目的：研究1-磷酸鞘氨醇（sphingosine-1-phosphate, S1P）后適應對H9c2心肌細胞缺氧/復氧損傷的保護作用,并探討其與PI3K/Akt和ERK1/2信號通路的關系。方法：1.大鼠H9c2細胞的缺氧/復氧模型的建立用含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)24h后,換用預先經(jīng)95%N2+5%CO2昆合氣飽和的缺氧液,然后放入通有95%N2+5%CO2的37℃培養(yǎng)箱缺氧培養(yǎng)若干小時,復氧時換用無FBS的DMEM培養(yǎng)基,在正常培養(yǎng)條件下培養(yǎng)若干小時,MTT測定細胞存活率。選擇適宜的缺氧復氧時間,建立缺氧/復氧模型。2.S1P后適應對H9c2細胞缺氧/復氧損傷的保護作用及其（?）PI3K/Akt信號通路的關系。將培養(yǎng)的大鼠H9c2細胞隨機分為5組,即（1）正常對照組（C組）；（2）缺氧/復氧（H/R）組；（3）S1P組；（4）S1P+LY組；（5）LY組。C組換用無血清的DMEM培養(yǎng)；H/R組缺氧培養(yǎng)16h,復氧培養(yǎng)4h；S1P組在復氧時加入終濃度為4μM S1P復氧培養(yǎng)4h；S1P+LY組在復氧時加入終濃度為10μM的LY294002（PI3K/Akt抑制劑）預處理30m... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、大鼠H9c2細胞的培養(yǎng)及缺氧/復氧模型的建立
    1.1 實驗材料
        1.1.1 細胞
        1.1.2 實驗儀器
        1.1.3 實驗器材
        1.1.4 實驗試劑
    1.2 實驗方法
        1.2.1 主要溶液的配制
        1.2.2 H9c2細胞的培養(yǎng)
        1.2.3 實驗分組及缺氧/復氧損傷模型的建立
        1.2.4 MTT法檢測細胞活力
        1.2.5 統(tǒng)計學處理
    1.3 結果
    1.4 小結
二、S1P通過PI3K/Akt信號通路抗缺氧/復氧誘導的H9c2細胞損傷
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞
        2.1.2 實驗儀器
        2.1.3 實驗器材
        2.1.4 藥品與試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 主要溶液的配制
        2.2.2 細胞培養(yǎng)
        2.2.3 實驗分組及給藥
        2.2.4 MTT法檢測細胞活力
        2.2.5 細胞培養(yǎng)液中的MDA含量的測定
        2.2.6 細胞培養(yǎng)液中T-SOD及Mn-SOD活力的測定
        2.2.7 細胞內游離鈣離子濃度的測定
        2.2.8 流式細胞術分析測定細胞凋亡率
        2.2.9 Western Blot檢測心肌細胞p-Akt和t-Akt的蛋白表達
        2.2.10 統(tǒng)計學處理
    2.3 實驗結果
        2.3.1 細胞存活率
        2.3.2 細胞培養(yǎng)液中MDA含量
        2.3.3 細胞培養(yǎng)液中T-SOD和Mn-SOD活力
        2.3.4 細胞內游離鈣離子的測定
        2.3.5 細胞凋亡率
        2.3.6 p-Akt/t-Akt的蛋白表達變化
    2.4 小結
三、S1P通過ERK1/2信號通路抗缺氧/復氧誘導的H9c2細胞損傷
    3.1 實驗材料
        3.1.1 細胞
        3.1.2 實驗儀器
        3.1.3 實驗器材
        3.1.4 藥品與試劑
    3.2 實驗方法
        3.2.1 主要溶液的配制
        3.2.2 細胞培養(yǎng)
        3.2.3 實驗分組及給藥
        3.2.4 MTT法檢測細胞活力
        3.2.5 細胞培養(yǎng)液中的MDA含量的測定
        3.2.6 細胞培養(yǎng)液中T-SOD及Mn-SOD活力的測定
        3.2.7 細胞內游離鈣離子濃度的測定
        3.2.8 流式細胞術分析測定細胞凋亡率
        3.2.9 Western Blot檢測心肌細胞p-ERK1/2和t-ERK1/2的蛋白表達
        3.2.10 統(tǒng)計學處理
    3.3 實驗結果
        3.3.1 細胞存活率
        3.3.2 細胞培養(yǎng)液中MDA含量
        3.3.3 細胞培養(yǎng)液中T-SOD和Mn-SOD活力
        3.3.4 細胞內游離鈣離子的測定
        3.3.5 細胞凋亡率
        3.3.6 p-ERK1/2和t-ERK1/2的蛋白表達變化
    3.4 小結
討論
結論
參考文獻
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述 1-磷酸鞘氨醇受體的功能與作用研究進展
    綜述參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3302205