目的：研究1-磷酸鞘氨醇（sphingosine-1-phosphate, S1P）后適應(yīng)對H9c2心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的保護(hù)作用,并探討其與PI3K/Akt和ERK1/2信號通路的關(guān)系。方法：1.大鼠H9c2細(xì)胞的缺氧/復(fù)氧模型的建立用含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)24h后,換用預(yù)先經(jīng)95%N2+5%CO2昆合氣飽和的缺氧液,然后放入通有95%N2+5%CO2的37℃培養(yǎng)箱缺氧培養(yǎng)若干小時(shí),復(fù)氧時(shí)換用無FBS的DMEM培養(yǎng)基,在正常培養(yǎng)條件下培養(yǎng)若干小時(shí),MTT測定細(xì)胞存活率。選擇適宜的缺氧復(fù)氧時(shí)間,建立缺氧/復(fù)氧模型。2.S1P后適應(yīng)對H9c2細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的保護(hù)作用及其（?）PI3K/Akt信號通路的關(guān)系。將培養(yǎng)的大鼠H9c2細(xì)胞隨機(jī)分為5組,即（1）正常對照組（C組）；（2）缺氧/復(fù)氧（H/R）組；（3）S1P組；（4）S1P+LY組；（5）LY組。C組換用無血清的DMEM培養(yǎng)；H/R組缺氧培養(yǎng)16h,復(fù)氧培養(yǎng)4h；S1P組在復(fù)氧時(shí)加入終濃度為4μM S1P復(fù)氧培養(yǎng)4h；S1P+LY組在復(fù)氧時(shí)加入終濃度為10μM的LY294002（PI3K/Akt抑制劑）預(yù)處理30m... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、大鼠H9c2細(xì)胞的培養(yǎng)及缺氧/復(fù)氧模型的建立
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.1 細(xì)胞
        1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.1.3 實(shí)驗(yàn)器材
        1.1.4 實(shí)驗(yàn)試劑
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 主要溶液的配制
        1.2.2 H9c2細(xì)胞的培養(yǎng)
        1.2.3 實(shí)驗(yàn)分組及缺氧/復(fù)氧損傷模型的建立
        1.2.4 MTT法檢測細(xì)胞活力
        1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    1.3 結(jié)果
    1.4 小結(jié)
二、S1P通過PI3K/Akt信號通路抗缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞損傷
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)器材
        2.1.4 藥品與試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 主要溶液的配制
        2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)分組及給藥
        2.2.4 MTT法檢測細(xì)胞活力
        2.2.5 細(xì)胞培養(yǎng)液中的MDA含量的測定
        2.2.6 細(xì)胞培養(yǎng)液中T-SOD及Mn-SOD活力的測定
        2.2.7 細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的測定
        2.2.8 流式細(xì)胞術(shù)分析測定細(xì)胞凋亡率
        2.2.9 Western Blot檢測心肌細(xì)胞p-Akt和t-Akt的蛋白表達(dá)
        2.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 細(xì)胞存活率
        2.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)液中MDA含量
        2.3.3 細(xì)胞培養(yǎng)液中T-SOD和Mn-SOD活力
        2.3.4 細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子的測定
        2.3.5 細(xì)胞凋亡率
        2.3.6 p-Akt/t-Akt的蛋白表達(dá)變化
    2.4 小結(jié)
三、S1P通過ERK1/2信號通路抗缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞損傷
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 細(xì)胞
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)器材
        3.1.4 藥品與試劑
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 主要溶液的配制
        3.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)分組及給藥
        3.2.4 MTT法檢測細(xì)胞活力
        3.2.5 細(xì)胞培養(yǎng)液中的MDA含量的測定
        3.2.6 細(xì)胞培養(yǎng)液中T-SOD及Mn-SOD活力的測定
        3.2.7 細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的測定
        3.2.8 流式細(xì)胞術(shù)分析測定細(xì)胞凋亡率
        3.2.9 Western Blot檢測心肌細(xì)胞p-ERK1/2和t-ERK1/2的蛋白表達(dá)
        3.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 細(xì)胞存活率
        3.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)液中MDA含量
        3.3.3 細(xì)胞培養(yǎng)液中T-SOD和Mn-SOD活力
        3.3.4 細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子的測定
        3.3.5 細(xì)胞凋亡率
        3.3.6 p-ERK1/2和t-ERK1/2的蛋白表達(dá)變化
    3.4 小結(jié)
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述 1-磷酸鞘氨醇受體的功能與作用研究進(jìn)展
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]1-磷酸鞘氨醇后適應(yīng)對H9c2心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的保護(hù)作用[J]. 鄭新彬,蘇健,高衛(wèi)真,溫克.  中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué). 2014(01)
[2]S1P對缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)的共培養(yǎng)心肌細(xì)胞和成肌細(xì)胞損傷的影響[J]. 于歡,谷翔,張普華,徐良賢,陳培良,秦仲君,趙勇.  華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2013(06)
[3]Effect of emulsified isoflurane on apoptosis of anoxia-reoxygenation neonatal rat cardiomyocytes[J]. Xiao Liu,Qu-Lian Guo,Zhong Zhang,Long Long,Yang Yang.  Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2013(12)
[4]鈣超載及其在心肌缺血/再灌注損傷中的作用機(jī)制研究現(xiàn)狀[J]. 程永生,陳宇,李冬.  中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新. 2013(03)
[5]1-磷酸鞘氨醇對過氧化氫所致微血管通透性增高的影響[J]. 張麗志,蘇健,溫克.  中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué). 2013(01)
[6]MAPK信號通路研究進(jìn)展[J]. 陳建勇,王聰,王娟,曹禮榮.  中國醫(yī)藥科學(xué). 2011(08)
[7]巴戟天糖鏈對缺氧復(fù)氧損傷內(nèi)皮細(xì)胞的血管形成作用研究[J]. 王寧,周鵬,馮國清,劉心玉,張培君,吳斌,胡香杰,喬鵬.  中國藥理學(xué)通報(bào). 2011(02)
[8]Effect of S1P5 on proliferation and migration of human esophageal cancer cells[J]. WeiMin Hu, Department of Microbiology and Immunology, North Sichuan Medical College, Nanchong 637007, Sichuan Province, China Li Li, BaoQian Jing, ChaoLi Wang, Li Feng, YongEn Xie, Institute of Immunology and Molecular Biology, North Sichuan Medical College, Nanchong 637007, Sichuan Province, China YongSheng Zhao, Department of Thoracic Surgery, Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College, Nanchong 637007, Sichuan Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2010(15)
[9]嗎啡后處理對兔心肌缺血再灌注損傷的影響[J]. 龔子曦,冉珂,常業(yè)恬,徐軍美.  浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2009(05)
[10]PPARγ激動劑羅格列酮對缺氧/復(fù)氧大鼠心肌細(xì)胞氧化應(yīng)激和凋亡的影響[J]. 姚友杰,耿登峰,王景峰,楊敏華,張玉玲,聶如瓊,周淑嫻.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2009(04)



本文編號：3302205