研究背景腹主動脈瘤(Abdominal aortic aneurysm,AAA)是一種具有高致死危險的腹主動脈局部擴張性疾病,一旦瘤體破裂,患者死亡率超過80%�，F(xiàn)今動脈瘤的患病率仍在持續(xù)上升,但其形成機制仍不清楚;目前主要治療手段以外科手術為主,內科藥物干預方法非常有限。研究發(fā)現(xiàn),中膜平滑肌細胞數目的減少及其收縮功能的降低,是瘤體形成過程中的重要病理機制。然而,上述分子調節(jié)機制及可能的干預靶點仍有待進一步闡明。我們的前期臨床研究結果提示乙醛脫氫酶2(Aldehyde dehydrogenase 2,ALDH2)與動脈瘤的發(fā)生發(fā)展關系十分密切,可影響血管平滑肌細胞的表型轉化,在此基礎上,我們進一步利用動脈瘤動物模型,深入研究了ALDH2影響動脈瘤發(fā)生發(fā)展的病理機制及干預靶點。研究目的(1)探討ALDH2是否影響ApoE-/-小鼠腹主動脈瘤的發(fā)生和發(fā)展(2)探討ALDH2影響腹主動脈瘤發(fā)生發(fā)展的相關分子機制(3)研究影響動脈瘤發(fā)生的潛在干預措施研究方法一、體內(動物學)實驗1.建立ApoE-/-小鼠腹主動脈瘤模型:將血管緊張素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,ANGⅡ,1.44 mg/kg/d)溶于生理鹽水(Normal saline,NS)裝入滲透泵中并埋入ApoE-/-小鼠體內,持續(xù)泵入28天后建立AAA小鼠模型。2.ALDH2的干預措施:腹腔注射ALDH2特異性抑制劑(Daidzin,75 mg/kg/d),小鼠隨機分組:DMSO假手術組;Daidzin假手術組;ANGⅡ+DMSO 組;ANGⅡ+Daidzin 組;3.建立心肌素(myocardin,Myocd)干擾小鼠腹主動脈瘤模型(1)尾靜脈注射攜帶有Myocd-shRNA或空載體的腺相關病毒亞型2(Adeno-associated virus2,AAV2),構建Myocd干擾或對照小鼠模型,蛋白印跡法檢測小鼠血管組織中的Myocd水平;(2)按照上述方法構建小鼠腹主動脈瘤模型,應用ApoE-/-小鼠,及雙敲小鼠(ALDH2-/-ApoE-/-Double knock out,DKO),分組為:ApoE-/-+NC組,ApoE-/-+shRNA組,DKO+shRNA組;4.利用小鼠超聲成像技術檢測各組小鼠腹主動脈直徑;5.VG染色檢測小鼠血管彈力纖維變化;6.HE染色觀察小鼠血管大體形態(tài)變化;7.利用RT-PCR和蛋白印跡法檢測小鼠血管平滑肌細胞標志蛋白及Myocd表達;8.免疫組織化學法檢測小鼠血管平滑肌細胞標志蛋白α平滑肌肌動蛋白(Alpha smooth muscle actin,α-SMA)、平滑肌22α(smooth muscle 22 alpha,SM22α)變化;二、體外(細胞學)實驗1.人原代平滑肌細胞給予ANGⅡ刺激,同時給予Daidzin干預,分組為NS+DMSO組,AGNⅡ+DMSO組,ANGⅡ+Daidzin組;2.ALDH2野生型小鼠主動脈提取原代血管平滑肌細胞并給予ANGⅡ刺激,同時給予miR-31-5p Mimic干預,分組為DMSO+Mimic組,Daidzin+Mimic組,DMSO+Mimic nc組,Daidzin+Mimic nc組;3.ALDH2野生型和ALDH2敲除(Knock out,KO)小鼠主動脈提取原代血管平滑肌細胞并給予ANGⅡ刺激,對照組給予生理鹽水(Normal saline,NS),分組為WT+NS組,KO+NS組,WT+ANGⅡ組,KO+ANGⅡ組;4.利用RT-PCR與蛋白印跡法分別檢測小鼠血管平滑肌細胞標志蛋白及心肌素表達情況;研究結果1.抑制乙醛脫氫酶2活性可以減少腹主動脈瘤的發(fā)生;2.抑制乙醛脫氫酶2活性可通過增加心肌素的表達水平維持平滑肌細胞的收縮功能;3.乙醛脫氫酶2可通過miR-31-5p影響心肌素的表達進而影響平滑肌細胞表型轉化和AAA的發(fā)生。研究結論ALDH2在腹主動脈瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。抑制ALDH2的活性通過抑制miR-31-5p增加心肌素的表達調節(jié)血管平滑肌細胞表型轉化,抑制平滑肌細胞受到AngⅡ刺激后向分泌型轉化,維持血管的收縮性和完整性,從而減少腹主動脈瘤的發(fā)生發(fā)展。
【學位單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R543.1
【部分圖文】：

圖１．抑制乙酸脫氫酶２活性可以減輕血管緊張素２導致的血管擴張??（Ａ、Ｂ）利用小鼠無創(chuàng)血壓計測量小鼠放泵前安靜時血壓，各組沒有統(tǒng)計學差??異；（Ｃ）利用小動物超聲儀測量小鼠放泵前腹主動脈直徑，各組沒有統(tǒng)計學差??異；（Ｄ、Ｅ）利用小鼠無創(chuàng)血壓計測量小鼠放泵后２８天安靜時血壓［＊Ｐ＜０．０５ｖｓ．??ＮＳ＋ＤＭＳＯ，?＾＜０．０５?ｖｓ．?ＮＳ＋Ｄａｉｄｚｉｎ］；?（Ｆ）利用小動物超聲儀測量小鼠放泵后??２８?天腹主動脈直徑［＊尸＜０．０５?ｖｓ．?ＮＳ＋ＤＭＳＯ，?＃尸＜０．０５?ｖｓ．?Ａｎｇｌｌ＋ＤＭＳＯ］。??

圖２．抑制乙醛脫氣酶２活性可以減少腹主動脈瘤的發(fā)生率??（Ａ）相機拍攝小鼠血管大體圖片，紅色突出處為瘤體；（Ｂ）小鼠腹主動脈瘤統(tǒng)??計ＮＳ＋ＤＭＳＯ組?０％，?ＮＳ＋Ｄａｉｄｚｉｎ組?０％，?Ａｎｇｌｌ＋ＤＭＳＯ組?６３．３％，Ａｎｇｌｌ＋Ｄａｉｄｚｉｎ??組４０％；?（Ｃ）?ＨＥ染色觀察小鼠血管病理變化，藍色為胞核，紅色為細胞質（放??大倍數：４倍，標尺：５００?ｐＭ）；?ＶＧ染色小鼠血管病理變化，黑色為彈力纖維，??紅色為細胞質（放大倍數：４０倍，標尺：５０?ｐＭ）；?（Ｄ）彈力纖維降解評分評價??彈力纖維情況［＊Ｐ＜０．０５?ｖｓ．?ＮＳ＋ＤＭＳＯ，＃Ｐ＜０．０５?ｖｓ．?Ａｎｇｌｌ＋ＤＭＳＯ］。??

圖３．抑制乙醒脫氫酶２活性可減少腹主動脈瘤形成中平滑肌細胞的??表型轉化??（Ａ）免疫組化染色法檢測血管組織ａ－ＳＭＡ的表達及分布，棕色代表ａ－ＳＭＡ，??藍色代表細胞核；（Ｂ）免疫組化染色法檢測血管組織ＳＭ２２ａ的表達及分布，棕??色代表ＳＭ２２ａ，藍色代表細胞核（放大倍數：４０倍，標尺：５（＾ｉＭ）；?（Ｃ）ＲＴ－ＰＣＲ??評價血管組織?Ｍｙｏｃｄ?表達情況［＊Ｐ?＜?０．０５?ｖｓ．?ＮＳ＋ＤＭＳ０，＃Ｐ?＜?０．０５?ｖｓ．??ＡｎｇＩＩ＋ＤＭＳＯ］；?（Ｄ）?ＲＴ－ＰＣＲ評價血管組織ａ－ＳＭＡ表達情況［＃Ｐ＜０．０５?ｖｓ．??Ａｎｇｌｌ＋ＤＭＳＯ］。??
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本文編號：2878823