研究的背景：在動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展的過程中,急性心血管綜合征是其常見的急性心血管意外事件。心肌梗死,是不穩(wěn)定動脈粥樣硬化斑塊表面侵蝕破裂引致。循環(huán)單細(xì)胞數(shù)在冠脈內(nèi)的易損斑塊能夠選擇性的增加并被誘導(dǎo)其表型改變,促使其遷移到動脈粥樣硬化斑塊,并使其病灶破裂。在動脈粥樣硬化中單核細(xì)胞分化成巨噬細(xì)胞,樹突狀細(xì)胞以及T細(xì)胞遷移到內(nèi)皮下的區(qū)域來應(yīng)答炎癥反應(yīng)。因此炎癥反應(yīng)在動脈粥樣硬化中以及冠脈斑塊易損中起著至關(guān)重要的作用。研究表明動脈粥樣硬化與巨噬細(xì)胞的分化、斑塊的穩(wěn)定性、血栓的形成密切相關(guān),同時也有研究表明,冠狀動脈粥樣硬化始發(fā)于血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙和炎癥反應(yīng),其中包括許多炎癥因子如：IL-1β、IL-6、IL=18及TNF-α;基質(zhì)金屬蛋白質(zhì)MMP-9；趨化因子：MCP-1、IL-8;細(xì)胞粘附分子：ICAM-1、VCAM-1;E-選擇素；P-選擇素。目前對于生物學(xué)標(biāo)志物的檢測多數(shù)采用的是外周靜脈或股動脈鞘采血進(jìn)行評價炎癥因子與ACS的相關(guān)性。由于外周血的干擾因素較多,而使各種因子水平的高低并不能準(zhǔn)確的反應(yīng)局部冠脈病變程度及斑塊易損的程度。研究目的：為了找出高靈敏高特異性的預(yù)測斑塊破裂和急性心血管事件的標(biāo)志物,我們采用了在冠狀動脈造影的同時采集冠脈血或PCI時采用DjverCE血栓抽吸導(dǎo)管采血檢測各類生物標(biāo)記物的表達(dá)水平,并評估何種因子可以作為評價動脈粥樣硬化疾病和易損斑塊的特異性標(biāo)志物。研究方法：1.冠狀動脈粥樣硬化性心臟病患者冠脈局部采血檢測NF-κB;hs-CRP和Lp-PLA2水平1.1選取疑似為冠心病的患者而入院行擇期CAG術(shù)的患者105人。所有患者在進(jìn)行CAG時采集冠脈血或PCI時DiverCE血栓抽吸導(dǎo)管采血。ELISA方法分別檢測冠脈局部血中NF-κB, hs-CRP和Lp-PLA2濃度水平。1.2比較CAD亞分組UAP和SAP以及健康對照組冠脈局部采血中NF-κB和hs-CRP和Lp-PLA2水平。1.3 Pearson相關(guān)性分析在UAP和SAP分組中NFκB (p65)、hs-CRP、Lp-PLA2的相關(guān)性。1.4用ROC曲線分析NF-κB、hs-CRP診斷UAP的效能。2. NF-κB對能夠作為評價冠脈易損的生物學(xué)指標(biāo)的調(diào)控作用采用不同的NF-κB濃度梯度(空白,50ng/l,100ng/l,500ng/l,1000ng/l)刺激THP-1巨噬細(xì)胞,12小時和24小時取細(xì)胞上清。在另一實驗中,PTDC(終濃度10umol/1)預(yù)處理THP-1巨噬細(xì)胞30分鐘,然后再加入終濃度為500ng/l的NF-κB刺激24小時,取細(xì)胞上清。采取各組細(xì)胞上清液分別以ELISA法檢測其中IL-1β; IL-6;IL-18; TNF-α; MMP-9的濃度。分別以不同的NF-κB濃度(空白,50ng/l,100ng/l, 500ng/l和1000ng/l)刺激HUEVCs 12小時和24小時,ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中MCP-1和IL-8濃度。ELISA法檢測內(nèi)皮細(xì)胞表面ICAM-1; VCAM-1; E-selectin和P-selectin的表達(dá)。在Transwell實驗中,上室中加入密度為2×105個/ml的THP-1單核細(xì)胞,在下室中加入不同濃度梯度的NF-κB(空白,50ng/l,100ng/l,500ng/l和1000ng/l),放入37℃5%C02的細(xì)胞培養(yǎng)箱,孵育30分鐘,取出并棄掉上室培養(yǎng)基,采用4%多聚甲醛固定,蘇木素染色,光學(xué)顯微鏡下隨機(jī)選取5個高倍鏡視野計數(shù)。另外,在單獨的實驗中,個別實驗組在下室中預(yù)先加入NF-κB中和抗體(終濃度20ug/ml),然后再加入終濃度為500ng/l的NF-κB,細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)37℃,5%C02孵育30分鐘,按照上述步驟染色計數(shù)。研究結(jié)果：1.CAD患者組的NFκB (p65); Lp-PLA2; hs-CRP的水平顯著高于正常對照組,對照組和CAD患者組NFKB(p65)的水平分別為89.92±9.67ng/ml vs 477.77 ±108.63ng/ml, P0.001。正常對照組與CAD患者組中的Lp-PLA2的水平分別為12.31±5.17IU/mLvs18.00±6.22IU/mL, P0.05。hs-CRP的水平在CAD患者和對照組的血清中的水平分別為4.90±0.97mg/l vs 1.84±0.35mg/l, P0.0035。2.亞組分析中,UAP組和SAP組與健康對照組相比較,NFκB(p65); Lp-PLA2; hs-CRP的濃度水平均有顯著升高,尤其以UAP組最為顯著。SAP組的NFκB(p65)水平為345.2±96.30 ng/1, UAP組的NFκB (p65)水平為565.0±128.1ng/l,健康對照組的水平為98.9±44.9 ng/l(P0.001)。SAP組的Lp-PLA2水平15.23±7.38 IU/ml, UAP組的Lp-PLA2水平為19.87±8.12IU/ml,健康對照組的水平為12.89±6.15 IU/ml (P0.001)。UAP組的hs-CRP的水平為6.62 ±13.24mg/l; SAP組的hs-CRP的水平為2.43±3.31mg/l；對照組的的水平為1.85±1.68mg/l (P0.001).3.在UAP患者中NFκB (p65)與hs-CRP的水平有顯著的正相關(guān)(r=0.473,P=0.001)。但在SAP患者中,NFκB (p65)與hs-CRP的水平的相關(guān)性卻無統(tǒng)計學(xué)意義(r=0.287,P=0.185)。在UAP和SAP患者中Lp-PLA2的水平與NFκB(p65)和hs-CRP的水平均不相關(guān)。這一研究結(jié)果表明在采用DiverCE血栓抽吸導(dǎo)管采血測定生物標(biāo)記物的方法中,NFκB (p65)與hs-CRP可能成為評價和診斷UAP的生物學(xué)指標(biāo)。4.在本研究的冠心病患者中,DiverCE血栓抽吸導(dǎo)管采血的血清中NFκB (p65)水平在診斷UAP方面比hs-CRP準(zhǔn)確性高。NFκB (p65)的ROC分析曲線下面積為0.93 (95% CI:0.89-0.97, P0.001); hs-CRP的ROC分析曲線下面積為0.80(95% CI：0.69-0.89,P0.001)。由此我們可以得出在診斷UAP方面NFκB (p65)比hs-CRP更具精確度。繼續(xù)計算NFκB (p65) AUC-hs-CRP AUC=0.145,P=0.002)我們得出,本研究中NFκB (p65)濃度在427.6 ng/l可以作為診斷UAP的參考值(cutoff-value),此時血清NFκB (P65)診斷UAP的靈敏性和特異性分別為85.5%和82.8%。5.在THP-1巨噬細(xì)胞中,隨著NFκB (p65)刺激濃度的逐漸升高,細(xì)胞上清中1L-1β; IL-6; IL-18; TNF-α; MMP-9的濃度水平相應(yīng)增高,在刺激24小時這種效應(yīng)最顯著。NFκB (p65)抑制劑PTDC(10umol/l)可以顯著抑制甚至完全消除NFκB (p65) (500ng/l)誘導(dǎo)的THP-1巨噬細(xì)胞上清中IL-1β; IL-6; IL-18; TNF-α; MMP-9的分泌(P0.05)。6.在THP-1巨噬細(xì)胞中,隨著NFκB(p65)刺激濃度的逐漸升高,THP-1巨噬細(xì)胞上清中分泌的MCP-1和IL-8隨之增加。NFκB (p65)能夠濃度依賴性的誘導(dǎo)HUEVCs表面ICAM-1的表達(dá)。NFκB (p65)對于VCAM-1的調(diào)控也具有類似的趨勢,應(yīng)用不同濃度的NFκB (p65)刺激HUEVCs,細(xì)胞蛋白中E-selectin的濃度水平隨著NFκB (p65)濃度的升高而升高。同樣的,]HUEVCs中P-selectin的分泌也具有NFκB (p65)濃度的依賴性。7. Transwel實驗的結(jié)果表明,不同濃度的(從50ng/Γ-1000ng/l) NFκB (p65)核轉(zhuǎn)錄因子對THP-1單核細(xì)胞化學(xué)趨化活性均顯著(P0.05)。NFκB (p65)中和抗體(終濃度20ug/ml)加入Transwell下室中則能夠完全阻斷NFκB (p65)(500ng/l)誘導(dǎo)的THP-1細(xì)胞趨化(P0.05)。結(jié)論：1. DiverCE血栓抽吸導(dǎo)管采取的血液中NFκB (p65)、hs-CRP和Lp-LPA2在動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)局部上調(diào),并在UAP和SAP患者中均表達(dá)上調(diào),UAP組高于SAP組。2. NFκB(P65)在THP-1巨噬細(xì)胞中可以調(diào)控炎癥因子IL-1β;IL-6;IL-18;TNF-α;的表達(dá)。3. NFκB(P65)在HUVECs中可以誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞化學(xué)趨化因子(IL-8.MCP-1)和粘附分子(E-seletin、P-seletin、VCAM-1和ICAM-1)的分泌和表達(dá),加強單核細(xì)胞的化學(xué)趨化以及調(diào)控單核／巨噬細(xì)胞基質(zhì)蛋白酶MMP-9的分泌等機(jī)制,活化血管內(nèi)皮細(xì)胞和單核／巨噬細(xì)胞,增強炎癥反應(yīng)和細(xì)胞外基質(zhì)的降解,參與了動脈粥樣硬化和斑塊的去穩(wěn)定性過程。4. NFκB(p65)可以作為一個預(yù)測不穩(wěn)定型心絞痛患者短期預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)。5.NFκB (p65)可作為冠心病治療的一個新靶點。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R543.5
【部分圖文】：

圖１寇脈局部采血冠屯病患者與健康對照組血液中ＮＦｋＢ?（ｐ６５）?；?Ｌｐ－ＰＬＡ２和ｈｓ－Ｃ民Ｐ的水??平比較。??Ｆｉｇｕｒｅ?１?Ｓｅｒｕｍ?ｏｆ?ＤｉｖｅｒＣＥ?化ｋｅ?ｂｌｏｏｄ?ｔｈｒｏｍｂｕｓ?ａｓｐｉｒａｔｉｏｎ?ｃａ化ｅｔｅｒ?ｌｅｖｅｌｓ?ｏｆＮＦｉｃＢ?（ｐ６５）?（Ａ）；??Ｌｐ－ＰＬＡ＞２（Ｂ）?ａ打ｄ?ｈｓ－ＣＲＰ（Ｃ）?ｉ打?ｐａｔｉｅ打ｔｓ?ｗｉｔｈ?ＣＡＤ?ａ打ｄ?ｈｅａｌｔｈｙｃｏｎｔｒｏｌ?ｉ打?ｓｅｒｕｍ．??

ＮＦｋＢ?（ｐ６５）的濃度水平均有顯著升高，尤其Ｗ?ＵＡＰ姐最為顯著。ＳＡＰ組的ＮＦｋＢ??（ｐ６５?）水平為?３４５．２?±?９６．３０?ｎｇ／１，ＵＡＰ?組的?ＮＦｋＢ?（ｐ６５）水平為?５６５．０?±?１２８．ｌｎｇ／１，??健康對照組的水平為９８．９±?４４．９?ｎｇ／１，ＰＯ．ＯＯｌ）。結(jié)果如圖２所示。??３２??

清中ＬＰ－ＰＬＡ２水平均有顯著升高，尤其ＵＡＰ組最為顯著。ＳＡＰ組的ＬＰ－ＰＬＡ２??水平?１５．２３?＋?７．３８?ｌＵ／ｍｌ，ＵＡＰ?組的?Ｌｐ－ＰＬＡ］水平為?１９．８７±８．１２ＩＵ／ｍＩ，健康對照??組的水平為１２．８９?＋?６．１５?ＫＪ／ｍｌ（Ｐ＜０．００１）。結(jié)果如圖３所示。??３３??
【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2838894