目的:(1)本實驗研究藁本內(nèi)酯(Z-ligustilide,LIG)對自發(fā)性高血壓大鼠胸主動脈粥樣硬化形成病理性中內(nèi)膜增生的作用。(2)研究藁本內(nèi)酯抑制自發(fā)性高血壓大鼠病理性中內(nèi)膜增生的機制:1)探討LIG對自發(fā)性高血壓大鼠血壓、血脂指標(biāo)的作用。2)LIG對自發(fā)性高血壓大鼠胸主動脈血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)遷移作用影響。3)LIG對自發(fā)性高血壓大鼠胸主動脈VSMCs的c-Myc及α-SMA蛋白的表達影響。方法:(1)選取10周齡的雄性自發(fā)性高血壓大鼠通過采用腹腔注射維生素D_3 60萬/U后聯(lián)合高脂飼料喂養(yǎng)3周的方法,塑造動脈粥樣硬化病理性中內(nèi)膜增生的模型。(2)造模成功后的自發(fā)性高血壓大鼠分別腹腔注射藥物濃度為0,10,20,40 mg/kg的藁本內(nèi)酯2周,同時喂養(yǎng)普通飼料;然后觀察并測量自發(fā)性高血壓大鼠胸主動脈增生的中內(nèi)膜。(3)通過無創(chuàng)動脈檢測儀測量自發(fā)性高血壓大鼠每周周一上午9點的尾動脈的血壓,每次測量3次,取3次血壓值的平均值。(4)通過采血針收集每只自發(fā)性高血壓大鼠下腔靜脈的血液2 ml,3000 r/min離心后取血清檢測血脂與鈣離子水平。(5)在超凈臺下提取自發(fā)性高血壓大鼠胸主動脈的中層組織,通過組織貼壁法培養(yǎng)出大鼠胸主動脈血管平滑肌細胞。(6)選用血管平滑肌細胞特定蛋白α-SMA抗體通過細胞免疫熒光法來鑒定細胞。(7)采用細胞劃痕實驗和transwell實驗檢測藁本內(nèi)酯對自發(fā)性高血壓大鼠胸主動脈血管平滑肌細胞遷移作用的變化。(8)通過蛋白免疫印跡法檢測藁本內(nèi)酯對自發(fā)性高血壓大鼠體內(nèi)血管平滑肌細胞c-Myc、α-SMA蛋白水平的表達。(9)實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 23.0統(tǒng)計軟件分析,實驗數(shù)據(jù)先進行正態(tài)性檢驗和方差齊性檢驗,在方差齊時用單因素方差分析,組間兩兩比較采用LSD(L)法;方差不齊時用非參數(shù)檢驗,當(dāng)P0.05時,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:(1)造模3周后觀察到自發(fā)性高血壓大鼠胸主動脈中內(nèi)膜粥樣硬化形成并伴有有明顯的中內(nèi)膜增生。(2)藁本內(nèi)酯在藥物濃度10,20,40 mg/kg對動脈粥樣硬化形成的病理性中內(nèi)膜增生抑制作用與對照組比較均有顯著差異(P0.001)。(3)藁本內(nèi)酯在藥物濃度10,20,40 mg/kg降低自發(fā)性高血壓大鼠收縮壓和舒張壓的作用與對照組比較均有顯著差異(P0.001)。(4)藁本內(nèi)酯在藥物濃度為40 mg/kg降低自發(fā)性高血壓大鼠血膽固醇、甘油三酯的作用與對照組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01)。但對低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、血鈣離子表達水平未見明顯差異的影響(P0.05)。(5)通過在光學(xué)顯微鏡下對細胞的形態(tài)學(xué)觀察及細胞免疫熒光檢測得知培養(yǎng)的細胞是所需要的平滑肌細胞。(6)藁本內(nèi)酯能在藥物濃度10,20,40 mg/kg對自發(fā)性高血壓大鼠胸主動脈血管平滑肌細胞的遷移抑制作用與對照組比較均有顯著差異(P0.001)。(7)藁本內(nèi)酯在藥物濃度10,20,40 mg/kg能使自發(fā)性高血壓大鼠體內(nèi)的血管平滑肌細胞的α-SMA表達量上調(diào),下降c-Myc蛋白表達量,與對照組比較均有顯著差異(P0.05)。結(jié)論:藁本內(nèi)酯能有效抑制自發(fā)性高血壓大鼠動脈粥樣硬化形成的病理性中內(nèi)膜增生,我們還發(fā)現(xiàn)藁本內(nèi)酯顯著地抑制大鼠胸主動脈血管平滑肌細胞的遷移能力。我們實驗還發(fā)現(xiàn)藁本內(nèi)酯降低自發(fā)性高血壓大鼠的收縮壓和舒張壓,對降低血清中的總膽固醇、甘油三酯水平也發(fā)揮作用。
【學(xué)位單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R544.1
【部分圖文】：

圖 1-1 藁本內(nèi)酯結(jié)構(gòu)式分子式：C12H14O2Fig. 1-1 Structure of ligustilideMolecular formula: C12H14O2藥理作用表明，LIG 化學(xué)成分具有舒張血管、抗炎、41]。王力宏等[42]通過實驗研究顯示了藁本內(nèi)的表達從而抑制腫瘤新生血管的生成，從而性腦白質(zhì)損傷的研究中發(fā)現(xiàn)，Kuang X 等[43]的神經(jīng)炎性具有顯著的抑制作用，對腦白質(zhì)APK/NF-kB 與 MAPK/STAT3 信號通路有關(guān)。過抑制有絲分裂原激活蛋白激酶和核因子 k影響。藁本內(nèi)酯具有鎮(zhèn)痛作用，并且研究發(fā)

實驗數(shù)據(jù)采用 SPSS 23.0 統(tǒng)計軟件分析，實驗數(shù)據(jù)先進行正態(tài)性檢驗和方差齊性檢驗，在方差齊時用單因素方差分析，組間兩兩比較采用 LSD(L)法；方差不齊時用非參數(shù)檢驗，當(dāng) P< 0.05 時，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。2.3 實驗結(jié)果2.3.1 自發(fā)性高血壓大鼠血管中內(nèi)膜動脈粥樣硬化的形成（1）低倍鏡下可觀察到自發(fā)性高血壓大鼠胸主動脈中內(nèi)膜有明顯的粥樣硬化斑塊形成，并且有不同程度的中內(nèi)膜增厚。（見圖 2-1 a）（2）高倍鏡下可見自發(fā)性高血壓大鼠胸主動脈中內(nèi)膜的內(nèi)皮細胞脫落，血管中層的血管平滑肌細胞排列紊亂，并大量增殖和遷移至中內(nèi)膜下形成病理性中內(nèi)膜增生。（見圖 2-2 b）

廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文2.3.2 4 組自發(fā)性高血壓大鼠中內(nèi)膜增生情況通過對 4 組自發(fā)性高血壓大鼠胸主動脈的病理切片的觀察，我們還通過用Imagej 軟件對 4 組大鼠的胸主動脈的中內(nèi)膜進行了測量，并且進行了統(tǒng)計分析。結(jié)果顯示對照組自發(fā)性高血壓大鼠的胸主動脈中內(nèi)膜有明顯的粥樣硬化的形成并伴有明顯的病理性中內(nèi)膜增生，測量的中內(nèi)膜的厚度為 171.51 ± 11.932 μm。然而，實驗組（10，20，40 mg/kg）對比對照組自發(fā)性高血壓大鼠的胸主動脈中內(nèi)膜的粥樣硬化斑塊有明顯改善，病理性中內(nèi)膜增生明顯受到了抑制，測量統(tǒng)計的中內(nèi)膜的厚度分別為 127.90 ± 5.288 μm、110.24 ± 5.076 μm、93.68 ± 4.111 μm。抑制效果與藥物干預(yù)的濃度呈正比關(guān)系，其中實驗組 40 mg/kg 抑制中內(nèi)膜增生的作用最明顯。
【參考文獻】

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本文編號：2858199