目的:環(huán)磷酸鳥苷(cyclic guanosinemonophosphate,cGMP)是一種調(diào)節(jié)心臟功能的胞內(nèi)第二信使,通過(guò)細(xì)胞膜上的cGMP門控離子通道、cGMP依賴性的磷酸二酯酶(phosphodiesterase,PDE)、蛋白激酶G(cGMP-dependentproteinkinaseG,PKG)和環(huán)磷酸腺苷(cyclicadenosine monophosphate,cAMP)的交叉調(diào)節(jié),進(jìn)一步參與離子電流的調(diào)控和心肌收縮。磷酸二酯酶3(phosphodiesterase-3,PDE3)的活性接受細(xì)胞中cGMP的濃度的控制,而心房肽與其受體結(jié)合引起cGMP產(chǎn)生增多,那么有可能改變細(xì)胞中cAMP的濃度,從而調(diào)節(jié)心房的機(jī)械性活動(dòng)。本研究,以快速心房起搏家兔為研究對(duì)象,主要以cGMP-PDE3-cAMP信號(hào)途徑為切入點(diǎn),探討PDE3介導(dǎo)的cGMP和cAMP交叉作用,從而進(jìn)一步闡明房顫時(shí)cGMP-PDE3-cAMP信號(hào)通路在心房動(dòng)力改變中的機(jī)制提供新的靶點(diǎn)。方法:1.動(dòng)物模型制備。選用不分雄雌,體重為2.0至2.5kg的新西蘭大耳白兔,分為P0對(duì)照組,只插管不給予刺激,P8實(shí)驗(yàn)組,刺激時(shí)間為8小時(shí),每組各8只。采用RM6240生理機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng),經(jīng)右頸外靜脈插管電刺激兔心房,同時(shí)記錄體表肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖。2.形態(tài)學(xué)觀察。電刺激結(jié)束后,摘取動(dòng)物右心房,常規(guī)固定、包埋、制作切片,利用光鏡及透射電鏡觀察心房肌結(jié)構(gòu)變化,觀察并證實(shí)快速起搏對(duì)心房肌肌漿網(wǎng)、線粒體等超微結(jié)構(gòu)的影響。3.心房鈉尿肽(Atrialnatriureticpeptide,ANP)濃度測(cè)定。刺激結(jié)束之后,收集血液,進(jìn)行離心,之后取上清液。利用放射免疫分析技術(shù)檢測(cè)血清中ANP 水平,進(jìn)一步觀察快速起搏對(duì)心房分泌ANP的影響。4.ELISA法檢測(cè)cGMP和cAMP的含量。觀察快速起搏心房時(shí)心房肌組織中cGMP和cAMP含量。5.Western blot法檢測(cè)心房組織中PDE3A的表達(dá),采用外標(biāo)法測(cè)定PDE3活性的變化。結(jié)果:1.利用右側(cè)頸外靜脈插管,建立快速心房起搏家兔模型,容易模擬心房顫動(dòng)的發(fā)生。2.通過(guò)光鏡和透射電鏡觀察到,蘇木素-伊紅染色可見心房肌纖維有分支,并連接成網(wǎng)狀,呈長(zhǎng)帶狀,呈明暗交替的橫紋,居于中心的肌纖維,其核為卵圓形。與對(duì)照組相比較,起搏8小時(shí)組心肌有明顯改變。透射電鏡觀察對(duì)照組和刺激8小時(shí)組的超微結(jié)構(gòu),可以看到刺激8小時(shí)組的線粒體變形、腫脹、山脊排列不規(guī)則、消失,肌漿網(wǎng)擴(kuò)張,大量空泡形成,肌絲溶解,可見糖原顆粒聚集明顯,核膜已斷裂、凹陷。3.放射免疫分析技術(shù)測(cè)定P0、P8家兔血中ANP濃度,結(jié)果P0組為1.6760±0.113μg/L,P8組為2.142±0.156μg/L,與P0組相比,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。4.ELISA法檢測(cè)結(jié)果表明:cGMP、cAMP的含量會(huì)隨著刺激時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸下降,刺激8小時(shí)組的心房組織cGMP、cAMP水平低于對(duì)照組,其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。5.快速心房起搏房顫模型對(duì)PDE3表達(dá)及活性的影響,結(jié)果可觀察到,起搏 8h后心房組織PDE3A表達(dá)較對(duì)照組未見明顯改變。與對(duì)照組比較,快速起搏后增加心房?jī)?nèi)壓后PDE3活性較對(duì)照組明顯降低。結(jié)論:1.快速心房起搏誘導(dǎo)了心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)的改變;2.PDE3活性的下降干擾了 cGMP-PDE3-cAMP信號(hào)通路環(huán)節(jié),可能成為防治房顫致心房重構(gòu)的藥理學(xué)靶點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R541.7
【部分圖文】：

４．１快速心房起搏家兔模型制備??家兔快速心房起搏模型制備成功，起搏過(guò)程當(dāng)中安靜，能夠順利記錄心電圖。??（圖１）??Ａ圖??ＨＩＳＥ３??Ｂ圖??ｌＬＬ，?＾?二拉卜，一、—ｉ—．?一；?ｉ」’??冬４—４４４４４｝＋４４４＾＋４４４４４４４＾４丄＾卜心率：２購(gòu)分??０．５ｍｖ??２００ｍｓ??Ｓｈａｍ??５￣￣￣￣ｔ￣￣ｊ￣￣￣￣ｒ￣￣ＩｊＩＪ５￣￣ｊ￣ｔ￣￣｜￣ｔ￣ｌ￣￣ｆ￣￣ｒ￣￣｜￣ｒ￣￣ｉ?？—￣￣Ｊ￣￣￣￣￣￣Ｉ￣￣５￣＾［??Ｉ；．：?ｊ；｜?ｉ＂?ｉ?＇■；，?ｉ?ｊ?Ｉ?ｉ?Ｉ?１?１?ｊ．；ｉ?１??Ｖ?＾?＾＾＾＾＾＾?ｌ）?＾＼３＾?＾＾?＾?Ｖ?Ｍ?＾ｌ?＾Ｍ；－＇?１?＾＾?＾?心率：６００次／分??？?＇?＇?：｜?ｒ?Ｉ?；ｉ??＇?？?．ｊ?．?ｉ?；?ｉ?ｉ?４?１?ｉ?：：????ｉ．．．：．Ｌ．．！：?．．Ｊ??－－Ｌ?Ｊｊ?ｔ．?．?ＬＨｉｌＵ－ｉｌ－－－－??ＶＬ??ｌｌｋｉ？ｌｆｅｋ＾ｉ＾Ｓｌｉｉ）ｉｉｉ?ｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉ?ｉｉｉｉｉｉ?ｉｔｉｉｉｉｉｉｉ?ｔｉｉｉｉｔ?１１??ＲＡＰ??圖１快速心房起搏家兔模型的建立??Ａ圖：刺激電極和解剖學(xué)鑒定Ｂ圖：體外肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖??１７??

小時(shí)組的超微結(jié)構(gòu)，可以看到刺激８小時(shí)組的線粒體變形、腫脹、山脊排列不規(guī)??貝ＩＪ、消失，肌漿網(wǎng)擴(kuò)張、量空泡形成、肌原纖維溶解，可見糖原顆粒堆積明顯，??核膜破裂破碎。（圖３、圖４）??＊?．??？?：??■■■■?？■■■??１８??

臨床研究顯示，房顫患者血中ＡＮＰ水平增高，為了證明這一改變，我們采??用放射免疫分析技術(shù)測(cè)定ＰＯ、Ｐ８家兔血中ＡＮＰ濃度，結(jié)果ＰＯ組１．６７６０±０．１１３?ｐｇ／Ｌ，??Ｐ８組為２．１４２±０．１５６ｎｇ／Ｌ，與Ｐ０組對(duì)比，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖５，Ｐ＜０．０１）。??３．０?－Ｉ??２．５?－??廣?，?Ｍ??Ｉ?－??Ｉ?１．０．?＿囊??０．０?＾???Ｐ０?Ｐ８??圖５快速心房起搏對(duì)家兔血中ＡＮＰ濃度的影響（ｎ＝８）??注：＊與對(duì)照組相比，Ｐ＜０．０５??１９??
【參考文獻(xiàn)】

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1 王程瑜;郝志宏;李香丹;許東元;;機(jī)械牽張對(duì)離體跳動(dòng)兔心房磷酸二酯酶3表達(dá)及其活性的影響[J];延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)學(xué)報(bào);2015年04期

2 杜以梅;張家明;李景東;;心房顫動(dòng)病理生理機(jī)制的最新認(rèn)識(shí)[J];臨床心血管病雜志;2015年03期

3 陳昌亮;黃爽;;磷酸二酯酶及其抑制劑的研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2014年02期

4 侯顯濤;陳武;張濤;朱麗娜;姜代勛;陳益山;李佳;穆祥;;大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞磷酸二酯酶mRNA表達(dá)與活性檢測(cè)[J];解剖學(xué)報(bào);2009年04期

5 劉玉學(xué);王欣;;心房顫動(dòng)中心房重構(gòu)機(jī)制的研究進(jìn)展[J];中國(guó)胸心血管外科臨床雜志;2009年03期

6 張莉;杜冠華;;磷酸二酯酶7:一個(gè)新的抗炎免疫藥物靶點(diǎn)研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2009年01期

7 馬瑞彥;楊宗英;鐘前進(jìn);陳林;王學(xué)鋒;肖穎彬;;快速心房起搏對(duì)家兔L型鈣通道和鉀通道Kv4.3 mRNA與蛋白表達(dá)的影響[J];中華心血管病雜志;2007年12期

8 陳艷;李子剛;湯慧芳;陳季強(qiáng);;咯利普蘭對(duì)大鼠哮喘模型肺組織磷酸二酯酶及IL-4的影響[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2006年04期

本文編號(hào)：2843603