第一部分地西他濱誘導(dǎo)骨髓增生異常綜合征細(xì)胞發(fā)生鐵死亡及其機(jī)制目的骨髓增生異常綜合征(MDS)是常見的骨髓衰竭綜合征,多伴鐵過載;鐵死亡是調(diào)節(jié)性細(xì)胞死亡的形式之一,具有獨(dú)立的形態(tài)、生化及遺傳特性,可能參與MDS的發(fā)生和發(fā)展,有望成為治療的新靶點(diǎn)。地西他濱是治療MDS的經(jīng)典去甲基化藥物之一。本項(xiàng)研究擬探討其是否能誘導(dǎo)MDS細(xì)胞發(fā)生鐵死亡及其作用機(jī)制。方法1.細(xì)胞系SKM-1、MUTZ-1分別與地西他濱及鐵死亡抑制劑Fer-1共培養(yǎng),CCK-8法檢測藥物在不同時(shí)間、不同濃度下對細(xì)胞活力的影響,同時(shí)觀察Fer-1、necrostatin-1(程序性壞死特異性抑制劑)、z-vad-fmk(凋亡特異性抑制劑)及DFO(鐵螯合劑)能否逆轉(zhuǎn)地西他濱對細(xì)胞的抑制作用。CCK-8法檢測鐵死亡誘導(dǎo)劑erastin聯(lián)合地西他濱對MUTZ-1細(xì)胞活性的影響;2.流式細(xì)胞術(shù)檢測Fer-1、DFO、erastin單藥或聯(lián)合地西他濱作用于SKM-1、MUTZ-1細(xì)胞后ROS水平的變化;3.生化法檢測地西他濱及Fer-1、DFO處理MUTZ-1細(xì)胞后谷胱甘肽(GSH)含量變化;生化法檢測地西他濱、Fer-1、GSH、necrostatin-1、z-vad-fmk處理MUTZ-1細(xì)胞后谷胱甘肽過氧化物酶(GPXs)活性的變化。結(jié)果1.Necrostatin-1、z-vad-fmk可顯著增加MUTZ-1的細(xì)胞活力,necrostatin-1可顯著增加SKM-1的細(xì)胞活力(P0.05),Fer-1、necrostatin-1、DFO均可部分逆轉(zhuǎn)地西他濱對SKM-1、MUTZ-1細(xì)胞的生長抑制作用,其中鐵死亡抑制劑Fer-1的逆轉(zhuǎn)作用最為顯著(P0.05);erastin聯(lián)合地西他濱組細(xì)胞活力低于erastin單藥組和地西他濱單藥組,盡管協(xié)同作用不顯著(Q1.15);2.地西他濱作用于SKM-1、MUTZ-1后細(xì)胞內(nèi)ROS水平增高,且可被鐵死亡特異性抑制劑Fer-1及鐵螯合劑DFO抑制。Erastin、地西他濱共培養(yǎng)組可使細(xì)胞內(nèi)ROS水平進(jìn)一步增加;3.地西他濱可使MUTZ-1細(xì)胞內(nèi)GSH含量明顯降低,可被Fer-1逆轉(zhuǎn)。地西他濱可使MUTZ-1細(xì)胞內(nèi)GPXs活性下降,該作用可被Fer-1、necrostatin-1、z-vad-fmk或外源性GSH逆轉(zhuǎn)。結(jié)論1.MDS的發(fā)病機(jī)制可能主要涉及程序性壞死與凋亡,地西他濱誘導(dǎo)MDS細(xì)胞死亡的主要方式可能是程序性壞死與鐵死亡;2.地西他濱可引起鐵死亡相關(guān)性ROS水平增加;3.地西他濱可能通過降低細(xì)胞內(nèi)GSH含量及GPXs活性誘導(dǎo)MDS細(xì)胞發(fā)生鐵死亡。第二部分鐵過載誘導(dǎo)小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞發(fā)生鐵死亡目的MDS患者常伴有鐵過載,本研究擬通過構(gòu)建C57BL/6小鼠鐵過載模型,觀察鐵過載是否能誘導(dǎo)鐵死亡的發(fā)生,為鐵過載患者的治療提供新思路。方法1.C57BL/6小鼠腹腔注射右旋糖酐鐵,構(gòu)建小鼠鐵過載模型;2.通過ELISA法檢測小鼠外周血鐵蛋白水平,肝、脾病理切片顯示鐵沉積以驗(yàn)證鐵過載模型是否成功構(gòu)建;共聚焦顯微鏡顯示小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)二價(jià)鐵離子的數(shù)量,流式細(xì)胞術(shù)定量檢測熒光強(qiáng)度;3.檢測外周血血紅蛋白數(shù)量,觀察鐵過載程度與貧血程度之間是否存在線性關(guān)系;4.Fer-1(鐵死亡抑制劑)、necrostatin-1(程序性壞死抑制劑)、z-vad-fmk(凋亡抑制劑)、erastin(鐵死亡誘導(dǎo)劑)、DFO(鐵螯合劑)分別作用于小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞,CCK-8法檢測各組細(xì)胞活力,流式細(xì)胞術(shù)檢測ROS水平的變化,生化法檢測谷胱甘肽(GSH)含量及谷胱甘肽過氧化物酶(GPXs)活性的變化。結(jié)果1.通過給小鼠腹腔注射右旋糖酐鐵成功建立了小鼠鐵過載模型;2.鐵過載導(dǎo)致肝臟、脾臟、骨髓鐵沉積,外周血血紅蛋白(Hb)下降;鐵過載小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)二價(jià)鐵離子數(shù)量顯著高于對照組;小鼠外周血血紅蛋白濃度與細(xì)胞內(nèi)Fe2+水平、鐵蛋白濃度均呈負(fù)相關(guān);3.鐵過載可導(dǎo)致細(xì)胞活力降低,細(xì)胞活力與細(xì)胞內(nèi)Fe2+水平呈負(fù)相關(guān);4.Fer-1、necrostatin-1可部分逆轉(zhuǎn)鐵過載組細(xì)胞活力的下降,erastin可促進(jìn)鐵過載小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞增殖(P0.05);5.鐵過載小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)ROS水平顯著增加(P0.05),細(xì)胞內(nèi)GSH含量及GPXs活性下降。鐵螯合劑可提高細(xì)胞內(nèi)GSH水平,鐵死亡抑制劑、凋亡抑制劑及鐵螯合劑可顯著增加高劑量鐵劑組小鼠BMMNCs的GPXs活性(P0.05)。結(jié)論1.鐵過載可導(dǎo)致小鼠貧血,且貧血程度與鐵過載程度呈正相關(guān);2.程序性壞死與鐵死亡可能在鐵過載小鼠的細(xì)胞活力減低中發(fā)揮一定的作用;3.隨著鐵過載程度的加重,細(xì)胞內(nèi)Fe2+的水平及ROS水平增加;4.Erastin可促進(jìn)鐵過載小鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞增殖;5.鐵過載可能導(dǎo)致程序性壞死及鐵死亡相關(guān)性ROS升高;6.鐵螯合劑可提高鐵過載小鼠BMMNCs內(nèi)GSH水平;7.鐵過載導(dǎo)致的GPXs活性下降可能與鐵死亡及凋亡相關(guān);第三部分地西他濱誘導(dǎo)MDS患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞發(fā)生鐵死亡目的分別探討鐵死亡在低危及高危MDS患者發(fā)病機(jī)制中的作用,為MDS的治療提供理論依據(jù)。方法1.分別提取低危MDS、高危MDS及淋巴瘤患者的骨髓單個(gè)核細(xì)胞,與地西他濱共培養(yǎng),同時(shí)觀察Fer-1、necrostatin-1(程序性壞死特異性抑制劑)、z-vad-fmk(凋亡特異性抑制劑)及DFO(鐵螯合劑)能否逆轉(zhuǎn)地西他濱對三組細(xì)胞的抑制作用。CCK-8法檢測鐵死亡誘導(dǎo)劑erastin聯(lián)合地西他濱對三組細(xì)胞活性的影響;2.流式細(xì)胞術(shù)檢測三組患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞(BMMNCs)內(nèi)ROS水平;生化法檢測細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽(GSH)的含量與谷胱甘肽過氧化物酶(GPXs)活性。結(jié)果1.Fer-1、necrostatin-1、z-vad-fmk均可顯著逆轉(zhuǎn)地西他濱對低危BMMNCs的抑制作用(P0.05),necrostatin-1和Fer-1可較為明顯地逆轉(zhuǎn)地西他濱對高危BMMNCs的抑制作用,盡管差異不顯著(P0.05);2.地西他濱可導(dǎo)致MDS患者細(xì)胞內(nèi)ROS水平顯著增加(P0.05),Fer-1可顯著抑制該作用(P0.05),erastin可增加該作用(低危組P0.05,高危組P0.05);3.對于低危MDS患者,Fer-1、necrostatin-1、z-vad-fmk能顯著逆轉(zhuǎn)地西他濱對GSH水平的抑制作用(P0.05),對于高危MDS患者,Fer-1、necrostatin-1能顯著逆轉(zhuǎn)地西他濱對GSH水平的抑制作用(P0.05)。Erastin聯(lián)合地西他濱可導(dǎo)致GSH水平進(jìn)一步降低,在高危MDS組差異顯著;4.對于低危MDS組,Fer-1、z-vad-fmk聯(lián)合地西他濱組的GPXs活性較地西他濱組顯著升高(P0.05),erastin可使GPXs活性進(jìn)一步下降(P0.05)。對于高危MDS組,Fer-1、necrostatin-1聯(lián)合地西他濱組的GPXs活性較地西他濱組顯著升高(P0.05),erastin可使GPXs活性進(jìn)一步下降(P0.05)。結(jié)論1.地西他濱在低、高危MDS患者中的作用機(jī)制可能有差異,在低危MDS患者中以誘導(dǎo)鐵死亡及凋亡為主,在高危MDS患者中以誘導(dǎo)程序性壞死及鐵死亡為主;2.地西他濱通過誘導(dǎo)MDS患者BMMNCs細(xì)胞內(nèi)ROS水平的增加導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生鐵死亡;3.對于低危MDS患者,地西他濱通過誘導(dǎo)BMMNCs發(fā)生程序性壞死、鐵死亡、凋亡導(dǎo)致GSH水平降低。對于高危MDS患者,地西他濱通過誘導(dǎo)程序性壞死、鐵死亡導(dǎo)致GSH水平降低;4.地西他濱主要通過鐵死亡、凋亡抑制低危MDS細(xì)胞內(nèi)GPXs活性,通過鐵死亡、程序性壞死抑制高危MDS細(xì)胞內(nèi)GPXs活性。
【學(xué)位單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R551.3
【部分圖文】：

圖 1：GPX4 利用谷胱甘肽清除脂質(zhì)過氧化物[6]常綜合征（MDS）是最為常見的成人獲得性骨髓衰特征，是髓系腫瘤的異質(zhì)性集合。其主要特征包括少、易轉(zhuǎn)化為急性髓系白血�。ˋML）等，總體生病率為 3-4/105[8]�；疾÷孰S年齡的增長而增加，例病率為 7-35/105，男性高于女性[8]。示，50%-80%的 MDS 患者存在鐵過載，祛鐵治療。MDS 患者發(fā)生鐵過載的機(jī)制主要包括：（1）輸血

14圖 2 地西他濱誘導(dǎo)鐵死亡現(xiàn)象與其作用濃度及時(shí)間的關(guān)系（*P＜0.05）1.2.2 不同細(xì)胞死亡方式抑制劑及地西他濱對 MDS 細(xì)胞活力的影響為觀察 Fer-1（鐵死亡特異性抑制劑）、necrostatin-1（程序性壞死抑制劑） 、z-vad-fmk （凋亡抑制劑）、DFO（鐵離子螯合劑）對地西他濱抑制細(xì)胞活力的影響，設(shè)立對照組、地西他濱組、地西他濱+Fer-1 組、地西他濱+necrostatin-1 組、地西他濱+z-vad-fmk 組、地西他濱+DFO 組及單用各細(xì)胞死亡抑制劑組，分別作用于 MUTZ-1、SKM-1 細(xì)胞 48 小時(shí)，CCK-8 法檢測各組細(xì)胞活力(圖 3A)。結(jié)果顯示，necrostatin-1、z-vad-fmk 單藥可顯著增加 MUTZ-1 的細(xì)胞活力，

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文necrostatin-1 單藥可顯著增加 SKM-1 的細(xì)胞活力（P<0.05）；necrostatin-1、Fer-1和 DFO 均可部分逆轉(zhuǎn)地西他濱對 MUTZ-1、SKM-1 細(xì)胞的生長抑制，F(xiàn)er-1 的作用最為顯著（P<0.05），而 z-vad-fmk 則無此作用。說明 MDS 的發(fā)病機(jī)制可能主要涉及程序性壞死與凋亡，地西他濱誘導(dǎo) MDS 細(xì)胞死亡的主要方式可能是程序性壞死與鐵死亡。

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 單學(xué)峗;周茉;孫乃同;王純斌;盛薇薇;邵鈺;李小莉;;地西他濱治療老年急性髓系白血病療效及安全性分析[J];中華老年多器官疾病雜志;2016年09期

2 車綏艷;蔣文慧;;地西他濱在惡性血液腫瘤治療中的應(yīng)用[J];智慧健康;2019年06期

3 馬潔;;地西他濱聯(lián)合化療治療老年急性髓系白血病[J];世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘;2019年12期

4 聶芳娜;薛華華;;小劑量的地西他濱治療骨髓增生異常綜合征的效果觀察[J];當(dāng)代醫(yī)藥論叢;2019年07期

5 龍永翰;林文遠(yuǎn);;惡性血液系統(tǒng)疾病給予地西他濱治療的臨床研究進(jìn)展[J];臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)電子雜志;2017年71期

6 ;“血液腫瘤,唯晴可待” 地西他濱臨床用藥經(jīng)驗(yàn)第二期有獎?wù)魑耐ㄖ猍J];臨床血液學(xué)雜志;2018年01期

7 李娜;;地西他濱治療成人急性髓細(xì)胞白血病的臨床觀察[J];中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志;2017年35期

8 張前鵬;韓永勝;皖湘;孫光宇;;地西他濱與傳統(tǒng)化療治療中、高危骨髓增生異常綜合征的臨床比較[J];中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2018年01期

9 吳曉;徐敏;;地西他濱聯(lián)合半量預(yù)激方案治療老年急性髓系白血病的效果研究[J];當(dāng)代醫(yī)藥論叢;2017年23期

10 ;“血液腫瘤,唯晴可待”地西他濱臨床用藥經(jīng)驗(yàn)第二期有獎?wù)魑耐ㄖ猍J];臨床血液學(xué)雜志;2018年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 付強(qiáng);鄭智茵;;地西他濱與骨髓增生異常綜合征——劑量與療效研究進(jìn)展[A];2015年浙江省血液病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2015年

2 鄭春梅;劉鋒;;地西他濱治療老年急性粒細(xì)胞白血病一例并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[A];全國中西醫(yī)結(jié)合血液學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

3 王帥;朱雨;沈文怡;李建勇;何廣勝;;小劑量地西他濱治療原發(fā)性骨髓纖維化四例[A];第四屆全國血液腫瘤學(xué)術(shù)大會暨第七屆全國淋巴腫瘤診治進(jìn)展研討會論文匯編[C];2014年

4 朱雨;洪鳴;許戟;朱華淵;張?zhí)K江;陸化;何廣勝;李建勇;錢思軒;;地西他濱聯(lián)合粒細(xì)胞集落刺激因子預(yù)激治療骨髓增生異常綜合征[A];第四屆全國血液腫瘤學(xué)術(shù)大會暨第七屆全國淋巴腫瘤診治進(jìn)展研討會論文匯編[C];2014年

5 李素霞;朱宏麗;盧學(xué)春;郭搏;林潔;楊波;冉海紅;翟冰;劉洋;楊洋;范輝;;地西他濱在老年急性髓性白血病中的初步應(yīng)用[A];第13屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會議論文摘要[C];2011年

6 金潔;;骨髓增生異常綜合征的若干進(jìn)展[A];2014浙江省醫(yī)學(xué)會血液病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2014年

7 牛超;朱珊;崔久嵬;陳京濤;;地西他濱對γδT細(xì)胞功能的影響及機(jī)制研究[A];第十三屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會摘要匯編[C];2018年

8 楊力;徐瑞容;;地西他濱聯(lián)合曲古抑菌素A對SKM-1 MDS細(xì)胞株的體外研究[A];第十一屆全國紅細(xì)胞疾病學(xué)術(shù)會議暨學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2007年

9 邊祥海;王宙政;韓艷霞;胡蓓莉;黃菊;陳麗花;;地西他濱聯(lián)合三氧化二砷對人骨髓增生異常綜合征細(xì)胞株MUTZ-1細(xì)胞株的體外研究[A];2012年浙江省血液病學(xué)年會論文集[C];2012年

10 楊波;汪海濤;蔡力力;朱宏麗;盧學(xué)春;;超低劑量地西他濱聯(lián)合自體CIK細(xì)胞輸注治療骨髓增生異常綜合征轉(zhuǎn)化的高齡急性髓細(xì)胞白血病1例并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[A];中國腫瘤內(nèi)科進(jìn)展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前5條

1 本報(bào)記者 張旭;治療MDS的重大突破[N];中國醫(yī)藥報(bào);2015年

2 本報(bào)特約撰稿人 蔡德山;“他濱”漸顯明星相[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2007年

3 本報(bào)記者 王雪敏;MDS診治進(jìn)展[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2010年

4 趙淑菊;他濱類一山容二虎[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2013年

5 趙舒;浙江大病保險(xiǎn)外企品種亮了[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2015年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 黃蕾;鐵過載損傷中高危骨髓增生異常綜合征患者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及促進(jìn)轉(zhuǎn)白的機(jī)制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2019年

2 劉茜英;地西他濱抗腫瘤作用及其長循環(huán)溫度敏感脂質(zhì)體的研究[D];沈陽藥科大學(xué);2012年

3 段麗敏;地西他濱聯(lián)合小劑量CAG方案治療老年急性髓系白血病的臨床研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2016年

4 龐艷彬;地西他濱對骨髓增生異常綜合征患者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)影響的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2019年

5 姜立彩;地西他濱聯(lián)合伊馬替尼治療進(jìn)展期慢性髓性白血病的作用及機(jī)制[D];河北醫(yī)科大學(xué);2017年

6 胡永仙;調(diào)節(jié)性γδT細(xì)胞在移植物抗宿主病中的作用及機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2013年

7 張又夕;口服地西他濱擬肽類前藥的設(shè)計(jì)與評價(jià)[D];沈陽藥科大學(xué);2013年

8 邵琳琳;骨髓增生異常綜合征的分層診斷及去甲基化分段治療[D];山東大學(xué);2014年

9 岳蘭竹;骨髓增生異常綜合征惡性造血克隆的早期識別及根治研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2010年

10 郭昊;白介素35基因治療協(xié)同地西他濱抑制小鼠心臟移植排斥反應(yīng)的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 閆歡;小劑量地西他濱治療骨髓增生異常綜合征療效的Meta分析[D];延邊大學(xué);2019年

2 胡賢良;探討血清乳酸脫氫酶水平在評估骨髓增生異常綜合征患者預(yù)后及指導(dǎo)治療方案選擇中的價(jià)值[D];南昌大學(xué);2019年

3 楊成艷;超小劑量地西他濱聯(lián)合化療治療高危骨髓增生異常綜合征患者療效的評估[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2019年

4 朱嘉奇;含地西他濱方案治療中高危骨髓增生異常綜合征的療效觀察與預(yù)后因素分析[D];南華大學(xué);2019年

5 張文霞;地西他濱提高骨髓增生異常綜合征/急性髓系白血病病人血小板水平機(jī)理的探討[D];河北醫(yī)科大學(xué);2019年

6 石林;含地西他濱方案治療骨髓增生異常綜合征及急性髓系白血病療效分析[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2019年

7 程爽;地西他濱與預(yù)激方案單用及二者聯(lián)用治療老年急性髓系白血病的療效比較[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2019年

8 徐彩云;奧沙利鉑聯(lián)合地西他濱通過Wnt/β-Catenin信號通路抑制胃癌細(xì)胞株MKN-28的機(jī)制研究[D];南華大學(xué);2019年

9 律琦;地西他濱誘導(dǎo)骨髓增生異常綜合征細(xì)胞發(fā)生鐵死亡及其機(jī)制的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2019年

10 劉佳;小劑量地西他濱聯(lián)合丙戊酸用于急性白血病/骨髓增生異常綜合征異基因造血干細(xì)胞移植后維持治療[D];鄭州大學(xué);2019年

本文編號：2821932