1研究背景及目的糖尿病心肌病(Diabetic Cardiomyopathy,DCM),是繼發(fā)于血糖升高的心肌纖維化改變,與高糖環(huán)境下大量致炎因子分泌入血、刺激心肌組織纖維增生及膠原沉積密切相關(guān)。IL11屬于IL6家族成員,在心肌纖維化過(guò)程中的決定性作用——IL11位于促心肌纖維化途徑的關(guān)鍵因子——轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(Transforming Growth Factor-β1,TGFβ1)的下游。而高糖環(huán)境可引起慢性低度炎癥反應(yīng),增加成纖維細(xì)胞中IL11的表達(dá),加速組織纖維化進(jìn)程。二甲雙胍(Metformin)因其降糖、抗炎、抗腫瘤、調(diào)節(jié)脂代謝等作用,被廣泛應(yīng)用于臨床。其基于TGFβ信號(hào)通路的抗纖維化作用,已被學(xué)術(shù)界公認(rèn),但具體機(jī)制及作用靶點(diǎn)尚未完全明確。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)TGFβ1、IL11及合成IL11所需上游因子,探究IL11是否為二甲雙胍抑制TGFβ1通路的作用靶點(diǎn),為二甲雙胍是否有可能治療心肌纖維化提供依據(jù)。2材料和方法2.1實(shí)驗(yàn)對(duì)象及取材4周齡SPF級(jí)SD雄性大鼠40只,體重(89.620±7.420)g,適應(yīng)性喂養(yǎng)7天,后隨機(jī)分為對(duì)照組(C組,n=10)、2型糖尿病組(D組,n=10)、2型糖尿病二甲雙胍治療組(D+Met組,n=10)、2型糖尿病胰島素治療組(D+Ins組,n=10)。2型糖尿病造模方法為:高脂高糖飲食喂養(yǎng)、第8周大鼠腹腔注射30mg/kg鏈脲佐菌素(Streptozocin,STZ)。D+Met組,給予二甲雙胍[200mg/(d·Kg)]灌胃;D+Ins組,給予長(zhǎng)效胰島素皮下注射。12周末(16周齡)處死大鼠,并取其心肌組織,冰凍保存。2.2觀察指標(biāo)葡萄糖氧化酶法測(cè)空腹血糖(FBG,單位mmol/L);Western blot檢測(cè)心肌組織中TGFβ1、IL11、IL11RA、JNK、α-SMA、ECM、Runx2、C-Jun的蛋白表達(dá);RT-PCR檢測(cè)大鼠心肌組織中IL11DNA、IL11mRNA的表達(dá);免疫共沉淀法檢測(cè)心肌組織中Runx2-C-Jun蛋白復(fù)合物;免疫熒光觀察心肌IL11沉積情況;光鏡觀察大鼠心肌纖維化程度。3結(jié)果3.1 FPG各組大鼠FPG水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=270.01,P0.05)。與C組比較,D組、D+Met組均升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(5.408±0.569)vs(15.540±1.373)vs(8.270±0.474),P0.05];與D組比較,D+Met組明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(15.540±1.373)vs(8.270±0.474),P0.05]。3.2心肌組織TGF-β1的表達(dá)各組大鼠心肌組織TGF-β1表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=13.169,P0.05)。與C組比較,D組、D+Met組的表達(dá)均增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(0.184±0.044)vs(0.523±0.132)vs(0.402±0.159),P0.05]。與D組比較,D+Met組表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.3大鼠心肌組織JNK、C-Jun、Runx2、Runx2-C-Jun的蛋白表達(dá)各組大鼠心肌組織JNK表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=27.890,P0.05)。與C組比較,D組的表達(dá)均增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(0.195±0.064)vs(0.462±0.086),P0.05]。與D組比較,D+Met組表達(dá)顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(0.462±0.086)vs(0.248±0.084),P0.05]。各組大鼠心肌組織C-Jun表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=27.372,P0.05)。與C組比較,D組、D+Met組表達(dá)均增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(0.181±0.053)vs(0.518±0.119)vs(0.404±0.088),P0.05]。與D組比較,D+Met組表達(dá)顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(0.518±0.119)vs(0.404±0.088),P0.05]。各組大鼠心肌組織Runx2表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=22.523,P0.05)。與C組比較,D組、D+Met組表達(dá)均增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(0.146±0.056)vs(0.450±0.086)vs(0.379±0.071),P0.05]。與D組比較,D+Met組表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。免疫共沉淀檢測(cè)法下可檢測(cè)到蛋白復(fù)合物Runx2-C-Jun。3.4二甲雙胍對(duì)心肌組織IL11DNA、IL11mRNA、IL11Pro、IL11RA表達(dá)的影響各組大鼠心肌組織IL11DNA表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=34.880,P0.05)。與C組比較,D組、D+Met組表達(dá)均增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(0.107±0.043)vs(0.478±0.133)vs(0.314±0.038),P0.05]。與D組比較,D+Met組表達(dá)顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(0.478±0.133)vs(0.314±0.038),P0.05]。各組大鼠心肌組織IL11mRNA表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1.528,P0.05)。各組大鼠心肌組織IL11Pro表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=55.513,P0.05)。與C組比較,D組、D+Met組表達(dá)均增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(0.117±0.026)vs(0.458±0.090)vs(0.233±0.047),P0.05]。與D組比較,D+Met組表達(dá)顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(0.458±0.090)vs(0.233±0.047),P0.05]。各組大鼠心肌組織IL11RA表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=34.167,P0.05)。與C組比較,D組、D+Met組表達(dá)均增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(0.123±0.040)vs(0.409±0.113)vs(0.205±0.036),P0.05]。與D組比較,D+Met組表達(dá)顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(0.409±0.113)vs(0.205±0.036),P0.05]。3.5二甲雙胍對(duì)心肌組織ECM、α-SMA的蛋白表達(dá)的影響各組大鼠心肌組織ECM表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=19.678,P0.05)。與C組比較,D組、D+Met組表達(dá)均增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(0.145±0.036)vs(0.460±0.174)vs(0.253±0.091),P0.05]。與D組比較,D+Met組表達(dá)顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(0.460±0.174)vs(0.253±0.091),P0.05]。各組大鼠心肌組織α-SMA表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=8.904,P0.05)。與C組比較,D組表達(dá)增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(0.220±0.101)vs(0.413±0.098),P0.05]。與D組比較,D+Met組表達(dá)顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[(0.413±0.098)vs(0.295±0.092),P0.05]。3.6大鼠心肌組織HE染色與C組比較,D組大鼠心肌纖維化改變明顯;與D組比較,D+Met組大鼠心肌纖維化程度減輕。3.7大鼠心肌IL11免疫熒光與C組比較,D組心肌組織中可見(jiàn)大量IL11沉積;與D組比較,D+Met組心肌組織IL11沉積量顯著減少。4結(jié)論4.1 2型糖尿病大鼠心肌IL11表達(dá)可能上調(diào)4.2 IL11導(dǎo)致心肌纖維化的作用可能發(fā)生在蛋白質(zhì)水平上4.3高糖環(huán)境下,在心肌組織中,二甲雙胍可能通過(guò)抑制Runx2-C-Jun合成,減少IL11表達(dá)及IL11蛋白含量,延緩纖維化進(jìn)程。
【學(xué)位單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R587.2;R542.2
【部分圖文】：

與 D 組比較，D+Met 組、D+Ins 組差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意組比較，D+Ins 組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表 3.2,圖表 3.2 各組大鼠心肌組織 TGFβ1 蛋白相對(duì)表達(dá)量(X±S)69, P<0.05；與 C 組比較，*P<0.05組別 例數(shù)（n） TGFβC組 10 0.184±0D組 10 0.523±0.D+Met組 10 0.402±0.D+Ins 10 0.453±0.

與 C 組比較，*P<0.05；與 D 組比較，#P<0.05圖 3.2 各組大鼠心肌 JNK、C-Jun 的表達(dá)圖 3.3 Runx2 與 C-Jun 形成蛋白復(fù)合物甲雙胍對(duì)心肌組織 IL11DNA、IL11mRNA、IL11Pro、IL影響大鼠心肌組織 IL11DNA 表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=34.880, P<0.05）1DNA 比較，D 組、D+Met 組、D+Ins 組的表達(dá)均增加，差異有統(tǒng)計(jì)

22圖 3.3 Runx2 與 C-Jun 形成蛋白復(fù)合物雙胍對(duì)心肌組織 IL11DNA、IL11mRNA、IL11P鼠心肌組織 IL11DNA 表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=34.880A 比較，D 組、D+Met 組、D+Ins 組的表達(dá)均增加，差異
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