背景:促血管生成、重建血運(yùn),可減少心肌細(xì)胞凋亡和壞死,是治療心肌梗死(MI)的關(guān)鍵。盡管臨床上有諸多治療方案,但基本都不能改善預(yù)后;基于細(xì)胞或非細(xì)胞的組織工程策略雖已取得一定進(jìn)展,但都未過(guò)渡到臨床使用階段。此外,移植細(xì)胞歸巢率低、滯留率低、存活率差以及生物材料植入和降解困難等問(wèn)題限制了其應(yīng)用,MI后心力衰竭的死亡率持續(xù)攀升。硅酸鈣(CS)因其顯著促血管生成效果被廣泛用于硬組織工程,其主要通過(guò)離子溶解產(chǎn)物(特別是硅離子)發(fā)揮作用,但其在軟組織缺血相關(guān)疾病如MI中的應(yīng)用鮮有探討。目的:探討CS離子浸提液對(duì)小鼠心肌梗死的修復(fù)作用及機(jī)制。方法與結(jié)果:1.制備CS粉末及不同濃度離子浸提液,采用ICP-OES分析各離子的濃度;常氧和糖氧剝奪條件下,CCK-8檢測(cè)不同濃度的CS浸提液對(duì)心肌細(xì)胞活力的影響;靜脈注射CS浸提液,探討CS在體內(nèi)的分布、代謝以及安全性。選取1/64CS作為后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的干預(yù)濃度并初步證實(shí)CS靜脈注射在體內(nèi)是安全的。2.建立急性心肌梗死模型,采用CS原液(200μ1/隔天)靜脈注射干預(yù)14天,對(duì)比治療前后心臟超聲水平;Masson染色、Tunel免疫組織化學(xué)染色、vWF、Isolectin-GS IB4以及Cx43免疫熒光染色、血清NT-proBNP、HW/BW評(píng)估CS對(duì)心肌纖維化、心肌肥大以及新生血管形成等影響。結(jié)果提示,CS浸提液能改善急性心肌梗死后小鼠心功能,抑制心肌細(xì)胞凋亡,促進(jìn)新生血管形成。3.體外建立糖氧剝奪的細(xì)胞模型,構(gòu)建大鼠原代心肌細(xì)胞和人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)體系。Tunel染色檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡情況;RT-qPCR檢測(cè)VEGF、KDR、Cx43基因表達(dá)情況;Western blot檢測(cè)c-caspase-3、Cx43以及MAPKs家族蛋白表達(dá)情況;Cx43、vWF免疫熒光檢測(cè)新生血管形成情況。結(jié)果提示,1/64CS能促進(jìn)共培養(yǎng)體系內(nèi)皮細(xì)胞新生血管的形成,促進(jìn)VEGF和KDR的表達(dá);抑制糖氧剝奪誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡,抑制c-caspase-3蛋白的表達(dá),調(diào)節(jié)Cx43和MAPKs家族蛋白的表達(dá)。結(jié)論:CS浸提液能改善心肌梗死后小鼠心功能,其可能通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞間交流,上調(diào)Cx43表達(dá),促進(jìn)VEGF介導(dǎo)的新生血管的形成;調(diào)節(jié)MAPKs家族蛋白表達(dá),抑制心肌細(xì)胞凋亡等途徑發(fā)揮作用。
【學(xué)位單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R542.22
【部分圖文】：

３．２常氧和糖氧剝奪條件下，不同濃度ＣＳ浸提液對(duì)原代心肌細(xì)胞活力的影響。??首先，為了鑒定分離得到的原代心肌細(xì)胞純度，我們采用了對(duì)心肌細(xì)胞特??異性蛋白ｃＴｎＴ和成纖維細(xì)胞特異性蛋白ｖｉｍｅｎｔｉｎ進(jìn)行免疫熒光染色。從圖１－１??可以看出，采用差速貼壁法分離，得到的心肌細(xì)胞懸液中，成纖維細(xì)胞的數(shù)量??２０??

Ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ?Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ??圖１－１分離得到的原代心肌細(xì)胞純度分析??Ｆｉｇ．?１－１?Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ?ｏｆＮＲＣＭｓ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｉｓｏｌａｔｅｄ?ｐｒｉｍａｒｙ?ｃｅｌｌｓ??（ａ）?ｃＴｎＴ?（色，心肌細(xì)胞特異性標(biāo)記）綠和ｖｉｍｅｎｔｉｎ?（紅色，成纖維細(xì)胞特異性標(biāo)記）免疫熒??光染色。（ｂ）統(tǒng)計(jì)分析分離得到的細(xì)胞中ＮＲＣＭｓ所占的比例（ｎ＝５）．??為了評(píng)估Ｓｉ離子的保護(hù)作用，我們檢測(cè)了正常條件和糖氧剝奪環(huán)境下ＣＳ??浸提液對(duì)ＮＲＣＭｓ的細(xì)胞活力的影響。正常條件下處理５天后，１／８，?１／１６，?１／３２??和１／６４?ＣＳ?（ＤＭＥＭ）能顯著改善心肌細(xì)胞的活力，但ＣＳ原液對(duì)心肌細(xì)胞活力??沒(méi)有影響，提示在正常條件下，一定濃度范圍的Ｓｉ離子對(duì)心肌細(xì)胞具有保護(hù)作??用（圖ｌ－２ａ）。從圖ｌ－２ｂ可以發(fā)現(xiàn)，糖氧剝奪的ＰＢＳ培養(yǎng)基中，ＮＲＣＭｓ的活力??顯著下降。而１／８，?１／１６，?１／３２和１／６４?ＣＳ能改善糖氧剝奪環(huán)境下心肌細(xì)胞活力，??其中１／３２和１／６４ＣＳ其保護(hù)作用最明顯。這些結(jié)果提示

??基因的表達(dá)情況。從圖１－３可以看出，正常條件下，相比ｃｏｎｔｒｏｌ組，１／６４ＣＳ培??養(yǎng)組心肌細(xì)胞內(nèi)ｃＴｎＴ和Ｍｙｈ６基因表達(dá)情況均顯著上升。然而，在糖氧剝奪條??件下，只有ｃＴｎＴ基因表達(dá)上升，Ｍｙｈ６卻未見(jiàn)顯著差異。??ａ?ｂ??｜?ｃｏｎｔｒｏｌ?■?ｃｏｎｔｒｏｌ??２?５１?＊＊?■１／６４ＣＳ?２．５－１?｜１／６４ＣＳ??Ｘ１２．〇．?＾?１．１２．０－?工??１１１＇５＇?Ｉ?ｉ?ＩＩ１＇５－?Ｔ?ｉ??ｑ：：ｉｌｌ?８１?５｜：：１ｉＬｕ＿??ｎｏｒｍｏｘｉａ?ｈｙｐｏｘｉａ?ｎｏｒｍｏｘｉａ?ｈｙｐｏｘｉａ??圖１－３正�；蛱茄鮿儕Z條件下，１／６４ＣＳ浸提液對(duì)大鼠原代心肌細(xì)胞內(nèi)心肌特異性標(biāo)記ｃＴｎＴ??以及Ｍｙｈ６基因表達(dá)情況的影響??Ｆｉｇ．?１－３?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｓｉｌｉｃｏｎ－ｅｎｒｉｃｈｅｄ?ｉｏｎ?ｅｘｔｒａｃｔｓ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅ?ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ｍａｒｋｅｒ??ｇｅｎｅｓ?ｕｎｄｅｒ?ｎｏｒｍｏｘｉａ?ａｎｄ?ｇｌｕｃｏｓｅ／ｏｘｙｇｅｎ?ｄｅｐｒｉｖｅｄ?ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ??⑷正常（培養(yǎng)５天）或糖氧剝奪（處理１２０分鐘）條件下，原代心肌細(xì)胞內(nèi)心肌特異性標(biāo)??記ｃＴｎＴ基因表達(dá)情況。（ｂ）正常（培養(yǎng)５天）或糖氧剝奪（處理１２０分鐘）條件下，原代心??肌細(xì)胞心肌特異性標(biāo)記Ｍｙｈ６基因表達(dá)情況。＊ｐ＜０．０５，?＊＊ｐ＜０．０１ｒａ．ｃｏｎｔｒｏｌ組．??３．４?ＣＳ浸提液靜脈注射后Ｓｉ４＋在體內(nèi)的分布、代謝及安全性??在體外的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張娟娟;;運(yùn)動(dòng)與心肌細(xì)胞凋亡[J];山西體育科技;2011年03期

2 房佳惠;楊巍;;Bcl-2家族蛋白對(duì)心肌細(xì)胞凋亡作用的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代醫(yī)學(xué);2017年07期

3 張星;麻春杰;;中醫(yī)藥抗心肌缺血再灌注損傷心肌細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展[J];中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2017年14期

4 朱莉拉;張安琪;卓小煌;酈娜;;乙醇誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡的發(fā)生機(jī)制的研究進(jìn)展[J];人人健康;2016年20期

5 邢維新;;運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練與心肌細(xì)胞凋亡研究的新進(jìn)展[J];綿陽(yáng)師范學(xué)院學(xué)報(bào);2011年02期

6 蔣曉明;屈紅林;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞防治心肌細(xì)胞凋亡的基因及蛋白研究[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2011年36期

7 方禮欽;屈紅林;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與運(yùn)動(dòng)性心肌細(xì)胞凋亡[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2010年01期

8 郝言杰;王元書(shū);解硯英;牟艷玲;;心肌細(xì)胞凋亡與梗死的研究進(jìn)展[J];食品與藥品;2009年01期

9 朱漢華;李浪;汪熠;李佳荃;文偉明;陸永光;趙獻(xiàn)明;;TUNEL檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡的影響因素探討[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2009年01期

10 申小寶;孟雋卿;;運(yùn)動(dòng)與心肌細(xì)胞凋亡[J];吉林體育學(xué)院學(xué)報(bào);2009年04期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李若天;miR-145調(diào)控心肌細(xì)胞凋亡、肥大的機(jī)制研究[D];南京大學(xué);2013年

2 易敏;CS離子浸提液修復(fù)小鼠心肌梗死的實(shí)驗(yàn)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2019年

3 黃偉;miR-21/miR-146a抗心肌細(xì)胞凋亡作用及機(jī)制[D];哈爾濱醫(yī)科大學(xué);2016年

4 李靜;長(zhǎng)鏈非編碼RNA LINC00339在阿霉素誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡中的作用及其機(jī)制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2019年

5 張蓓;絲裂原活化蛋白激酶、鈣蛋白酶和膜聯(lián)蛋白A5在醛固酮誘導(dǎo)原代心肌細(xì)胞凋亡中的分子機(jī)制及相關(guān)臨床研究[D];貴州醫(yī)科大學(xué);2017年

6 孫羽涵;miR-486調(diào)控p53/Bbc3/BCL-2凋亡通路減輕冠狀動(dòng)脈微栓塞致心肌損傷的機(jī)制研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2017年

7 張曉卉;H2和H3 relaxin抑制高糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡的作用及機(jī)制[D];哈爾濱醫(yī)科大學(xué);2014年

8 劉丹;白介素-33對(duì)高糖誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];武漢大學(xué);2016年

9 李鵬飛;血清外泌體通過(guò)ERK1/2發(fā)揮抵抗H_2O_2誘導(dǎo)的大鼠心肌細(xì)胞凋亡的作用[D];南京醫(yī)科大學(xué);2018年

10 閆夢(mèng)捷;MiR-199a-5p/miR-31a-5p對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的影響及其分子機(jī)制[D];吉林大學(xué);2018年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 畢藝?guó)Q;PI3K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在異綠原酸A抗氧化應(yīng)激誘導(dǎo)H9C2心肌細(xì)胞凋亡中的作用研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2019年

2 李鳳;芍藥苷預(yù)處理對(duì)大鼠缺血再灌注損傷心肌細(xì)胞凋亡及自噬的調(diào)控作用[D];吉林大學(xué);2019年

3 王乙茹;磷酸酶PHLPP1對(duì)心肌損傷后心肌細(xì)胞凋亡與心肌炎癥纖維化的調(diào)控及機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué);2019年

4 馬平;膽固醇水平變化對(duì)心肌炎心肌細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制研究[D];廈門大學(xué);2018年

5 姚玉娟;轉(zhuǎn)錄因子EPAS1和EGR-1在心肌細(xì)胞凋亡中的功能研究[D];山東大學(xué);2019年

6 俞泓;二氧化硅納米顆粒介導(dǎo)的microRNA-24轉(zhuǎn)染對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的影響[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2019年

7 寧娜;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與自噬交互作用參與β_1-腎上腺素受體自身抗體誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡[D];山西醫(yī)科大學(xué);2019年

8 王景;芪參顆粒抑制AMI后炎癥損傷介導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

9 吳雨婷;淫羊藿次苷Ⅱ?qū)ψ园l(fā)性高血壓大鼠心肌細(xì)胞凋亡的干預(yù)作用及機(jī)制研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2018年

10 吳麗夢(mèng);miR-499-5p通過(guò)靶調(diào)節(jié)Sox6抑制大鼠心梗后心肌細(xì)胞凋亡[D];鄭州大學(xué);2018年

本文編號(hào)：2878897