目的:體外及體外實(shí)驗(yàn)探討FOXO1抑制劑AS1842856緩解CIH誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡及心肌肥厚的潛在分子機(jī)制,為AS1842856治療OSAS心肌肥厚并發(fā)癥提供理論基礎(chǔ)。方法:體外培養(yǎng)H9C2心肌細(xì)胞,在Oxycycler model C21缺氧細(xì)胞培養(yǎng)箱里建立細(xì)胞CIH模型。應(yīng)用Western Blot方法檢測(cè)凋亡蛋白的變化;流式細(xì)胞法檢測(cè)凋亡細(xì)胞數(shù);應(yīng)用si RNA技術(shù)及慢病毒技術(shù)觀察FOXO1及Bim對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的影響;應(yīng)用免疫共沉淀檢測(cè)FOXO1與Bim的上下游關(guān)系;動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,采用Oxy Cycler A84低氧箱制作CIH環(huán)境,隨機(jī)將40只SD雄性大鼠分為常氧(NC)組、常氧+AS1842856(NC+T)組、慢性間歇性缺氧(CIH)組、CIH+AS1842856(CIH+T)組,每組10只。并持續(xù)8小時(shí)/天,常規(guī)7天/周,造模共8周,動(dòng)物造模第28天、第42天,NC+T組、CIH+T組的大鼠分別注射FOXO1抑制劑AS1842856,造模結(jié)束后免疫組織化學(xué)技術(shù)及Western Blot技術(shù)觀察心肌細(xì)胞FOXO1及Bim的變化,HE、Mession染色觀察各組心肌結(jié)構(gòu)的情況;TUNEL技術(shù)觀察各組心肌細(xì)胞凋亡的情況。結(jié)果:體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)IH誘導(dǎo)激活FOXO1的磷酸化和提高FOXO1的表達(dá)水平,Bim活化可導(dǎo)致IH誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡。H9C2細(xì)胞在IH環(huán)境中,FOXO1是Bim的上游調(diào)節(jié)因子,而且它們有直接相互作用關(guān)系,FOXO1激活了Bim的表達(dá),調(diào)節(jié)了細(xì)胞凋亡的發(fā)生,抑制FOXO1的表達(dá)可以減少I(mǎi)H誘導(dǎo)下心肌細(xì)胞凋亡的發(fā)生。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,CIH誘導(dǎo)的心肌肥厚組織中FOXO1和Bim的表達(dá)明顯增加,AS1842856抑制了促凋亡因子Bim的表達(dá),并明顯改善了由CIH誘導(dǎo)的心肌肥厚和心肌細(xì)胞凋亡。結(jié)論:H9C2細(xì)胞實(shí)驗(yàn),FOXO1/Bim信號(hào)通路調(diào)節(jié)了IH誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,CIH誘導(dǎo)了大鼠心肌細(xì)胞凋亡及心肌肥厚,FOXO1/Bim信號(hào)通路調(diào)節(jié)了CIH誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡,AS1842856緩解了CIH誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡及心肌肥厚。目的:本實(shí)驗(yàn)擬研究FOXO1/Bim信號(hào)通路在慢性間歇性缺氧導(dǎo)致大鼠主動(dòng)脈弓損害過(guò)程中主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞凋亡的機(jī)制,并探討FOXO1抑制劑AS1842856抗凋亡的作用效果,為OSAS導(dǎo)致主動(dòng)脈弓損害的治療尋求新的方式和治療靶點(diǎn)。方法:采用Oxy Cycler A84低氧箱制作CIH環(huán)境造模,隨機(jī)將40只SD雄性大鼠分為常氧(NC)組、常氧+AS1842856(NC+T)組、CIH組、CIH+AS1842856(CIH+T)組,每組10只。CIH組及CIH+T組大鼠在白天睡眠期間被放于缺氧箱內(nèi),并持續(xù)8小時(shí)/天,常規(guī)7天/周,造模共8周,造模結(jié)束后采用Polygraph System測(cè)定大鼠主動(dòng)脈收縮壓,用蘇木精-伊紅染色法檢測(cè)主動(dòng)脈弓損害情況并測(cè)量主動(dòng)脈弓內(nèi)-中膜厚度,采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)每組大鼠主動(dòng)脈弓中主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞FOXO1、Bim、Ki67的表達(dá),TUNEL觀察每組主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果:CIH誘導(dǎo)干預(yù)使SD大鼠血壓升高,FOXO1抑制劑AS1842856可降低CIH誘導(dǎo)升高的血壓。CIH誘導(dǎo)干預(yù)使主動(dòng)脈弓內(nèi)-中膜增厚,FOXO1抑制劑AS1842856可以逆轉(zhuǎn)增厚的主動(dòng)脈弓。CIH誘導(dǎo)干預(yù)使主動(dòng)脈弓平滑肌細(xì)胞FOXO1及Bim表達(dá)增加,FOXO1被抑制后Bim隨之也表達(dá)減少。CIH誘導(dǎo)干預(yù)導(dǎo)致了主動(dòng)脈弓平滑肌細(xì)胞的正常增殖減少,但促進(jìn)了反常凋亡發(fā)生,而FOXO1抑制劑AS1842856可糾正主動(dòng)脈弓平滑肌細(xì)胞的正常增殖,減少了反常凋亡的發(fā)生。結(jié)論:FOXO1/Bim信號(hào)通路介導(dǎo)了CIH導(dǎo)致主動(dòng)脈弓平滑肌細(xì)胞的凋亡過(guò)程,AS1842856明顯逆轉(zhuǎn)了這一過(guò)程,可成為治療OSAS合并高血壓的潛在靶向藥物。目的:本實(shí)驗(yàn)擬主要研究FOXO1/Bim在慢性間歇性缺氧導(dǎo)致大鼠海馬損害的凋亡機(jī)制,并探討FOXO1抑制劑AS1842856抗凋亡的作用效果,為OSAS導(dǎo)致海馬損害的治療尋求新的方式和治療靶點(diǎn)。方法:采用Oxy Cycler A84缺氧箱制作CIH環(huán)境并造模,隨機(jī)將40只SD雄性大鼠分為常氧(NC)組、常氧+AS1842856(NC+T)組、CIH組、CIH+AS1842856(CIH+T)組,每組10只。CIH組及CIH+T組大鼠在白天睡眠期間被放于缺氧箱內(nèi),并持續(xù)8小時(shí)/天,常規(guī)7天/周,造模共8周。采用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)大鼠的認(rèn)知功能。采用蘇木精-伊紅染色法檢測(cè)海馬結(jié)構(gòu)損害程度,采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)每組大鼠海馬神經(jīng)元中FOXO1、Bim、Ki67的表達(dá),TUNEL觀察每組海馬神經(jīng)元凋亡情況。結(jié)果:CIH誘導(dǎo)了海馬神經(jīng)元的損害,誘導(dǎo)了海馬神經(jīng)元FOXO1及Bim表達(dá)增加,FOXO1表達(dá)被抑制后Bim的表達(dá)隨之減少,CIH誘導(dǎo)干預(yù)導(dǎo)致了海馬神經(jīng)元的正常增殖減少,而且促進(jìn)了反常凋亡發(fā)生,而FOXO1抑制劑AS1842856可糾正海馬神經(jīng)元的正常增殖,減少反常凋亡的發(fā)生,并且AS1842856可改善CIH所致SD大鼠認(rèn)知缺損。結(jié)論:FOXO1/Bim信號(hào)通路介導(dǎo)了慢性間歇性缺氧導(dǎo)致的海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡過(guò)程,FOXO1抑制劑AS1842856明顯逆轉(zhuǎn)了這一過(guò)程,它可成為治療OSAS合并海馬損害的潛在靶向藥物。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R542.2
【文章目錄】：
全文中主要縮略詞中英文對(duì)照表
第一部分 慢性間歇性缺氧誘導(dǎo)大鼠心肌損傷的機(jī)制及藥物干預(yù)的研究
    中文摘要
    Abstract
    1 緒言
    2 材料與方法
        2.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器和分析軟件
        2.2 試劑和溶劑配置
            2.2.1 主要試劑、耗材
            2.2.2 主要溶液的配制方法
        2.3 實(shí)驗(yàn)對(duì)象及模型構(gòu)造
            2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.3.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)象
            2.3.3 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷臉?gòu)建
            2.3.4 組織處理和保存
        2.4 實(shí)驗(yàn)方法
            2.4.1 HE染色和TUNEL檢測(cè)
            2.4.2 流式細(xì)胞凋亡檢測(cè)
            2.4.3 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR
            2.4.4 siRNA轉(zhuǎn)染及慢病毒構(gòu)建、轉(zhuǎn)染
            2.4.5 Westernblot檢測(cè)
            2.4.6 免疫組織化學(xué)
            2.4.7 免疫共沉淀
            2.4.8 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 轉(zhuǎn)錄因子bim的活化參與了IH誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡
        3.2 CIH誘導(dǎo)可激活并提高轉(zhuǎn)錄因子FOXO1的表達(dá)水平
        3.3 FOXO1激活了Bim的表達(dá),調(diào)節(jié)了心肌細(xì)胞凋亡的發(fā)生
        3.4 抑制FOXO1的表達(dá)可以緩解心肌細(xì)胞過(guò)度凋亡
        3.5 CIH誘導(dǎo)了大鼠心肌細(xì)胞FOXO1和Bim的表達(dá)增加
        3.6 AS1842856下調(diào)了Bim表達(dá),改善了心肌肥厚和細(xì)胞凋亡
    4 討論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 慢性間歇缺氧誘導(dǎo)大鼠主動(dòng)脈弓損傷的機(jī)制及藥物干預(yù)的研究
    中文摘要
    Abstract
    1 緒言
    2 材料和方法
        2.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器和分析軟件
        2.2 試劑和溶劑配置
        2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和模型的構(gòu)建
            2.3.2 組織處理和保存
            2.3.3 大鼠血壓測(cè)定
            2.3.4 HE染色和TUNEL檢測(cè)
            2.3.5 免疫組織化學(xué)
            2.3.6 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 AS1842856可降低CIH誘導(dǎo)大鼠異常升高的血壓
        3.2 AS1842856可以逆轉(zhuǎn)CIH誘導(dǎo)增厚的主動(dòng)脈弓
        3.3 CIH誘導(dǎo)了大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞FOXO1、Bim表達(dá)增加
        3.4 AS1842856改善了CIH所致主動(dòng)脈弓增殖減少,緩解了反常凋亡
    4 討論
    參考文獻(xiàn)
第三部分 慢性間歇性缺氧誘導(dǎo)大鼠海馬損傷的機(jī)制及藥物干預(yù)的研究
    中文摘要
    Abstract
    1 緒言
    2 材料和方法
        2.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器和分析軟件
        2.2 試劑和配置方法
        2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和模型的構(gòu)建
            2.3.2 組織處理和保存
            2.3.3 Morris水迷宮試驗(yàn)
            2.3.4 HE染色和TUNEL檢測(cè)
            2.3.5 免疫組織化學(xué)
            2.3.6 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 AS1842856明顯改善了CIH所致海馬神經(jīng)細(xì)胞的損害
        3.2 AS1842856明顯抑制了CIH誘導(dǎo)的Bim表達(dá)增加
        3.3 AS1842856改善了CIH所致海馬增殖減少,緩解了反常凋亡
        3.4 AS1842856明顯改善了CIH導(dǎo)致的大鼠認(rèn)知缺損
    4 討論
    參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄：攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文目錄
致謝

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Signal transduction mediated by Bid,a pro-death Bcl-2 family proteins, connects the death receptor and mitochondria apoptosis pathways[J];Cell Research;2000年03期

本文編號(hào)：2889654