研究背景心血管疾病是危害人類健康的頭號殺手,而80-90%心血管疾病患者都伴隨著高血壓�！白柚垢哐獕猴嬍秤媱潱―ASH）"中重要的一條就是增加水果蔬菜的攝入量。細胞因子腫瘤壞死因子-α（TNF-α）作為重要的炎癥因子,可以誘導內(nèi)皮細胞表達相應蛋白,能顯著增強血管內(nèi)皮細胞單核細胞趨化蛋白-1（MCP-1）、細胞間粘附分子-1（ICAM-1）和血管細胞間粘附分子-1（VCAM-1）蛋白和mRNA的表達,促進炎癥發(fā)生及發(fā)展進程。藍莓作為功能性食品,其果實中花青素的含量很高,具有抗炎癥、增強心臟功能、改善血管循環(huán)、防止腦神經(jīng)衰老、明目及抗癌等獨特功效。研究發(fā)現(xiàn)藍莓花青素中錦葵色素的含量很高,因此本文以氯化錦葵色素、氯化錦葵色素-3-葡萄糖苷及氯化錦葵色素-3-半乳糖苷為研究對象,研究它們對TNF-α誘導的體外人臍靜脈內(nèi)皮細胞炎癥的保護作用及糖苷協(xié)同作用,并從分子基礎(chǔ)上研究其作用機制,為心血管疾病的研究提供一定的理論基礎(chǔ)。研究目的：1.體外分離人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC）,采用TNF-α干預細胞,建立內(nèi)皮細胞功能損傷所致的炎癥模型,觀察不同濃度氯化錦葵色素、氯化錦葵色素-3-葡萄糖苷及氯化錦葵... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表
引言
    參考文獻
第一章 文獻綜述
    1.1 藍莓的概況
        1.1.1 藍莓的種類及分布
        1.1.2 藍莓的營養(yǎng)價值及活性功能
        1.1.3 藍莓的開發(fā)價值
    1.2 藍莓花青素
        1.2.1 藍莓花青素簡介
        1.2.2 藍莓花青素之錦葵色素
        1.2.3 抗氧化物質(zhì)花青素與炎癥反應性疾病的關(guān)系研究
    1.3 腫瘤壞死因子-a的簡介
        1.3.1 腫瘤壞死因子的分類及分子結(jié)構(gòu)
        1.3.2 受體的生物學性質(zhì)
        1.3.3 腫瘤壞死因子的生物學特性
        1.3.4 核轉(zhuǎn)錄因子-kB信號通路
        1.3.5 炎癥反應損傷相關(guān)的炎癥因子
        1.3.6 腫瘤壞死因子作用及與炎癥反應的關(guān)系研究
    1.4 本課題的研究意義與內(nèi)容
        1.4.1 本課題的研究意義
        1.4.2 本課題的研究內(nèi)容
    參考文獻
第二章 腫瘤壞死因子TNF-α對人臍靜脈內(nèi)皮細胞粘附因子和趨化因子的調(diào)節(jié).
    2.1 材料
        2.1.1 試驗材料
        2.1.2 試驗試劑
        2.1.3 試驗儀器
        2.1.4 試劑配置
    2.2 試驗方法
        2.2.1 人臍靜脈內(nèi)皮細胞分離、培養(yǎng)和鑒定方案
        2.2.2 TNF-α干預人臍靜脈內(nèi)皮細胞方案
        2.2.3 人臍靜脈內(nèi)皮細胞觀察
        2.2.4 ELISA測定蛋白含量
        2.2.5 細胞總蛋白的提取
        2.2.6 Western Blot測定蛋白含量
        2.2.7 統(tǒng)計方法
    2.3 試驗結(jié)果與討論
        2.3.1 人臍靜脈內(nèi)皮細胞的培養(yǎng)和鑒定
        2.3.2 不同濃度TNF-a對細胞中MCP-1、ICAM-1、VCAM-1蛋白含量的變化
        2.3.3 TNF-ct刺激不同時間對細胞中MCP-1、ICAM-1、VCAM-1蛋白含量的變化
    2.4 本章小結(jié)
    參考文獻
第三章 氯化錦葵色素對TNF-α誘導的HUVEC中趨化因子及粘附因子的調(diào)節(jié)作用
    3.1 材料
        3.1.1 試驗材料
        3.1.2 試驗試劑
        3.1.3 試驗儀器
        3.1.4 試劑配置
    3.2 試驗方法
        3.2.1 人臍靜脈內(nèi)皮細胞復蘇、培養(yǎng)及傳代
        3.2.2 試驗分組
        3.2.3 MTT法檢測細胞活力
        3.2.4 ELISA法測定蛋白含量
        3.2.5 Western Blot測定細胞中ICAM-1及VCAM-1蛋白含量
        3.2.6 細胞總RNA提取
        3.2.7 RT-PCR反應
        3.2.8 PCR擴增
        3.2.9 檢驗cDNA及引物質(zhì)量
        3.2.10 熒光定量PCR
        3.2.11 統(tǒng)計方法
    3.3 試驗結(jié)果與討論
        3.3.1 MTT法檢測不同濃度Mv-Cl對HUVEC的保護作用
        3.3.2 Mv-Cl對細胞上清MCP-1及VCAM-1蛋白的影響
        3.3.3 Mv-Cl對細胞中ICAM-1及VCAM-1蛋白的表達影響
        3.3.4 Mv-Cl對細胞中MCP-1及ICAM-1mRNA表達影響
    3.4 本章小結(jié)
    參考文獻
第四章 糖苷氯化錦葵色素對TNF-α誘導的HUVEC中趨化因子及粘附因子的調(diào)節(jié)作用
    4.1 材料
        4.1.1 試驗材料
        4.1.2 試驗試劑
        4.1.3 試驗儀器
        4.1.4 試劑配置
    4.2 試驗方法
    4.3 試驗結(jié)果與討論
        4.3.1 MTT法檢測不同濃度Mv-3-glc-Cl及Mv-3-gal-Cl對HUVEC的保護作用
        4.3.2 不同濃度Mv-3-glc-Cl及Mv-3-gal-Cl對細胞上清MCP-1及VCAM-1蛋白的影響
        4.3.3 不同Mv-3-glc-Cl和Mv-3-gal-Cl對細胞中ICAM-1及VCAM-1蛋白的表達影響
        4.3.4 不同Mv-3-glc-Cl和Mv-3-gal-Cl對細胞中MCP-1及ICAM-1mRNA表達影響
    4.4 本章小結(jié)
    參考文獻
第五章 氯化錦葵色素-3-葡萄糖苷及半乳糖苷對TNF-α誘導的HUVEC中趨化因子及粘附因子的糖苷協(xié)同作用及分子機理的研究
    5.1 材料
        5.1.1 試驗材料
        5.1.2 試驗試劑
        5.1.3 試驗儀器
        5.1.4 試劑配置
    5.2 試驗方法
    5.3 試驗結(jié)果及討論
        5.3.1 Mv-3-glc-Cl及Mv-3-gal-Cl對細胞上清MCP-1及VCAM-1蛋白的影響
        5.3.2 Mv-3-glc-Cl及Mv-3-gal-Cl對細胞中ICAM-1及VCAM-1蛋白的影響
        5.3.3 Mv-3-glc-Cl及Mv-3-gal-Cl對細胞中MCP-1及ICAM-1mRNA的影響
        5.3.4 Mv-3-glc-Cl及Mv-3-gal-Cl對細胞中IκBα蛋白的影響
        5.3.5 Mv-3-glc-Cl及Mv-3-gal-Cl對細胞中NF-κB蛋白的影響
    5.4 本章小結(jié)
    參考文獻
全文總結(jié)
致謝
碩士期間發(fā)表論文情況


【參考文獻】：
期刊論文
[1]原花青素對Ⅱ型糖尿病大鼠心肌炎癥因子影響[J]. 李飛,王國賢,康雅萍.  中國公共衛(wèi)生. 2012(04)
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[7]血管內(nèi)皮細胞功能研究概況[J]. 溫紹君,劉潔琳.  生殖醫(yī)學雜志. 2005(05)
[8]原花青素對脂多糖誘導的RAW264.7細胞NF-κB DNA結(jié)合活性的抑制作用[J]. 陳美珺,梁統(tǒng),周克元.  廣東醫(yī)學院學報. 2005(02)
[9]IL-1β和TNF-α誘導RA成纖維樣滑膜細胞ICAM-1和VCAM-1表達調(diào)控的機制研究[J]. 孫鐵錚,呂厚山.  中華風濕病學雜志. 2005(03)
[10]我國藍莓(越桔)栽培研究現(xiàn)狀及發(fā)展措施[J]. 修英濤,常鳳英,姜河,楊偉力,候利軍.  遼寧農(nóng)業(yè)科學. 2003(03)

博士論文
[1]薏苡仁酯抑制內(nèi)皮細胞相關(guān)炎癥因子之實驗研究[D]. 許淳惟.廣州中醫(yī)藥大學 2011

碩士論文
[1]藍莓混汁的研制及渣的干燥[D]. 王銀娟.江南大學 2006



本文編號：3091714