研究背景和研究目的動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是引發(fā)人類(lèi)心腦血管疾病的重要病因,也是全球范圍內(nèi)的研究熱點(diǎn)和臨床上亟需解決的難題之一。AS是發(fā)生于大中型動(dòng)脈的慢性退行性病變,主要特征為血管內(nèi)皮功能異常或損傷,伴脂質(zhì)沉積,多種炎性細(xì)胞和炎性因子共同參與,最終導(dǎo)致粥樣斑塊形成致使動(dòng)脈管壁硬化,管腔狹窄繼而引起靶器官缺血性的改變和相應(yīng)癥狀。動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)制復(fù)雜至今仍未完全闡明。AS的過(guò)程始于血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷或功能異常,并在內(nèi)皮表面黏附分子(E-selectin、P-selectin、ICAM-1、VCAM-1)、趨化因子(MCP-1、IL-8 等)、多種炎癥細(xì)胞(T淋巴細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞等)、炎癥因子(IL-1、IL6、TNF-α、CRP、Lp-PLA2 等)和多種基質(zhì)蛋白酶(MMPs、ASAMTSs、cathepsins等)的共同參與下發(fā)生發(fā)展。隨著脂質(zhì)核的形成擴(kuò)大和斑塊內(nèi)炎癥反應(yīng)的加劇,斑塊內(nèi)發(fā)生巨噬細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞的凋亡、血管新生、纖維帽和細(xì)胞外基質(zhì)的降解,促進(jìn)了斑塊失穩(wěn)定性至最終破裂的過(guò)程。由此可見(jiàn),炎癥參與并貫穿了斑塊發(fā)生、發(fā)展、去穩(wěn)定和最終破裂的整個(gè)過(guò)程。急性冠脈綜合征(ACS)是一組因心肌急性缺血所引發(fā)的臨床綜合征,主要包括①不穩(wěn)定性心絞痛(UAP)、②非ST段抬高型心肌梗死、③ST段抬高型心肌梗死(STEMI)。ACS患者作為冠心病患者中的高危人群,雖然近些年來(lái)藥物治療的優(yōu)化和溶栓介入的開(kāi)展已經(jīng)極大地降低了 ACS患者的死亡率,但是其院內(nèi)和院外發(fā)生短期和長(zhǎng)期不良心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)依然很高,因而對(duì)其早期進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和強(qiáng)化治療管理在臨床上顯得尤為重要。GRACE評(píng)分和TIMI評(píng)分對(duì)ACS患者的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估已經(jīng)深入人心,并得到了多項(xiàng)大型臨床試驗(yàn)的驗(yàn)證和指南的推薦20 21。GRACE評(píng)分主要通過(guò)患者的年齡、靜息心率、血肌酐水平、收縮壓、心衰病史、心肌梗死病史、ST段壓低、心肌酶升高、院內(nèi)是否血運(yùn)重建這9項(xiàng)指標(biāo)對(duì)ACS患者進(jìn)行評(píng)分。目前的研究表明GRACE評(píng)分對(duì)ACS患者院內(nèi)死亡率以及院外的短期預(yù)后和長(zhǎng)期預(yù)后均有較好的預(yù)測(cè)價(jià)值。ACS的病理學(xué)基礎(chǔ)是冠脈內(nèi)不穩(wěn)定斑塊的破裂或者發(fā)生糜爛后繼發(fā)血栓形成。不穩(wěn)定斑塊一般伴有如下特點(diǎn):大量巨噬細(xì)胞和炎性細(xì)胞浸潤(rùn),平滑肌成分較少,薄纖維帽(厚度小于65 μm),大壞死核(大于斑塊體積的30%),斑塊內(nèi)血管新生和/或斑塊內(nèi)出血,血管擴(kuò)張性正性重塑,血栓形成。動(dòng)物模型中常通過(guò)計(jì)算易損指數(shù)來(lái)反映斑塊的易損性。臨床上有多種影像學(xué)檢查來(lái)檢測(cè)斑塊的不穩(wěn)定性:如多層螺旋CT(MDCT)、光學(xué)相干斷層掃描技術(shù)(OCT)、頸動(dòng)脈超聲和血管內(nèi)超聲(IVUS)。臨床上一直以來(lái)都將冠脈造影視為冠心病確診的金標(biāo)準(zhǔn)。通過(guò)對(duì)造影顯示的冠脈內(nèi)斑塊形態(tài)的直觀觀察也可以粗略有效地反應(yīng)斑塊的穩(wěn)定性。相關(guān)研究表明冠脈造影診斷的復(fù)雜病變可以較好地反應(yīng)斑塊的易損性并對(duì)冠心病患者的預(yù)后有獨(dú)立診斷價(jià)值。目前已有多項(xiàng)臨床研究通過(guò)分析外周血炎癥因子的表達(dá)與冠脈復(fù)雜病變的關(guān)系來(lái)尋找反映斑塊穩(wěn)定性的血清標(biāo)志物。Mac-2結(jié)合蛋白(M2BP)是一種分泌型的高度糖基化蛋白,也是巨噬細(xì)胞清道夫受體富含半胱氨酸域超家族成員之一。M2BP在造血細(xì)胞和上皮細(xì)胞中表達(dá),多種其他組織也可以表達(dá)M2BP,例如結(jié)腸組織、十二指腸、胃組織和肺臟,并且在人體的多種體液中也可以檢測(cè)到M2BP的存在,例如精液、尿液、淚液、乳汁和血漿。M2BP作為一種致炎性蛋白在腫瘤和病毒感染時(shí)表達(dá)增高并被多項(xiàng)研究證實(shí)與腫瘤的轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)。近年來(lái)的研究表明M2BP可以激活人單核細(xì)胞并上調(diào)炎癥因子的表達(dá),參與了機(jī)體的細(xì)胞免疫應(yīng)答。并且研究發(fā)現(xiàn)相較于健康個(gè)體,M2BP的血漿水平在冠心病患者中是顯著升高的,且和冠心病危險(xiǎn)因素、機(jī)體的代謝、氧化應(yīng)激水平密切相關(guān)。一項(xiàng)最新的研究證實(shí)了 M2BP在人體冠脈斑塊中與CD68陽(yáng)性的巨噬細(xì)胞共表達(dá)并且在致炎性的M1性巨噬細(xì)胞中高表達(dá)。另外,一項(xiàng)回顧性研究表明M2BP對(duì)冠脈CT診斷的149名冠心病患者的長(zhǎng)期死亡率有獨(dú)立預(yù)測(cè)價(jià)值。鑒于M2BP的炎性特征以及其在動(dòng)脈硬化和冠心病領(lǐng)域的相關(guān)研究,我們猜測(cè)M2BP參與了動(dòng)脈硬化和斑塊去穩(wěn)定性的過(guò)程。后續(xù)的研究中我們將通過(guò)臨床觀察與基礎(chǔ)研究相結(jié)合的方式深入地探討M2BP在動(dòng)脈硬化和斑塊去穩(wěn)定性中的作用及相關(guān)機(jī)制,進(jìn)而為冠心病的病理機(jī)制提供新的理論依據(jù)和治療靶點(diǎn)。研究?jī)?nèi)容1.比較M2BP在冠心病患者(ACS、SAP)和對(duì)照組(control)外周血中的表達(dá),同時(shí)分析其表達(dá)水平與冠脈復(fù)雜病變的相關(guān)性,并且探討血漿M2BP水平在ACS患者中的預(yù)后價(jià)值。2.分析比較M2BP在冠心病患者(ACS、SAP)和對(duì)照組(control)外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)中的mRNA表達(dá)差異及與多種炎癥因子表達(dá)的相關(guān)性,最后分析M2BP在PBMC中表達(dá)水平對(duì)冠脈復(fù)雜病變的診斷價(jià)值。3.連續(xù)入選51名頸動(dòng)脈內(nèi)膜切除患者,結(jié)合患者癥狀和頸動(dòng)脈超聲情況,分析M2BP在癥狀性患者和不穩(wěn)定斑塊內(nèi)的表達(dá)。4.體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)通過(guò)慢病毒載體介導(dǎo)M2BP的沉默,觀察M2BP沉默對(duì)ApoE敲除小鼠斑塊形成和斑塊內(nèi)成分的影響。5.體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)通過(guò)重組蛋白刺激探討M2BP對(duì)THP-1和HUVEC細(xì)胞內(nèi)炎癥因子的調(diào)控及相關(guān)機(jī)制。研究方法1.M2BP在冠心病患者外周血的表達(dá)及其在ACS患者中預(yù)后價(jià)值研究連續(xù)入選從2015年1月到12月入住我院接受冠脈造影的患者共348名,其中包括急性冠脈綜合征(ACS)患者216名,穩(wěn)定型心絞痛(SAP)患者82名,還有對(duì)照組(controls)50名。入院后常規(guī)采集病史并靜脈采集外周血離心后取上清用于M2BP的Elisa檢測(cè)。由我院心內(nèi)科專(zhuān)家分析患者的冠脈造影的靶血管造影形態(tài)和管腔狹窄程度,按照Ambrose's分類(lèi)法分為簡(jiǎn)單病變和復(fù)雜病變。并隨機(jī)選取SAP病人30名于術(shù)前和術(shù)后多個(gè)時(shí)間點(diǎn)(1h、2h、6h和24h)采靜脈血用于M2BP的檢測(cè)。對(duì)ACS患者,入院即進(jìn)行GRACE評(píng)分和危險(xiǎn)分層,并隨訪一年。隨訪終點(diǎn)事件為復(fù)合終點(diǎn)(major adverse cardiovascular outcomes,MACE),包括心源性死亡,非致死性心肌梗死,再發(fā)心絞痛入院。建立Cox多因素模型篩選ACS患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。2.M2BP在冠心病患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中的表達(dá)及對(duì)復(fù)雜斑塊的預(yù)測(cè)價(jià)值研究隨機(jī)入選從2016年1月到3月入住我院接受冠脈造影患者共60名,其中包括急性冠脈綜合征(ACS)患者40名,穩(wěn)定型心絞痛(SAP)患者20名,另匹配健康對(duì)照組(controls)10名。入院后常規(guī)采集病史并抽取外周血Elisa檢測(cè)炎癥因子(hs-CRP、IL-6、TNF-α)表達(dá),Ficoll密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)并RT-PCR檢測(cè)M2BP和其他炎癥因子的mRNA表達(dá)水平。通過(guò)造影分析按照Ambrose's分類(lèi)法分為簡(jiǎn)單病變和復(fù)雜病變。所有患者出院后一個(gè)月門(mén)診隨訪時(shí)抽取外周血提取PBMC做M2BP的RT-PCR檢測(cè)與入院時(shí)比較。建立Logistic多因素模型和ROC曲線判斷M2BP在PBMC中的mRNA表達(dá)對(duì)冠脈復(fù)雜病變的預(yù)測(cè)價(jià)值。3.M2BP在人體頸動(dòng)脈斑塊中的表達(dá)及其與斑塊去穩(wěn)定性的相關(guān)研究連續(xù)入選我院接受頸動(dòng)脈內(nèi)膜切除術(shù)的患者共51名,根據(jù)其近6個(gè)月來(lái)有無(wú)缺血癥狀(腦卒中stroke、短暫性腦缺血發(fā)作TIA和一過(guò)性黑矇amaurosis fugax)分為癥狀性斑塊和無(wú)癥狀性斑塊。根據(jù)頸動(dòng)脈超聲分為無(wú)回聲斑塊、異質(zhì)性斑塊和強(qiáng)回聲斑塊�；颊呷朐汉蟪Ｒ�(guī)集病史并抽取外周血Elisa檢測(cè)M2BP。切除的頸動(dòng)脈斑塊部分用于M2BP的RT-PCR檢測(cè),部分用于免疫組化染色(M2BP、CD68 和 α-smooth muscle actin)和 Masson 染色。Image pro plus 軟件分析陽(yáng)性染色面積。從外周血、斑塊內(nèi)mRNA表達(dá)和斑塊內(nèi)染色面積三個(gè)水平分析比較M2BP的表達(dá)與超聲、癥狀、斑塊內(nèi)成分的關(guān)系。4.M2BP對(duì)斑塊形成和穩(wěn)定性的影響及其炎性調(diào)控機(jī)制的基礎(chǔ)研究4.1 M2BP對(duì)斑塊形成和穩(wěn)定性影響的體內(nèi)研究60只8周齡雄性ApoE-/-小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)2周后過(guò)渡到高脂飲食,高脂喂養(yǎng)8周后,將小鼠隨機(jī)分為三組①PBS對(duì)照組(陰性對(duì)照組,n=20,尾靜脈注入200ul的PBS)②空載體對(duì)照組(Lenti-null組,n=20,尾靜脈注射200ul含有107TU的空載體慢病毒)③慢病毒沉默組(Lenti-M2BP組,n=20,尾靜脈注射200ul含有107TU的M2BP沉默慢病毒)。注射完慢病毒后所有小鼠繼續(xù)高脂喂養(yǎng)4周后麻醉處死。眼球取血后離心分離上清用于血脂和M2BP的Elisa檢測(cè)。小鼠心臟浸泡于4%多聚甲醛過(guò)夜后部分OCT包埋制作冰凍切片用于主動(dòng)脈根部油紅染色,部分石蠟包埋制作石蠟切片,用于主動(dòng)脈根部HE、天狼猩紅和免疫組化染色(α-SMC、CD68、IL-6、MCP-1、ICAM-1、Lp-PLA2、MMP2、MMP9)。自升主動(dòng)脈致腹主動(dòng)脈分離主動(dòng)脈全長(zhǎng),部分用于Western Blot和RT-PCR,部分用于大體油紅0染色。Image pro plus軟件分析比較各組小鼠染色面積,計(jì)算斑塊的易損指數(shù)。4.2 M2BP炎性調(diào)控機(jī)制的體外研究1)以 不 同濃度的 ox-LDL(0、10、20、40、80μg/ml)刺激 THP-1 細(xì)胞 6 小時(shí)和24小時(shí),取上清用于M2BP的Elisa檢測(cè)。2)以 不同的炎癥因子(ox-LDL20μg/ml、IL-1β10ng/ml、TNF-α10ng/ml)單一刺激或聯(lián)合刺激THP-1細(xì)胞6小時(shí)和24小時(shí),取上清用于M2BP的El isa檢測(cè)。3)以不同的炎癥因子(ox-LDL20μg/ml、IL-1β1Ong/ml、TNF-α 10ng/ml)單一刺激或聯(lián)合刺激HUVEC細(xì)胞24小時(shí),取上清用于M2BP的Elisa檢測(cè)。4)以不同濃度的 rhM2BP(0、0.1、0.5、1、5μg/ml)刺激 THP-1 細(xì)胞 6 小時(shí)和24小時(shí),Elisa檢測(cè)培養(yǎng)基中炎癥因子IL-6,IL-8,TNF-α,MMP-9,Lp-PLA2的表達(dá)。5)分別以不同濃度的rhM2BP(0、0.1、0.5、1、5 u g/ml)刺激HUVEC細(xì)胞24小時(shí),elisa檢測(cè)培養(yǎng)基中IL-8和MCP-1的表達(dá)。6)分別以不同濃度的rhM2BP(0、0.1、0.5、1、5μg/ml)刺激HUVEC細(xì)胞6小時(shí),Western blot 檢測(cè)黏附分子ICAM-1、VCAM-1 和 E-selectin 的表達(dá)。7)細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度的rhM2BP(0、0.1、0.5、1、5μg/ml)刺激對(duì)THP-1細(xì)胞與HUVEC細(xì)胞的黏附作用的影響。8)Transwell趨化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度的rhM2BP(0、0.1、0.5、1、5 μ g/ml)刺激對(duì)THP-1細(xì)胞趨化作用的影響9)研究重組蛋白rhM2BP刺激對(duì)THP-1細(xì)胞內(nèi)MMP9和MMP2表達(dá)和活性的時(shí)間依賴性和濃度依賴性的影響并通過(guò)相應(yīng)的通路抑制劑預(yù)刺激研究NF-kB和MAPK信號(hào)通路是否參與了 rhM2BP對(duì)MMP9和MMP2的調(diào)控。研究結(jié)果1.M2BP在冠心病患者外周血的表達(dá)及其在ACS患者中預(yù)后價(jià)值研究相比于對(duì)照組,SAP組和ACS組的患者有更多的冠心病危險(xiǎn)因素(吸煙、糖尿病、高脂血癥)。CAD組患者M(jìn)2BP水平明顯高于Control組的患者(p0.0.01),UAP組患者外周血M2BP水平明顯高于SAP組和Control組(p0.001),而在ACS患者中,NSTEMI、STEMI患者的M2BP水平與UAP組患者相比并沒(méi)有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Spearman相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)ACS患者外周血M2BP水平與hs-TnT沒(méi)有顯著的相關(guān)性(r=0.081,p=0.240)。而在ACS患者中,外周血的M2BP水平與GRACE評(píng)分具有良好的相關(guān)性(r=0.218,p=0.001),并且與GRACE評(píng)分危險(xiǎn)分層呈正相關(guān)。SAP患者PCI術(shù)后1小時(shí)外周血M2BP顯著升高,后逐漸下降,24h下降至基線水平。CAD患者外周血M2BP水平與冠脈病變支數(shù)無(wú)明顯相關(guān)性。而通過(guò)對(duì)ACS患者冠脈造影的分析我們發(fā)現(xiàn),其外周血M2BP的水平與冠脈復(fù)雜病變的支數(shù)(程度)成正相關(guān)(p0.001)。在對(duì)216名ACS患者為期1年(11.7±2.7months)的隨訪中,共發(fā)生了 45(20.8%)例MACE事件。事件組的ACS患者外周血M2BP顯著高于非事件組患者(p0.001)。Cox多因素模型在調(diào)整了其他臨床危險(xiǎn)因素后,M2BP對(duì)ACS患者的預(yù)后仍然有獨(dú)立預(yù)測(cè)價(jià)值。并且血漿M2BP聯(lián)合GRACE評(píng)分能提高對(duì)ACS患者預(yù)后的診斷價(jià)值。2.M2BP在冠心病患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中的表達(dá)及對(duì)復(fù)雜斑塊的預(yù)測(cè)價(jià)值研究ACS患者外周血PBMC中M2BP的mRNA表達(dá)顯著高于SAP和Control組(p0.001),并且在急性期表達(dá)水平明顯高于慢性穩(wěn)定期(p0.001)。Spearman相關(guān)性分析顯示:冠心病患者外周血PBMC中M2BP的mRNA表達(dá)與外周血血漿中炎癥因子的表達(dá)以及外周血PBMC中炎癥因子的mRNA表達(dá)呈顯著正相關(guān)。冠脈復(fù)雜病變(n=48)的CAD患者外周血PBMC中M2BP的mRNA表達(dá)顯著高于冠脈簡(jiǎn)單病變(n=12)的CAD患者(p=0.004)。并且CAD患者外周血PBMC中M2BP的mRNA表達(dá)與冠脈復(fù)雜病變的數(shù)目有明顯的相關(guān)性。ROC曲線分析示在本研究隊(duì)列中,PBMC中M2BP的mRNA表達(dá)水平對(duì)復(fù)雜病變的診斷價(jià)值明顯高于血漿hs-CRP(曲線下面積AUC:0.696 vs 0.588,p=0.109)。Logistic多因素分析在進(jìn)行多個(gè)危險(xiǎn)因素的調(diào)整后,PBMC中的M2BP的mRNA表達(dá)仍然對(duì)冠脈復(fù)雜病變有獨(dú)立預(yù)測(cè)價(jià)值(OR=2.586,95%CI=1.124-5.948,p=0.025).3.M2BP在人體頸動(dòng)脈斑塊中的表達(dá)及其與斑塊去穩(wěn)定性的相關(guān)研究M2BP在頸動(dòng)脈斑塊內(nèi)的細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外間質(zhì)中均有表達(dá),且作為分泌性因子其主要分布于細(xì)胞外間質(zhì)。連續(xù)切片免疫組化染色顯示M2BP在人體頸動(dòng)脈斑塊內(nèi)與巨噬細(xì)胞共定位表達(dá),而在平滑肌細(xì)胞中幾乎不表達(dá)。M2BP在破裂的Ⅲ型斑塊中和擁有脂質(zhì)核的Ⅱ型斑塊中是高表達(dá)的,在Ⅰ型纖維斑塊中是低表達(dá)的。并且M2BP在斑塊肩部、壞死核內(nèi)、破裂的纖維帽部位這些易損位點(diǎn)均是高表達(dá)的,在完整的纖維帽上和斑塊內(nèi)的纖維組織中是弱表達(dá)的。M2BP在癥狀性患者中表達(dá)高于無(wú)癥狀性患者,并且隨著最近發(fā)作的癥狀發(fā)生時(shí)間的增加其表達(dá)水平呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。另外,其在TIA和stroke患者中表達(dá)高于在黑矇患者中的表達(dá),在無(wú)回聲斑塊和異質(zhì)性回聲斑塊中的表達(dá)高于強(qiáng)回聲斑塊中的表達(dá)。Spearman相關(guān)性分析示:M2BP的陽(yáng)性染色面積與CD68巨噬細(xì)胞陽(yáng)性染色面積成正比(p=0.374,r=0.007),與TUNEL陽(yáng)性染色面積成正比(r=0.329,p=0.018),與平滑肌SMC陽(yáng)性染色面積(r=-0.309,p=0.027)以及膠原染色面積(r=-0.304,p=0.030)成反比。4.M2BP對(duì)斑塊形成和穩(wěn)定性的影響及其炎性調(diào)控機(jī)制的基礎(chǔ)研究4.1 M2BP對(duì)斑塊形成和穩(wěn)定性影響的體內(nèi)研究實(shí)驗(yàn)完成時(shí)三組小鼠的體重和血脂含量(總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇以及高密度脂蛋白膽固醇)無(wú)顯著差異。慢病毒轉(zhuǎn)染后血清Elisa顯示lent i-M2BP組M2BP水平相比于空病毒組和PBS組明顯降低(p0.05)。免疫組化、Western blot和RT-PCR顯示lenti-M2BP組M2BP的蛋白和基因表達(dá)水平相比于空病毒組和PBS組明顯降低(p0.05)。大體油紅0染色和主動(dòng)脈根部HE染色示lenti-M2BP組的主動(dòng)脈AS病變范圍和主動(dòng)脈根部AS病變面積顯著降低。Lent i-M2BP組的巨噬細(xì)胞和脂質(zhì)成分明顯低于Lenti-nu]]和PBS組,而平滑肌和膠原成分明顯高于Lenti-null和PBS組,易損指數(shù)明顯低于Lenti-null和PBS組。免疫組化和RT-PCR分析顯示:Lenti-M2BP組的黏附分子(ICAM 1)、炎癥因子(IL-6、MCP-1、Lp-PLA2)、基質(zhì)蛋白酶(MMP9和MMP2)水平和血管新生(CD31、VEGFA、Flt-1)明顯低于 Lenti-null 和 PBS 組。4.2 M2BP炎性調(diào)控機(jī)制的體外研究Ox-LDL能夠濃度依賴和時(shí)間依賴性地上調(diào)THP-1細(xì)胞內(nèi)M2BP的表達(dá)。多種炎癥因子(ox-LDL 20μg/ml、IL-1β10ng/ml、TNF-α1Ong/ml)可以濃度依賴和時(shí)間依賴性地上調(diào)THP-1細(xì)胞內(nèi)M2BP的表達(dá)并呈現(xiàn)疊加增強(qiáng)效應(yīng)。同時(shí),它們也可以刺激HUVEC細(xì)胞上調(diào)M2BP的合成分泌并呈現(xiàn)疊加效應(yīng)。而重組蛋白rhM2BP又可以濃度依賴和時(shí)間依賴性地刺激THP-1細(xì)胞分泌多種炎癥因子(IL-6,IL-8,TNF-α,MMP-9,Lp-PLA2),并且重組蛋白rhM2BP可以濃度依賴性地促進(jìn)HUVEC細(xì)胞分泌趨化因子(IL-8和MCP-1)并上調(diào)表面黏附分子(ICAM-1、VCAM-1和E-selectin)的表達(dá)。另外,rhM2BP刺激可以促進(jìn)THP-1單核細(xì)胞與HUVEC細(xì)胞的黏附,還可以促進(jìn)THP-1細(xì)胞的趨化。重組蛋白rhM2BP可以濃度依賴性和時(shí)間依賴性地上調(diào)THP-1細(xì)胞內(nèi)MMP9和MMP2的表達(dá)和活性。并且2ug/ml的rhM2BP刺激THP-1細(xì)胞1h即可促使NF-kB p65和MAPK(ERK、P38和JNK)信號(hào)通路分子顯著磷酸化激活。而給予NF-kB p65和MAPK通路抑制劑預(yù)刺激1h后再給予rhM2BP刺激24h可以顯著下調(diào)MMP9和MMP2的表達(dá)和活性。結(jié)論:(1)M2BP在ACS患者的外周血中高表達(dá)并與冠脈復(fù)雜病變相關(guān);外周血M2BP的水平對(duì)ACS患者的預(yù)后有獨(dú)立預(yù)測(cè)價(jià)值;M2BP聯(lián)合GRACE評(píng)分可以提高其對(duì)ACS的預(yù)后診斷價(jià)值。(2)PBMC是外周血M2BP的重要細(xì)胞學(xué)來(lái)源,ACS患者的PBMC中M2BP的mRNA表達(dá)水平明顯升高且對(duì)冠脈復(fù)雜病變有良好的診斷價(jià)值和獨(dú)立預(yù)測(cè)價(jià)值。(3)M2BP在不穩(wěn)定頸動(dòng)脈斑塊和斑塊內(nèi)的易損位點(diǎn)是高表達(dá)的,并且與臨床缺血癥狀顯著相關(guān),提示M2BP參與了頸動(dòng)脈斑塊去穩(wěn)定性的過(guò)程。(4)M2BP受炎癥因子的調(diào)控,并可以通過(guò)上調(diào)單核巨噬細(xì)胞內(nèi)炎癥因子的合成分泌、上調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞表面黏附分子的表達(dá)和趨化因子的合成分泌、促進(jìn)單核細(xì)胞的趨化遷移及其與血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附、參與斑塊內(nèi)的血管新生等機(jī)制促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展和斑塊的去穩(wěn)定性。(5)M2BP通過(guò)激活細(xì)胞內(nèi)NF-kB p65和MAPK(P38、ERK和JNK)信號(hào)通路上調(diào)單核巨噬細(xì)胞MMP2和MMP9的表達(dá)促進(jìn)膠原的降解進(jìn)而促進(jìn)斑塊的易損性。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R543.5
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
符號(hào)說(shuō)明
前言
第一章 M2BP與斑塊去穩(wěn)定性的臨床相關(guān)性研究
    第一部分 M2BP在冠心病患者外周血的表達(dá)及其在ACS患者中預(yù)后價(jià)值研究
        材料
        方法
        結(jié)果
        附表
        附圖
    第二部分 M2BP在冠心病患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中的表達(dá)及對(duì)復(fù)雜斑塊的預(yù)測(cè)價(jià)值研究
        材料
        方法
        結(jié)果
        附表
        附圖
    第三部分 M2BP在人體頸動(dòng)脈斑塊中的表達(dá)及其與斑塊去穩(wěn)定性的相關(guān)研究
        材料
        方法
        結(jié)果
        附表
        附圖
    討論
    結(jié)論
第二章 M2BP對(duì)斑塊形成和穩(wěn)定性的影響及其炎性調(diào)控機(jī)制的基礎(chǔ)研究
    材料
    方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
    附表
    附圖
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀博士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表
英文論著Ⅰ
英文論著Ⅱ

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Tomohiro Maekawa;Yoshihiro Kamada;Yusuke Ebisutani;Makiko Ueda;Tomoki Hata;Koichi Kawamoto;Shinji Takamatsu;Kayo Mizutani;Mayuka Shimomura;Tomoaki Sobajima;Hironobu Fujii;Kotarosumitomo Nakayama;Kimihiro Nishino;Makoto Yamada;Takashi Kumada;Toshifumi Ito;Hidetoshi Eguchi;Hiroaki Nagano;Eiji Miyoshi;;Serum Mac-2 binding protein is a novel biomarker for chronic pancreatitis[J];World Journal of Gastroenterology;2016年17期

本文編號(hào)：2888839