目的:(1)本實驗研究藁本內(nèi)酯(Z-ligustilide,LIG)對自發(fā)性高血壓大鼠胸主動脈粥樣硬化形成病理性中內(nèi)膜增生的作用。(2)研究藁本內(nèi)酯抑制自發(fā)性高血壓大鼠病理性中內(nèi)膜增生的機制:1)探討LIG對自發(fā)性高血壓大鼠血壓、血脂指標(biāo)的作用。2)LIG對自發(fā)性高血壓大鼠胸主動脈血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)遷移作用影響。3)LIG對自發(fā)性高血壓大鼠胸主動脈VSMCs的c-Myc及α-SMA蛋白的表達(dá)影響。方法:(1)選取10周齡的雄性自發(fā)性高血壓大鼠通過采用腹腔注射維生素D_3 60萬/U后聯(lián)合高脂飼料喂養(yǎng)3周的方法,塑造動脈粥樣硬化病理性中內(nèi)膜增生的模型。(2)造模成功后的自發(fā)性高血壓大鼠分別腹腔注射藥物濃度為0,10,20,40 mg/kg的藁本內(nèi)酯2周,同時喂養(yǎng)普通飼料;然后觀察并測量自發(fā)性高血壓大鼠胸主動脈增生的中內(nèi)膜。(3)通過無創(chuàng)動脈檢測儀測量自發(fā)性高血壓大鼠每周周一上午9點的尾動脈的血壓,每次測量3次,取3次血壓值的平均值。(4)通過采血針收集每只自發(fā)性高血壓大鼠下腔靜脈的血液2 ml,3000 r/min離心后取血清檢測血脂與鈣離子水平。(5)在超凈臺下提取自發(fā)性高血壓大鼠胸主動脈的中層組織,通過組織貼壁法培養(yǎng)出大鼠胸主動脈血管平滑肌細(xì)胞。(6)選用血管平滑肌細(xì)胞特定蛋白α-SMA抗體通過細(xì)胞免疫熒光法來鑒定細(xì)胞。(7)采用細(xì)胞劃痕實驗和transwell實驗檢測藁本內(nèi)酯對自發(fā)性高血壓大鼠胸主動脈血管平滑肌細(xì)胞遷移作用的變化。(8)通過蛋白免疫印跡法檢測藁本內(nèi)酯對自發(fā)性高血壓大鼠體內(nèi)血管平滑肌細(xì)胞c-Myc、α-SMA蛋白水平的表達(dá)。(9)實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 23.0統(tǒng)計軟件分析,實驗數(shù)據(jù)先進(jìn)行正態(tài)性檢驗和方差齊性檢驗,在方差齊時用單因素方差分析,組間兩兩比較采用LSD(L)法;方差不齊時用非參數(shù)檢驗,當(dāng)P0.05時,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:(1)造模3周后觀察到自發(fā)性高血壓大鼠胸主動脈中內(nèi)膜粥樣硬化形成并伴有有明顯的中內(nèi)膜增生。(2)藁本內(nèi)酯在藥物濃度10,20,40 mg/kg對動脈粥樣硬化形成的病理性中內(nèi)膜增生抑制作用與對照組比較均有顯著差異(P0.001)。(3)藁本內(nèi)酯在藥物濃度10,20,40 mg/kg降低自發(fā)性高血壓大鼠收縮壓和舒張壓的作用與對照組比較均有顯著差異(P0.001)。(4)藁本內(nèi)酯在藥物濃度為40 mg/kg降低自發(fā)性高血壓大鼠血膽固醇、甘油三酯的作用與對照組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01)。但對低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、血鈣離子表達(dá)水平未見明顯差異的影響(P0.05)。(5)通過在光學(xué)顯微鏡下對細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察及細(xì)胞免疫熒光檢測得知培養(yǎng)的細(xì)胞是所需要的平滑肌細(xì)胞。(6)藁本內(nèi)酯能在藥物濃度10,20,40 mg/kg對自發(fā)性高血壓大鼠胸主動脈血管平滑肌細(xì)胞的遷移抑制作用與對照組比較均有顯著差異(P0.001)。(7)藁本內(nèi)酯在藥物濃度10,20,40 mg/kg能使自發(fā)性高血壓大鼠體內(nèi)的血管平滑肌細(xì)胞的α-SMA表達(dá)量上調(diào),下降c-Myc蛋白表達(dá)量,與對照組比較均有顯著差異(P0.05)。結(jié)論:藁本內(nèi)酯能有效抑制自發(fā)性高血壓大鼠動脈粥樣硬化形成的病理性中內(nèi)膜增生,我們還發(fā)現(xiàn)藁本內(nèi)酯顯著地抑制大鼠胸主動脈血管平滑肌細(xì)胞的遷移能力。我們實驗還發(fā)現(xiàn)藁本內(nèi)酯降低自發(fā)性高血壓大鼠的收縮壓和舒張壓,對降低血清中的總膽固醇、甘油三酯水平也發(fā)揮作用。
【學(xué)位單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R544.1
【部分圖文】：

圖 1-1 藁本內(nèi)酯結(jié)構(gòu)式分子式：C12H14O2Fig. 1-1 Structure of ligustilideMolecular formula: C12H14O2藥理作用表明，LIG 化學(xué)成分具有舒張血管、抗炎、41]。王力宏等[42]通過實驗研究顯示了藁本內(nèi)的表達(dá)從而抑制腫瘤新生血管的生成，從而性腦白質(zhì)損傷的研究中發(fā)現(xiàn)，Kuang X 等[43]的神經(jīng)炎性具有顯著的抑制作用，對腦白質(zhì)APK/NF-kB 與 MAPK/STAT3 信號通路有關(guān)。過抑制有絲分裂原激活蛋白激酶和核因子 k影響。藁本內(nèi)酯具有鎮(zhèn)痛作用，并且研究發(fā)

實驗數(shù)據(jù)采用 SPSS 23.0 統(tǒng)計軟件分析，實驗數(shù)據(jù)先進(jìn)行正態(tài)性檢驗和方差齊性檢驗，在方差齊時用單因素方差分析，組間兩兩比較采用 LSD(L)法；方差不齊時用非參數(shù)檢驗，當(dāng) P< 0.05 時，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。2.3 實驗結(jié)果2.3.1 自發(fā)性高血壓大鼠血管中內(nèi)膜動脈粥樣硬化的形成（1）低倍鏡下可觀察到自發(fā)性高血壓大鼠胸主動脈中內(nèi)膜有明顯的粥樣硬化斑塊形成，并且有不同程度的中內(nèi)膜增厚。（見圖 2-1 a）（2）高倍鏡下可見自發(fā)性高血壓大鼠胸主動脈中內(nèi)膜的內(nèi)皮細(xì)胞脫落，血管中層的血管平滑肌細(xì)胞排列紊亂，并大量增殖和遷移至中內(nèi)膜下形成病理性中內(nèi)膜增生。（見圖 2-2 b）

廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文2.3.2 4 組自發(fā)性高血壓大鼠中內(nèi)膜增生情況通過對 4 組自發(fā)性高血壓大鼠胸主動脈的病理切片的觀察，我們還通過用Imagej 軟件對 4 組大鼠的胸主動脈的中內(nèi)膜進(jìn)行了測量，并且進(jìn)行了統(tǒng)計分析。結(jié)果顯示對照組自發(fā)性高血壓大鼠的胸主動脈中內(nèi)膜有明顯的粥樣硬化的形成并伴有明顯的病理性中內(nèi)膜增生，測量的中內(nèi)膜的厚度為 171.51 ± 11.932 μm。然而，實驗組（10，20，40 mg/kg）對比對照組自發(fā)性高血壓大鼠的胸主動脈中內(nèi)膜的粥樣硬化斑塊有明顯改善，病理性中內(nèi)膜增生明顯受到了抑制，測量統(tǒng)計的中內(nèi)膜的厚度分別為 127.90 ± 5.288 μm、110.24 ± 5.076 μm、93.68 ± 4.111 μm。抑制效果與藥物干預(yù)的濃度呈正比關(guān)系，其中實驗組 40 mg/kg 抑制中內(nèi)膜增生的作用最明顯。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2858199