【摘要】：目的:本研究旨在比較血漿中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9、高敏C反應蛋白(hs-CRP)和白介素(IL)-1β在無腎臟異常的不同冠狀動脈疾病病人中的差異,以及評價這些標志物與患者冠狀動脈狹窄嚴重性的關(guān)系。方法:本研究納入符合納入標準的入選者共365例,均行冠狀動脈造影。包括124例ST段抬高型急性心肌梗死(STEMI)病人、117例穩(wěn)定性心絞痛(SAP)病人和124例冠狀動脈沒有明顯狹窄的病人。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測患者血NGAL、MMP-9、hs-CRP和IL-1β的量。并將STEMI和SAP患者歸為冠心病(CHD)組并根據(jù)SYNTAX積分分成:高積分亞組(SYNTAX積分≥33,n=29)和低積分亞組(SYNTAX積分33,n=212)比較組間差異。采用Spearman分析檢驗上述標志物間及其與冠狀動脈狹窄嚴重程度的關(guān)系,采用受試者工作特征曲線(ROC)檢測上述血漿標志物水平輔助識別嚴重冠狀動脈狹窄的能力,進一步采用logistic回歸評價影響SYNTAX積分的指標。結(jié)果:STEMI組患者血漿NGAL、MMP-9、hs-CRP濃度分別高于SAP組和對照組患者(P均0.05),SAP組患者血漿NGAL和hs-CRP濃度高于對照組(P均0.05)。血漿IL-1β水平在各組間無明顯差別(P均0.05)。CHD組患者冠脈SYNTAX積分與患者血漿NGAL(r=0.363,P=0.000)、MMP-9(r=0.377,P=0.000)、hs-CRP(r=0.163,P0.011)濃度均呈正相關(guān),但SYNTAX積分與患者血漿IL-1β濃度沒有相關(guān)性(r=-0.043,P=0.510)。CHD組患者血漿NGAL濃度與MMP-9(r=0.601,P=0.000)、IL-1β(r=0.159,P=0.014)濃度呈正相關(guān)。關(guān)于識別高SYNTAX積分的ROC曲線下面積(AUC)血漿NGAL(AUC=0.838,95%Cl:0.752-0.923,P=0.000)大于MMP-9(AUC=0.818,95%Cl:0.724-0.912,P=0.000)、IL-1β(AUC=0.485,95%Cl:0.369-0.601,P=0.791)和hs-CRP(AUC=0.607,95%Cl:0.492-0.722,P=0.061)。多因素logistic回歸顯示患者NGAL濃度與高SYNTAX積分獨立相關(guān)(OR=1.109,95%Cl:1.104-1.114;P=0.000)。結(jié)論:STEMI病人血漿NGAL、MMP-9、hs-CRP濃度顯著高于SAP組和對照組病人。CHD病人血漿NGAL量與MMP-9、IL-1β濃度及冠狀動脈狹窄嚴重性呈正相關(guān)。在識別嚴重冠狀動脈狹窄的CHD患者能力方面NGAL優(yōu)于MMP-9、IL-1β和hs-CRP。且血漿NGAL是CHD患者高SYNTAX評分的獨立影響因素。NGAL有助于篩選高危的CHD病人。
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R541.4
【圖文】：

圖 2-1 NGAL 標注品的配置示意圖（4）洗滌工作液的配制：先根據(jù)實驗所需計算出洗滌工作液應該配制的量，用量筒往大燒杯內(nèi)加入 480ml（分兩次）去離子水，再用移液槍向燒杯內(nèi)量取20ml 洗滌工作液混勻，配成按 1:25 倍稀釋的工作液備用。要注意的是剛?cè)〕龅臐庀礈煲涸诘蜏乇４婧髸宣}析出，所以在配制工作液的時候要確保其已經(jīng)達到室溫，如果還是存在結(jié)晶可以在水浴中加溫幫助其溶解。（5）生物素標記抗體工作液的制備：先將制備所需的體系在小離心機上短時間離心，根據(jù)實驗所需往一潔凈試管內(nèi)分別滴進 10ul 生物素標記抗體和990ul 生物素標記抗體稀釋液并充分混合，制備成所需的 1:100 的工作液備用。在使用前 10 分鐘內(nèi)配好。（6）辣根過氧化物酶標記親和素工作液的制備：先將制備所需的體系在小離心機上短時間離心，根據(jù)實驗所需用移液器往一潔凈試管內(nèi)分別加 10ul HRP和 990ul HRP 稀釋液并充分混勻，制備成所需的 1:100 的工作液備用。在使用前10 分鐘內(nèi)配好。

蘭州大學碩士研究生學位論文 血漿 NGAL 水平與冠心病及其病變嚴重程度的相關(guān)性研究吸取 15ul 上述的混合液體加進 285ul 樣本稀釋液（1:20）中再次用移液器輕柔混合避免氣泡。混合成按 1:100 倍稀釋后的血樣備用。（3）標準品的配制：當實驗開始前將實驗體系由 4℃冰箱移出放在常溫30min，待溫度到達至室溫后從中拿一支標準品，先用 6000-10000rpm 離心 30s。向標準品中滴進 1ml 的樣本稀釋液，用實驗用槍輕柔混合避免氣泡，再用迷你離心機短時間離心確�；靹�，得到最高濃度的標準品 S7。提前準備 7 個 1.5ml離心管用記號筆分別標注 S0-S6 按順序在實驗臺上排開，在 S0-S6 中均加250ul 的樣本稀釋液，之后從 S7 中用移液器往 S6 中加進 250ul 液體并輕柔混合避免產(chǎn)生氣泡，再從 S6 中用移液槍往 S5 中加進 250ul 液體同樣用實驗用槍輕柔混合并避免氣泡，按上述方法順序完成 S4、S3、S2、S1 的加樣。S1 不往 S0中加樣，S0 做空白對照。（如下圖 2-2 所示）

光度（OD 值），通過得出的 OD 值在專業(yè)軟件中構(gòu)建出方程后得出 IL-1β 的含量。（2）樣本的稀釋：根據(jù)以往研究的經(jīng)驗和與試劑公司技術(shù)人員溝通，決定按照說明書上進行實驗樣本不稀釋，用原液。在實驗前一晚將血漿標本從-80℃冰箱移放入實驗室 4℃冰箱過夜，試驗當天把血標本從 4℃冰箱移出放在常溫30min，以平衡至室溫，待測，要注意所有血樣均不能反復凍融。（3）標準品的配制：當實驗開始前將實驗體系由 4℃冰箱移出放在常溫30min，待溫度到達至室溫后從中拿一支標準品，先用 6000-10000rpm 離心 30s。向標準品中滴進 1ml 的樣本稀釋液，用移液器輕柔混合并避免氣泡，再用小心機短時間離心確保混合，得到最高濃度的標準品 S7。提前準備 7 個 1.5ml 離心管用記號筆分別標注 S0-S6 按順序在實驗臺上排開，在 S0-S6 中均加 250ul 的樣本稀釋液，之后從 S7 中用移液器往 S6 中加進 250ul 液體并輕柔混合避免產(chǎn)生氣泡，再從 S6 中用移液槍往 S5 中加進 250ul 液體同樣用實驗用槍輕柔混合并避免氣泡，按上述方法順序完成 S4、S3、S2、S1 的加樣。S1 不往 S0 中加樣，S0 做空白對照。（如下圖 2-3 所示）

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