目的:探討血.清miR-192-5p表達(dá)水平與冠心病患病的關(guān)系以及分析miR-192-5p在TNF-α和缺氧誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷中的表達(dá)變化,為進(jìn)一步明確miR-192-5p在冠心病血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷中的發(fā)病機(jī)制提供人群研究證據(jù)和研究方向。方法:1.連續(xù)收集2017年7月至2017年12月在延邊大學(xué)附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科住院并經(jīng)冠脈造影術(shù)確認(rèn)的冠心病患者41例,其中男性為24例,女性為17例,平均年齡(62.98 ±7.32)歲。隨機(jī)選取同期年齡和性別相匹配的健康體檢人群,經(jīng)詢問病史、常規(guī)體檢無證據(jù)提示患有冠心病的健康體檢者40例,其中男性22例,女性為18例,平均年齡(61.85±6.66)歲。清晨空腹采集靜脈血4ml,室溫1h內(nèi)迅速分離血清并置于凍存管中-80℃保存,應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析血清miR-192-5p表達(dá)水平,并對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序驗(yàn)證。記錄所有研究對(duì)象資料包括冠心病危險(xiǎn)因素、臨床實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果等病史資料。分析血清miR-192-5p表達(dá)水平與冠心病患病的關(guān)系。2.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)選擇ATCC提供的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株(HUVEC)。選用3-7代,鋪板密度約25%的HUVEC接種到細(xì)胞培養(yǎng)皿中培養(yǎng)。在細(xì)胞密度增至70-80%時(shí),更換為ECM基礎(chǔ)培養(yǎng)基饑餓培養(yǎng)12h,分別轉(zhuǎn)入含20ng/mL TNF-α的培養(yǎng)基和缺氧箱中培養(yǎng)12、24、36和48h。用PBS清洗收集內(nèi)皮細(xì)胞,提取分離細(xì)胞RNA,應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析內(nèi)皮細(xì)胞中miR-192-5p的表達(dá)變化。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)通過構(gòu)建TNF-α和缺氧誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型,模擬人體內(nèi)皮損傷的部分情況。3.應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料采用百分比表示,樣本百分率間比較用X2檢驗(yàn)。計(jì)量資料進(jìn)行正態(tài)分布以及方差齊性檢驗(yàn),正態(tài)分布的資料用x±s表示,組間均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn);非正態(tài)分布采用中位數(shù)(P25,P75)表示,組間比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析。logistic回歸分析miR-192-5p對(duì)冠心病患病影響。ROC曲線評(píng)價(jià)miR-192-5p的診斷性能,ROC曲線下面積(AUC)作為診斷指標(biāo)。以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,所用P值均為雙側(cè)檢驗(yàn)。結(jié)果:1.臨床血清學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,冠心病組的血清miR-192-5p表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組(P0.001)。2.Spearman相關(guān)性分析顯示冠心病組的血清miR-192-5p的表達(dá)水平與IL-6呈明顯負(fù)相關(guān)(r-0.330,P=0.035)。3.Logistic回歸分析顯示在校正混雜因素影響后,血清miR-192-5p表達(dá)減低(OR=0.084,95%CI 0.013-0.534,P=0.009)與冠心病患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。4.ROC 曲線顯示 miR-192-5p 曲線下面積 AUC 為 0.913(95%CI,0.846-0.979;P0.001);在ROC曲線靈敏度特異度最大處,miR-192-5p相對(duì)表達(dá)水平的cut-off值為-1.73,此時(shí)的靈敏度為80.5%,特異度為97.5%。5.TNF-α誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型中,miR-192-5p受TNF-α調(diào)節(jié)呈現(xiàn)低表達(dá),尤其在共培養(yǎng)24h時(shí),miR-192-5p表達(dá)呈明顯下調(diào)(P=0.037),其余時(shí)間點(diǎn)miR-192-5p表達(dá)水平無明顯差異(P0.05)。6.缺氧誘導(dǎo)的內(nèi)皮損傷模型中,miR-192-5p表達(dá)水平在缺氧處理的各個(gè)時(shí)間點(diǎn)無明顯差異(P0.05)。結(jié)論:1.冠心病患者血清miR-192-5p表達(dá)顯著降低,其降低水平與冠心病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān),miR-192-5p是診斷冠心病的潛在生物標(biāo)志物。2.miR-192-5p在TNF-α處理的內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)下調(diào),其下調(diào)水平受到TNF-α培養(yǎng)時(shí)間調(diào)節(jié),提示miR-192-5p對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷產(chǎn)生應(yīng)答反應(yīng)。3.miR-192-5p在缺氧處理的內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)無明顯差異,而且不受缺氧時(shí)間調(diào)節(jié),提示內(nèi)皮細(xì)胞中miR-192-5p表達(dá)不受缺氧調(diào)節(jié)。4.冠心病患者血清miR-192-5p與IL-6呈明顯負(fù)相關(guān)性:受TNF-α調(diào)節(jié)的內(nèi)皮細(xì)胞miR-192-5p與IL-6表達(dá)趨勢(shì)相反,提示miR-192-5p可能參與內(nèi)皮炎癥反應(yīng),是治療冠心病的潛在新靶點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R541.4
【部分圖文】：

士學(xué)位論文?冠心病組與對(duì)照組血清ｍｉＲ－１９２－５ｐ表達(dá)水平比較??血清ｍｉＲＮＡ相對(duì)表達(dá)水平進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換，ｍｉＲ－１９２－５ｐ表２?ｍｉＲＮＡ表示。結(jié)果顯示，血清ｍｉＲ－１９２－５ｐ在冠心病組表于健康對(duì)照組［－３．９１５（－５．９５９，－２．１６２），０．０６８（－０．８０４，０．４１０）；尸＜）。??＜

延邊大學(xué)碩士學(xué)位論文?實(shí)驗(yàn)結(jié)果??ＦＢＧ（ｍｍｏｌ／Ｌ）?０．０７７?０．６３４?－０．１６８?０．３００?－０．１４１?０．２１０??ＩＬ－６（ｎｇ／ｍＬ）?－０．３３０?０．０３５?－０．０２３?０．６８７?－０．４１１?＜０．００１??ＣＲＰ（ｍｇ／Ｌ）?０．０９８?０．５４２?－０．２１４?０．１８６?－０．３０９?０．００５??ＨＣＹ?（ｕｍｏｌ／Ｌ）?０．０７５?０．６４１?０．２９７?０．０６２?０．１?１１?０．３２２??ＣＲＥ（ｕｍｏｌ／Ｌ）?０．０３７?０．８１７?－０．１３１?０．４２２?０．０３５?０．７５４??ＵＡ（ｕｍｏｌ／Ｌ）?－０．１５４?０．３３５?－０．０９９?０．５４５?－０．１８４?０．０９９??．?５１?ｒＭＵ３０?５］?ｒ＝－０．４Ｉｌ??＝

結(jié)果顯示ｍｉＲ－１９２－５ｐ的ＲＯＣ曲線下面積為０．９１３?（９５％ＣＩ??［０．８４６－０．９７９］；尸＜０．００１?），血清?ｍｉＲ－１９２－５ｐ?表達(dá)水平的?ｃｕｔ－ｏｆｆ?值為－１．７３，??此時(shí)的靈敏度為８０．５％，特異度為９７．５％，見表４和圖５。???表４?ｍｉＲ－１９２－５ｐ表達(dá)對(duì)冠心病的診斷性能???參數(shù)?ＡＵＣ（９５％ＣＩ）?Ｃｕｔ－ｏｆｆ值靈敏性（％）特異性（％）?Ｐ??ｍｉＲ－１９２－５ｐ?０．９１３（０．８４６－０．９７９）?－１．７３?８０．５?９７．５?＜０．００１??ＣＲＰ?０．７１０（０．５９４－０．８２６）?１．４１?４８．８?９２．５?０．００１??ＩＬ－６?０．６８２（０．５６４－０．８００）?１２．６９?４＾８?８７．５?０．００５??１９??
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 廖江銓;劉詠梅;王階;;miRNA在冠心病診斷和治療中的研究進(jìn)展[J];中國科學(xué):生命科學(xué);2015年08期

2 蔣珽;項(xiàng)陽;;MicroRNA在冠心病中的作用研究[J];東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2012年05期

本文編號(hào)：2843729