發(fā)布時(shí)間：2021-03-20 21:39

　　研究背景心血管疾病是危害人類(lèi)健康的頭號(hào)殺手,而80-90%心血管疾病患者都伴隨著高血壓。“阻止高血壓飲食計(jì)劃（DASH）"中重要的一條就是增加水果蔬菜的攝入量。細(xì)胞因子腫瘤壞死因子-α（TNF-α）作為重要的炎癥因子,可以誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)相應(yīng)蛋白,能顯著增強(qiáng)血管內(nèi)皮細(xì)胞單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）、細(xì)胞間粘附分子-1（ICAM-1）和血管細(xì)胞間粘附分子-1（VCAM-1）蛋白和mRNA的表達(dá),促進(jìn)炎癥發(fā)生及發(fā)展進(jìn)程。藍(lán)莓作為功能性食品,其果實(shí)中花青素的含量很高,具有抗炎癥、增強(qiáng)心臟功能、改善血管循環(huán)、防止腦神經(jīng)衰老、明目及抗癌等獨(dú)特功效。研究發(fā)現(xiàn)藍(lán)莓花青素中錦葵色素的含量很高,因此本文以氯化錦葵色素、氯化錦葵色素-3-葡萄糖苷及氯化錦葵色素-3-半乳糖苷為研究對(duì)象,研究它們對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的體外人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞炎癥的保護(hù)作用及糖苷協(xié)同作用,并從分子基礎(chǔ)上研究其作用機(jī)制,為心血管疾病的研究提供一定的理論基礎(chǔ)。研究目的：1.體外分離人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）,采用TNF-α干預(yù)細(xì)胞,建立內(nèi)皮細(xì)胞功能損傷所致的炎癥模型,觀察不同濃度氯化錦葵色素、氯化錦葵色素-3-葡萄糖苷及氯化錦葵... 

【文章來(lái)源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：97 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語(yǔ)表
引言
    參考文獻(xiàn)
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 藍(lán)莓的概況
        1.1.1 藍(lán)莓的種類(lèi)及分布
        1.1.2 藍(lán)莓的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及活性功能
        1.1.3 藍(lán)莓的開(kāi)發(fā)價(jià)值
    1.2 藍(lán)莓花青素
        1.2.1 藍(lán)莓花青素簡(jiǎn)介
        1.2.2 藍(lán)莓花青素之錦葵色素
        1.2.3 抗氧化物質(zhì)花青素與炎癥反應(yīng)性疾病的關(guān)系研究
    1.3 腫瘤壞死因子-a的簡(jiǎn)介
        1.3.1 腫瘤壞死因子的分類(lèi)及分子結(jié)構(gòu)
        1.3.2 受體的生物學(xué)性質(zhì)
        1.3.3 腫瘤壞死因子的生物學(xué)特性
        1.3.4 核轉(zhuǎn)錄因子-kB信號(hào)通路
        1.3.5 炎癥反應(yīng)損傷相關(guān)的炎癥因子
        1.3.6 腫瘤壞死因子作用及與炎癥反應(yīng)的關(guān)系研究
    1.4 本課題的研究意義與內(nèi)容
        1.4.1 本課題的研究意義
        1.4.2 本課題的研究?jī)?nèi)容
    參考文獻(xiàn)
第二章 腫瘤壞死因子TNF-α對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞粘附因子和趨化因子的調(diào)節(jié).
    2.1 材料
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 試驗(yàn)試劑
        2.1.3 試驗(yàn)儀器
        2.1.4 試劑配置
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分離、培養(yǎng)和鑒定方案
        2.2.2 TNF-α干預(yù)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞方案
        2.2.3 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞觀察
        2.2.4 ELISA測(cè)定蛋白含量
        2.2.5 細(xì)胞總蛋白的提取
        2.2.6 Western Blot測(cè)定蛋白含量
        2.2.7 統(tǒng)計(jì)方法
    2.3 試驗(yàn)結(jié)果與討論
        2.3.1 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定
        2.3.2 不同濃度TNF-a對(duì)細(xì)胞中MCP-1、ICAM-1、VCAM-1蛋白含量的變化
        2.3.3 TNF-ct刺激不同時(shí)間對(duì)細(xì)胞中MCP-1、ICAM-1、VCAM-1蛋白含量的變化
    2.4 本章小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第三章 氯化錦葵色素對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的HUVEC中趨化因子及粘附因子的調(diào)節(jié)作用
    3.1 材料
        3.1.1 試驗(yàn)材料
        3.1.2 試驗(yàn)試劑
        3.1.3 試驗(yàn)儀器
        3.1.4 試劑配置
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)及傳代
        3.2.2 試驗(yàn)分組
        3.2.3 MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力
        3.2.4 ELISA法測(cè)定蛋白含量
        3.2.5 Western Blot測(cè)定細(xì)胞中ICAM-1及VCAM-1蛋白含量
        3.2.6 細(xì)胞總RNA提取
        3.2.7 RT-PCR反應(yīng)
        3.2.8 PCR擴(kuò)增
        3.2.9 檢驗(yàn)cDNA及引物質(zhì)量
        3.2.10 熒光定量PCR
        3.2.11 統(tǒng)計(jì)方法
    3.3 試驗(yàn)結(jié)果與討論
        3.3.1 MTT法檢測(cè)不同濃度Mv-Cl對(duì)HUVEC的保護(hù)作用
        3.3.2 Mv-Cl對(duì)細(xì)胞上清MCP-1及VCAM-1蛋白的影響
        3.3.3 Mv-Cl對(duì)細(xì)胞中ICAM-1及VCAM-1蛋白的表達(dá)影響
        3.3.4 Mv-Cl對(duì)細(xì)胞中MCP-1及ICAM-1mRNA表達(dá)影響
    3.4 本章小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第四章 糖苷氯化錦葵色素對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的HUVEC中趨化因子及粘附因子的調(diào)節(jié)作用
    4.1 材料
        4.1.1 試驗(yàn)材料
        4.1.2 試驗(yàn)試劑
        4.1.3 試驗(yàn)儀器
        4.1.4 試劑配置
    4.2 試驗(yàn)方法
    4.3 試驗(yàn)結(jié)果與討論
        4.3.1 MTT法檢測(cè)不同濃度Mv-3-glc-Cl及Mv-3-gal-Cl對(duì)HUVEC的保護(hù)作用
        4.3.2 不同濃度Mv-3-glc-Cl及Mv-3-gal-Cl對(duì)細(xì)胞上清MCP-1及VCAM-1蛋白的影響
        4.3.3 不同Mv-3-glc-Cl和Mv-3-gal-Cl對(duì)細(xì)胞中ICAM-1及VCAM-1蛋白的表達(dá)影響
        4.3.4 不同Mv-3-glc-Cl和Mv-3-gal-Cl對(duì)細(xì)胞中MCP-1及ICAM-1mRNA表達(dá)影響
    4.4 本章小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第五章 氯化錦葵色素-3-葡萄糖苷及半乳糖苷對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的HUVEC中趨化因子及粘附因子的糖苷協(xié)同作用及分子機(jī)理的研究
    5.1 材料
        5.1.1 試驗(yàn)材料
        5.1.2 試驗(yàn)試劑
        5.1.3 試驗(yàn)儀器
        5.1.4 試劑配置
    5.2 試驗(yàn)方法
    5.3 試驗(yàn)結(jié)果及討論
        5.3.1 Mv-3-glc-Cl及Mv-3-gal-Cl對(duì)細(xì)胞上清MCP-1及VCAM-1蛋白的影響
        5.3.2 Mv-3-glc-Cl及Mv-3-gal-Cl對(duì)細(xì)胞中ICAM-1及VCAM-1蛋白的影響
        5.3.3 Mv-3-glc-Cl及Mv-3-gal-Cl對(duì)細(xì)胞中MCP-1及ICAM-1mRNA的影響
        5.3.4 Mv-3-glc-Cl及Mv-3-gal-Cl對(duì)細(xì)胞中IκBα蛋白的影響
        5.3.5 Mv-3-glc-Cl及Mv-3-gal-Cl對(duì)細(xì)胞中NF-κB蛋白的影響
    5.4 本章小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
致謝
碩士期間發(fā)表論文情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]原花青素對(duì)Ⅱ型糖尿病大鼠心肌炎癥因子影響[J]. 李飛,王國(guó)賢,康雅萍.  中國(guó)公共衛(wèi)生. 2012(04)
[2]藍(lán)莓的保健功能及其開(kāi)發(fā)應(yīng)用[J]. 王姍姍,孫愛(ài)東,李淑燕.  中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng). 2010(06)
[3]花青素的提取純化、抗氧化能力及功用方面的研究進(jìn)展[J]. 魏蕾,呂佳飛,李志洲.  氨基酸和生物資源. 2009(04)
[4]葡萄籽原花青素對(duì)H202誘導(dǎo)的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的影響[J]. 高琳琳,李福榮,康莉,司艷紅.  營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào). 2009(04)
[5]卡托普利對(duì)胰島素抵抗-高血壓綜合征大鼠TNF-α、NO和SOD水平的影響[J]. 楊威,肖柳英,潘競(jìng)鏘,慶方,李杰.  中國(guó)藥師. 2008(05)
[6]TNF-α信號(hào)傳導(dǎo)通路的分子機(jī)理[J]. 丘創(chuàng)華,侯敢,黃迪南.  中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2007(06)
[7]血管內(nèi)皮細(xì)胞功能研究概況[J]. 溫紹君,劉潔琳.  生殖醫(yī)學(xué)雜志. 2005(05)
[8]原花青素對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞NF-κB DNA結(jié)合活性的抑制作用[J]. 陳美珺,梁統(tǒng),周克元.  廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2005(02)
[9]IL-1β和TNF-α誘導(dǎo)RA成纖維樣滑膜細(xì)胞ICAM-1和VCAM-1表達(dá)調(diào)控的機(jī)制研究[J]. 孫鐵錚,呂厚山.  中華風(fēng)濕病學(xué)雜志. 2005(03)
[10]我國(guó)藍(lán)莓(越桔)栽培研究現(xiàn)狀及發(fā)展措施[J]. 修英濤,常鳳英,姜河,楊偉力,候利軍.  遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué). 2003(03)

博士論文
[1]薏苡仁酯抑制內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)炎癥因子之實(shí)驗(yàn)研究[D]. 許淳惟.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 2011

碩士論文
[1]藍(lán)莓混汁的研制及渣的干燥[D]. 王銀娟.江南大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3091714