉(zhuǎn)染過表達(dá)的ＡＴＲＡＰ對(duì)離體ＶＳＭＣ凋亡的影響??為了確定ＡＴＲＡＰ參與調(diào)控ＶＳＭＣ凋亡的吋能性，我們利用ＴＵＮＥＬ法檢測??ＡＴＲＡＰ過表達(dá)對(duì)體外ＶＳＭＣ凋亡的影響。腺病毒轉(zhuǎn)染ＡＴＲＡＰ至培養(yǎng)的ＶＳＭＣ?２４??小時(shí)，更換０．１％?ＦＢＳ的高糖ＤＭＥＭ培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)２４ｈ，繼而加入Ａｎｇｌｌ繼續(xù)培??養(yǎng)２４小時(shí)后進(jìn)行ＴＵＮＥＬ／ＤＡＰＩ染色發(fā)現(xiàn)，Ａｄｖ．ＡＴＲＡＰ＋Ａｎｇ?ＩＩ?相比Ａｄｖ．ＧＦＰ＋Ａｎｇ??ＩＩ?組，ＶＳＭＣ凋亡率顯著增加（１１．５０?±１．６６％?ｖｓ?１．１３?±０．２７％，尸?＜０．０５），??Ａｄｖ．ＡＴＲＡＰ組樸丨比Ａｄｖ．ＧＦＰ組，ＶＳＭＣ凋亡率顯著增加（１３．１７±０．４８％ｖｓ?１．２０土??２５??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]INHIBITORY EFFECT OF ANGIOTENSIN II TYPE 1 RECEPTOR-ASSOCIATED PROTEIN ON VASCULAR SMOOTH MUSCLE CELL GROWTH AND NEOINTIMAL FORMATION[J]. Zhen Li1,2, Zhong-gao Wang1,3, Xiu Chen1, and Xiao-dong Chen21Department of Vascular Surgery, the Second Artillery General Hospital, Beijing 1000882Department of General Lab and Vascular Surgery, the First Affiliated Hospital of Guangdong Medical College, Zhanjiang 5240013Department of Surgery, Vascular Institute and Xuanwu Hospital, Capital University ofMedical Sciences, Beijing 100053.  Chinese Medical Sciences Journal. 2007(01)
[2]血管緊張素-（1-7）對(duì)大鼠血管平滑肌細(xì)胞PKC和ERK1/2的抑制作用[J]. 鐘健,祝之明,楊永健.  生理學(xué)報(bào). 2001(05)



本文編號(hào)：3321947