目的:高血糖加重了血管內(nèi)皮功能障礙,導(dǎo)致糖尿病患者易患冠狀動(dòng)脈粥樣硬化心臟�。╟oronary heart disease,CHD）,EPCs（Endothelial progenitor cells）可以直接參與受損內(nèi)皮的修復(fù)并提高其功能。然而,在高糖環(huán)境下EPCs功能顯著降低。因此,需要可以提高EPCs生物學(xué)功能的方法。尼可地爾是兼具類硝酸酯作用及三磷酸腺苷敏感性鉀通道（K+ATP channel）開放功能。同時(shí),尼可地爾也是一種心血管系統(tǒng)保護(hù)藥物。但尼可地爾是否可以提高高糖環(huán)境下EPCs的功能以及潛在的機(jī)制未知。在該研究中,我們探究了高糖環(huán)境下尼可地爾對EPCs的作用機(jī)制。方法:首先使用密度梯度離心法分離出大鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞,結(jié)合差速貼壁法以及改良后新增的集落挑選法,在培養(yǎng)過程中不斷純化EPCs。通過吞噬試驗(yàn),免疫熒光檢測,流式細(xì)胞術(shù)鑒定,增殖實(shí)驗(yàn),活力檢測,遷移試驗(yàn)和體外成管實(shí)驗(yàn)多方面鑒定EPCs。然后探究大鼠EPCs在不同濃度葡萄糖條件下的增殖、遷移及血管形成情況,為后續(xù)高糖環(huán)境EPCs病理生理機(jī)制探究提供參考。最后在高糖環(huán)境下（25 mM）,用尼可地爾處理EPCs。分別使用... 

【文章來源】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１原代骨髓來源大鼠ＥＰＣｓ形態(tài)學(xué)觀察??Ａ：骨髓單個(gè)核細(xì)胞；Ｂ：第一次更換細(xì)胞培養(yǎng)液后的貼壁的ＥＰＣｓ；?Ｃ：需要被??

３．２?ＥＰＣｓ吞噬功能鑒定??對經(jīng)過集落挑選純化后的原代ＥＰＣｓ進(jìn)行吞噬功能檢測，結(jié)果顯示ＥＰＣｓ具??有吞噬Ｄｉｌ－ａｃＬＤＬ的能力，使細(xì)胞在共聚焦顯微鏡下呈現(xiàn)紅色（圖２Ａ）。同時(shí)，??ＥＰＣｓ還具有結(jié)合ＦＩＴＣ－ＵＥＡ－Ｉ的功能使細(xì)胞呈現(xiàn)出綠色（圖２Ｂ）。ＤＡＰＩ將細(xì)??胞核染成藍(lán)色（圖２Ｃ）。最終，大約９５．７±３．８％細(xì)胞同時(shí)具有吞噬Ｄｉｌ－ａｃＬＤＬ和??結(jié)合ＦＩＴＣ－ＵＥＡ－Ｉ能力，呈現(xiàn)黃色（圖２Ｄ）。??■??■??圖２?ＥＰＣｓ吞噬功能檢測??Ａ：?ＥＰＣｓ具有吞噬Ｄｉｌ－ａｃＬＤＬ使細(xì)胞呈現(xiàn)紅色；Ｂ：?ＥＰＣｓ具有結(jié)合ＦＩＴＣ－Ｕ的功能使細(xì)胞呈現(xiàn)出綠色；Ｃ：?ＥＰＣｓ細(xì)胞核被ＤＡＰＩ染成藍(lán)色；Ｄ：?ＥＰＣｓ具有吞噬Ｄｉｌ－ａｃＬＤＬ和結(jié)合ＦＩＴＣ－ＵＥＡ－Ｉ能力，呈現(xiàn)黃色。??１８??

圖３?ＥＰＣｓ免疫熒光檢測??Ａ：?ＥＰＣｓ?表達(dá)?ｖＷＦ；?Ｂ：?ＥＰＣｓ?表達(dá)?ＶＥ－ｃａｄｈｅｒｉｎ


本文編號(hào)：3000154