背景:促血管生成、重建血運,可減少心肌細胞凋亡和壞死,是治療心肌梗死(MI)的關(guān)鍵。盡管臨床上有諸多治療方案,但基本都不能改善預后;基于細胞或非細胞的組織工程策略雖已取得一定進展,但都未過渡到臨床使用階段。此外,移植細胞歸巢率低、滯留率低、存活率差以及生物材料植入和降解困難等問題限制了其應(yīng)用,MI后心力衰竭的死亡率持續(xù)攀升。硅酸鈣(CS)因其顯著促血管生成效果被廣泛用于硬組織工程,其主要通過離子溶解產(chǎn)物(特別是硅離子)發(fā)揮作用,但其在軟組織缺血相關(guān)疾病如MI中的應(yīng)用鮮有探討。目的:探討CS離子浸提液對小鼠心肌梗死的修復作用及機制。方法與結(jié)果:1.制備CS粉末及不同濃度離子浸提液,采用ICP-OES分析各離子的濃度;常氧和糖氧剝奪條件下,CCK-8檢測不同濃度的CS浸提液對心肌細胞活力的影響;靜脈注射CS浸提液,探討CS在體內(nèi)的分布、代謝以及安全性。選取1/64CS作為后續(xù)細胞實驗的干預濃度并初步證實CS靜脈注射在體內(nèi)是安全的。2.建立急性心肌梗死模型,采用CS原液(200μ1/隔天)靜脈注射干預14天,對比治療前后心臟超聲水平;Masson染色、Tunel免疫組織化學染色、vWF、Isolectin-GS IB4以及Cx43免疫熒光染色、血清NT-proBNP、HW/BW評估CS對心肌纖維化、心肌肥大以及新生血管形成等影響。結(jié)果提示,CS浸提液能改善急性心肌梗死后小鼠心功能,抑制心肌細胞凋亡,促進新生血管形成。3.體外建立糖氧剝奪的細胞模型,構(gòu)建大鼠原代心肌細胞和人臍靜脈內(nèi)皮細胞共培養(yǎng)體系。Tunel染色檢測心肌細胞凋亡情況;RT-qPCR檢測VEGF、KDR、Cx43基因表達情況;Western blot檢測c-caspase-3、Cx43以及MAPKs家族蛋白表達情況;Cx43、vWF免疫熒光檢測新生血管形成情況。結(jié)果提示,1/64CS能促進共培養(yǎng)體系內(nèi)皮細胞新生血管的形成,促進VEGF和KDR的表達;抑制糖氧剝奪誘導的心肌細胞凋亡,抑制c-caspase-3蛋白的表達,調(diào)節(jié)Cx43和MAPKs家族蛋白的表達。結(jié)論:CS浸提液能改善心肌梗死后小鼠心功能,其可能通過促進細胞間交流,上調(diào)Cx43表達,促進VEGF介導的新生血管的形成;調(diào)節(jié)MAPKs家族蛋白表達,抑制心肌細胞凋亡等途徑發(fā)揮作用。
【學位單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R542.22
【部分圖文】：

３．２常氧和糖氧剝奪條件下，不同濃度ＣＳ浸提液對原代心肌細胞活力的影響。??首先，為了鑒定分離得到的原代心肌細胞純度，我們采用了對心肌細胞特??異性蛋白ｃＴｎＴ和成纖維細胞特異性蛋白ｖｉｍｅｎｔｉｎ進行免疫熒光染色。從圖１－１??可以看出，采用差速貼壁法分離，得到的心肌細胞懸液中，成纖維細胞的數(shù)量??２０??

Ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ?Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ??圖１－１分離得到的原代心肌細胞純度分析??Ｆｉｇ．?１－１?Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ?ｏｆＮＲＣＭｓ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｉｓｏｌａｔｅｄ?ｐｒｉｍａｒｙ?ｃｅｌｌｓ??（ａ）?ｃＴｎＴ?（色，心肌細胞特異性標記）綠和ｖｉｍｅｎｔｉｎ?（紅色，成纖維細胞特異性標記）免疫熒??光染色。（ｂ）統(tǒng)計分析分離得到的細胞中ＮＲＣＭｓ所占的比例（ｎ＝５）．??為了評估Ｓｉ離子的保護作用，我們檢測了正常條件和糖氧剝奪環(huán)境下ＣＳ??浸提液對ＮＲＣＭｓ的細胞活力的影響。正常條件下處理５天后，１／８，?１／１６，?１／３２??和１／６４?ＣＳ?（ＤＭＥＭ）能顯著改善心肌細胞的活力，但ＣＳ原液對心肌細胞活力??沒有影響，提示在正常條件下，一定濃度范圍的Ｓｉ離子對心肌細胞具有保護作??用（圖ｌ－２ａ）。從圖ｌ－２ｂ可以發(fā)現(xiàn)，糖氧剝奪的ＰＢＳ培養(yǎng)基中，ＮＲＣＭｓ的活力??顯著下降。而１／８，?１／１６，?１／３２和１／６４?ＣＳ能改善糖氧剝奪環(huán)境下心肌細胞活力，??其中１／３２和１／６４ＣＳ其保護作用最明顯。這些結(jié)果提示

??基因的表達情況。從圖１－３可以看出，正常條件下，相比ｃｏｎｔｒｏｌ組，１／６４ＣＳ培??養(yǎng)組心肌細胞內(nèi)ｃＴｎＴ和Ｍｙｈ６基因表達情況均顯著上升。然而，在糖氧剝奪條??件下，只有ｃＴｎＴ基因表達上升，Ｍｙｈ６卻未見顯著差異。??ａ?ｂ??｜?ｃｏｎｔｒｏｌ?■?ｃｏｎｔｒｏｌ??２?５１?＊＊?■１／６４ＣＳ?２．５－１?｜１／６４ＣＳ??Ｘ１２．〇．?＾?１．１２．０－?工??１１１＇５＇?Ｉ?ｉ?ＩＩ１＇５－?Ｔ?ｉ??ｑ：：ｉｌｌ?８１?５｜：：１ｉＬｕ＿??ｎｏｒｍｏｘｉａ?ｈｙｐｏｘｉａ?ｎｏｒｍｏｘｉａ?ｈｙｐｏｘｉａ??圖１－３正常或糖氧剝奪條件下，１／６４ＣＳ浸提液對大鼠原代心肌細胞內(nèi)心肌特異性標記ｃＴｎＴ??以及Ｍｙｈ６基因表達情況的影響??Ｆｉｇ．?１－３?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｓｉｌｉｃｏｎ－ｅｎｒｉｃｈｅｄ?ｉｏｎ?ｅｘｔｒａｃｔｓ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｃａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅ?ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ｍａｒｋｅｒ??ｇｅｎｅｓ?ｕｎｄｅｒ?ｎｏｒｍｏｘｉａ?ａｎｄ?ｇｌｕｃｏｓｅ／ｏｘｙｇｅｎ?ｄｅｐｒｉｖｅｄ?ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ??⑷正常（培養(yǎng)５天）或糖氧剝奪（處理１２０分鐘）條件下，原代心肌細胞內(nèi)心肌特異性標??記ｃＴｎＴ基因表達情況。（ｂ）正常（培養(yǎng)５天）或糖氧剝奪（處理１２０分鐘）條件下，原代心??肌細胞心肌特異性標記Ｍｙｈ６基因表達情況。＊ｐ＜０．０５，?＊＊ｐ＜０．０１ｒａ．ｃｏｎｔｒｏｌ組．??３．４?ＣＳ浸提液靜脈注射后Ｓｉ４＋在體內(nèi)的分布、代謝及安全性??在體外的細胞實驗中
【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張娟娟;;運動與心肌細胞凋亡[J];山西體育科技;2011年03期

2 房佳惠;楊巍;;Bcl-2家族蛋白對心肌細胞凋亡作用的研究進展[J];現(xiàn)代醫(yī)學;2017年07期

3 張星;麻春杰;;中醫(yī)藥抗心肌缺血再灌注損傷心肌細胞凋亡的研究進展[J];中醫(yī)藥導報;2017年14期

4 朱莉拉;張安琪;卓小煌;酈娜;;乙醇誘導心肌細胞凋亡的發(fā)生機制的研究進展[J];人人健康;2016年20期

5 邢維新;;運動訓練與心肌細胞凋亡研究的新進展[J];綿陽師范學院學報;2011年02期

6 蔣曉明;屈紅林;;骨髓間充質(zhì)干細胞防治心肌細胞凋亡的基因及蛋白研究[J];中國組織工程研究與臨床康復;2011年36期

7 方禮欽;屈紅林;;骨髓間充質(zhì)干細胞與運動性心肌細胞凋亡[J];中國組織工程研究與臨床康復;2010年01期

8 郝言杰;王元書;解硯英;牟艷玲;;心肌細胞凋亡與梗死的研究進展[J];食品與藥品;2009年01期

9 朱漢華;李浪;汪熠;李佳荃;文偉明;陸永光;趙獻明;;TUNEL檢測心肌細胞凋亡的影響因素探討[J];廣西醫(yī)科大學學報;2009年01期

10 申小寶;孟雋卿;;運動與心肌細胞凋亡[J];吉林體育學院學報;2009年04期

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 李若天;miR-145調(diào)控心肌細胞凋亡、肥大的機制研究[D];南京大學;2013年

2 易敏;CS離子浸提液修復小鼠心肌梗死的實驗研究[D];南方醫(yī)科大學;2019年

3 黃偉;miR-21/miR-146a抗心肌細胞凋亡作用及機制[D];哈爾濱醫(yī)科大學;2016年

4 李靜;長鏈非編碼RNA LINC00339在阿霉素誘導心肌細胞凋亡中的作用及其機制[D];南方醫(yī)科大學;2019年

5 張蓓;絲裂原活化蛋白激酶、鈣蛋白酶和膜聯(lián)蛋白A5在醛固酮誘導原代心肌細胞凋亡中的分子機制及相關(guān)臨床研究[D];貴州醫(yī)科大學;2017年

6 孫羽涵;miR-486調(diào)控p53/Bbc3/BCL-2凋亡通路減輕冠狀動脈微栓塞致心肌損傷的機制研究[D];廣西醫(yī)科大學;2017年

7 張曉卉;H2和H3 relaxin抑制高糖誘導的心肌細胞凋亡的作用及機制[D];哈爾濱醫(yī)科大學;2014年

8 劉丹;白介素-33對高糖誘導心肌細胞凋亡的保護作用及機制研究[D];武漢大學;2016年

9 李鵬飛;血清外泌體通過ERK1/2發(fā)揮抵抗H_2O_2誘導的大鼠心肌細胞凋亡的作用[D];南京醫(yī)科大學;2018年

10 閆夢捷;MiR-199a-5p/miR-31a-5p對心肌細胞凋亡的影響及其分子機制[D];吉林大學;2018年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 畢藝鳴;PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導通路在異綠原酸A抗氧化應(yīng)激誘導H9C2心肌細胞凋亡中的作用研究[D];南方醫(yī)科大學;2019年

2 李鳳;芍藥苷預處理對大鼠缺血再灌注損傷心肌細胞凋亡及自噬的調(diào)控作用[D];吉林大學;2019年

3 王乙茹;磷酸酶PHLPP1對心肌損傷后心肌細胞凋亡與心肌炎癥纖維化的調(diào)控及機制研究[D];中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學;2019年

4 馬平;膽固醇水平變化對心肌炎心肌細胞凋亡的影響及其機制研究[D];廈門大學;2018年

5 姚玉娟;轉(zhuǎn)錄因子EPAS1和EGR-1在心肌細胞凋亡中的功能研究[D];山東大學;2019年

6 俞泓;二氧化硅納米顆粒介導的microRNA-24轉(zhuǎn)染對心肌細胞凋亡的影響[D];安徽醫(yī)科大學;2019年

7 寧娜;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與自噬交互作用參與β_1-腎上腺素受體自身抗體誘導的心肌細胞凋亡[D];山西醫(yī)科大學;2019年

8 王景;芪參顆粒抑制AMI后炎癥損傷介導心肌細胞凋亡的機制研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2016年

9 吳雨婷;淫羊藿次苷Ⅱ?qū)ψ园l(fā)性高血壓大鼠心肌細胞凋亡的干預作用及機制研究[D];遵義醫(yī)學院;2018年

10 吳麗夢;miR-499-5p通過靶調(diào)節(jié)Sox6抑制大鼠心梗后心肌細胞凋亡[D];鄭州大學;2018年

本文編號：2878897