目的:探討缺鐵性貧血時(shí),升高的EPO是否通過激活下游的信號(hào)分子AKT來調(diào)節(jié)GH-IGF-1軸,在影響機(jī)體體重和生長發(fā)育中發(fā)揮作用。方法:1.制備缺鐵性貧血大鼠模型:3周齡雌性Wistar大鼠36只分兩組,分別飼養(yǎng)低鐵飼料和含鐵飼料,稱量體重。2周后鑒定貧血模型:大鼠內(nèi)眥靜脈采血,全自動(dòng)血液分析儀檢測大鼠血紅蛋白(Hb)、紅細(xì)胞分布寬度(RDW)、平均紅細(xì)胞體積(MCV)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白量(MCH)和紅細(xì)胞比容(Hct)。2.重組人促紅細(xì)胞生成素(r Hu EPO)干預(yù):按5000IU/kg劑量r Hu EPO或等量生理鹽水,采用腹腔一次性注射方法,對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組大鼠進(jìn)行干預(yù)。3.大鼠肝臟HE染色。4.免疫組織化學(xué)方法檢測實(shí)驗(yàn)組大鼠r Hu EPO干預(yù)后肝臟IGF-1表達(dá)。5.ELISA試驗(yàn)檢測大鼠r Hu EPO干預(yù)后血清中GH、IGF-1含量。6.Westen blot檢測大鼠r Hu EPO干預(yù)后肝臟促紅細(xì)胞生成素受體(EPOR)、總蛋白激酶B(t-AKT)和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白水平。結(jié)果:1.成功制備缺鐵性貧血大鼠模型:與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組大鼠Hb、MCV、MCH、Hct均明顯下降(P0.01);RDW值升高(P0.01);實(shí)驗(yàn)組大鼠低鐵飼養(yǎng)2周后體重較對(duì)照組低(P0.05)。2.與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組大鼠肝臟HE染色發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞腫脹,胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)空泡,部分細(xì)胞核固縮,細(xì)胞凋亡。3.免疫組織化學(xué)檢測發(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)組大鼠r Hu EPO干預(yù)后,肝細(xì)胞胞漿中IGF-1陽性表達(dá)的細(xì)胞數(shù)目明顯下降。4.實(shí)驗(yàn)大鼠注射r Hu EPO后,血清GH水平下降(P0.05),IGF-1水平降低明顯(P0.01);對(duì)照組大鼠r Hu EPO干預(yù)后血清GH、IGF-1水平未見差異(P0.05)。5.Westen blot結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組大鼠肝臟EPOR蛋白表達(dá)量比對(duì)照組高(P0.01);實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組大鼠注射r Hu EPO后,EPOR均有升高趨勢,但未見明顯差異(P0.05);注射r Hu EPO后肝臟t-AKT蛋白水平?jīng)]有差異(P0.05),p-AKT蛋白水平增加(P0.05)。結(jié)論:1.鐵缺乏會(huì)導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷。2.缺鐵性貧血大鼠EPOR表達(dá)升高,注射EPO后短期內(nèi)未見EPOR表達(dá)改變。3.缺鐵性貧血個(gè)體GH、IGF-1下調(diào),體重下降,生長緩慢,EPO可能參與部分調(diào)控,活化的AKT信號(hào)可能是其重要分子機(jī)制。
【學(xué)位單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R556.3
【部分圖文】：

可見部分細(xì)胞核碎片和核固縮，核質(zhì)聚集，細(xì)胞凋亡�？赡苁侨辫F導(dǎo)致肝細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。圖1 大鼠肝臟HE染色(×400)Figure 1. HE staining of rats’liver(×400)注：A:實(shí)驗(yàn)-EPO組；B:實(shí)驗(yàn)-saline組；C:對(duì)照-EPO組；D:對(duì)照saline組

X 軸與 Y 軸的相關(guān)性較大，保證了由該曲線及其方程求出的樣本濃度具有較強(qiáng)可信性。圖3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪圖Figure 3. Standard curve plot注：a: GH標(biāo)準(zhǔn)曲線；b:IGF-1標(biāo)準(zhǔn)曲線

IGF-1 陽性表達(dá)細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組大鼠中，與 saline 干預(yù)相比，rHuEPO 干預(yù)后大鼠肝細(xì)胞胞漿中 IGF-1 陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)目明顯下降（圖 2）。圖2 實(shí)驗(yàn)組大鼠肝臟IGF-1免疫組織化學(xué)染色Figure 2. Immunohistochemical staining of rats’liver IGF-1 in the experience group(×400)注：EPO：實(shí)驗(yàn)-EPO組；NS：實(shí)驗(yàn)-saline組2.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測大鼠血清 GH、IGF-1 水平2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制檢測大鼠血清中 GH、IGF-1 濃度水平時(shí)，根據(jù)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，四參數(shù) Logistic 曲線擬合后，GH 標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖 3-a 示，回歸方程為 y = (3.46783 - 0.12193)/ [1 + (x/3077.39328)^ -0.88577] + 0.12193，r2=0.99901。IGF-1 標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖 3-b 示，回歸方程為 y = (1.30322 - 0.09816) / [1 + (x/570.06162)^ -1.59600] + 0.09816，r2=0.99262。X 軸與 Y 軸的相關(guān)性較大，保證了由該曲線及其方程求出的樣本濃度具有較強(qiáng)可信性。圖3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪圖Figure 3. Standard curve plot注：a: GH標(biāo)準(zhǔn)曲線；b:IGF-1標(biāo)準(zhǔn)曲線
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2838217