腹主動脈瘤(abdominal aortic aneurysm,AAA)多發(fā)于50歲以上的老年男性,是腹主動脈壁局部異常擴張或膨脹超過正常血管直徑50%的一種病理狀態(tài),最終血管壁無法承受血流的沖擊而破裂,導致患者突然大量失血而死亡,病死率高,除高風險的外科手術(shù)外尚無切實有效的治療方法,預(yù)后極差,因此,深入探討腹主動脈瘤發(fā)病機制,尋找其防治方法顯得尤為重要。免疫球蛋白E(IgE)通過與肥大細胞和嗜堿性粒細胞結(jié)合從而激活I(lǐng)型超敏反應(yīng),眾所周知,IgE及其受體FcεRI在過敏性哮喘導致的的氣道炎癥和重塑中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。我們的前期研究發(fā)現(xiàn),AAA患者血漿中免疫球蛋白E(IgE)含量顯著升高,最近有研究表明,IgE在腹主動脈瘤的發(fā)病機制中也起著重要作用。然而,IgE促進AAA發(fā)生發(fā)展的具體機制目前尚不清楚。本課題研究發(fā)現(xiàn),哮喘誘導小鼠IgE升高并加重了小鼠AAA形成,敲除FcεRI明顯減輕由哮喘加重的小鼠AAA直徑、發(fā)生率、彈性板斷裂和AAA局部及全身性炎癥反應(yīng),并檢測到敲除FcεRI可以明顯緩解AAA組織衰老及p21表達。體外研究表明,人主動脈平滑肌細胞(HASMC)表達IgE受體FcεRI,并且IgE刺激可使平滑肌p21表達量顯著升高,同時不影響p53表達量,并可以明顯促進平滑肌衰老,而敲低長非編碼RNA:lincRNA-p21則可抑制IgE誘導的p21表達升高和HASMC衰老。動物實驗證實,敲低小鼠lincRNA-p21可有效減緩哮喘加重的AAA,并降低瘤組織中p21表達減輕細胞衰老。本研究首次發(fā)現(xiàn)了哮喘誘導的高IgE能夠通過lincRNAp21-p21通路促進平滑肌衰老,從而加重AAA形成,為哮喘加重AAA的診斷和潛在治療靶點提供新的實驗依據(jù)。
【學位單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R543.1
【部分圖文】：

哮喘與腹主動脈瘤之間的關(guān)系，我們建立小鼠哮喘并發(fā)腹主動脈瘤動物模型，采用逡逑Ａｎｇｌｌ誘導ＡｐｏＥ＿Ａ小鼠法建立腹主動脈瘤模型的同時，用卵清蛋白（ＯＶＡ）誘導建逡逑立小鼠過敏性哮喘模型（圖１Ａ）。如圖１Ｂ－Ｆ所示，與ＰＢＳ霧化暴露對照組相比，逡逑ＯＶＡ誘導哮喘組小鼠（哮喘組）的支氣管肺泡灌洗液（Ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒ邋ｌａｖａｇｅ邋ｆｌｕｉｄｓ，逡逑ＢＡＬＦ）中嗜酸性粒細胞、淋巴細胞的數(shù)量顯著增加，哮喘組小鼠血清中ＯＶＡ特異逡逑性ＩｇＥ含量也顯著升高，膠原纖維染色證實，哮喘組小鼠肺組織膠原纖維的形成較逡逑對照組明顯增多，并且哮喘組小鼠肺組織小血管周圍炎性細胞的浸潤較對照組顯著逡逑增加，以上實驗結(jié)果表明ＯＶＡ誘導建立小鼠過敏性哮喘模型成功。在敲除小鼠ＩｇＥ逡逑受體ＦｃｅＲＩ邋（ＡｐｏＥ＋，邋ＦｃｅＲＴＭ、＿）再接受ＯＶＡ誘導哮喘（實驗組）后，支氣管肺逡逑泡灌洗液中嗜酸性粒細胞、淋巴細胞的數(shù)量較哮喘組明顯下降，血清中ＯＶＡ特異逡逑性ＩｇＥ含量、肺組織膠原纖維及肺組織小血管周圍炎性細胞浸潤都比哮喘組小鼠顯逡逑著減少。說明ＩｇＥ受體ＦｃｅＲＩ在小鼠過敏性哮喘發(fā)病進程中具有重要病理作用。逡逑對小鼠進行哮喘并發(fā)ＡＡＡ建模后解剖小鼠觀察其主動脈成瘤情況

逑除炎癥外，血管壁細胞的衰老和凋亡在血管重塑中也起著至關(guān)重要的作用［５３R%。逡逑因此我們使用ＴＵＮＥＬ染色觀察三組小鼠ＡＡＡ組織中的細胞凋亡情況，如圖２Ｋ所逡逑示，哮喘顯著增加了邋ＡＡＡ小鼠瘤組織壁中凋亡細胞的數(shù)量，特別是增加了組織中逡逑平滑肌凋亡細胞的數(shù)量（圖２Ｌ），而敲除ＦｃｅＲＩ后由哮喘造成的組織細胞凋亡增加逡逑明顯回落。并且通過Ｐ－半乳糖苷酶（ＳＡ－ｐ－ｇａｌ）衰老組織化學染色發(fā)現(xiàn)，與沒有哮喘的逡逑ＡＡＡ單發(fā)小鼠相比，哮喘并發(fā)ＡＡＡ小鼠的主動脈瘤組織衰老更為嚴重（圖２Ｍ和逡逑Ｎ）而哮喘同樣未能顯著加重ＡｐｏＥ＇邋ＴｃｅＲｒ邋－小鼠ＡＡＡ組織中的細胞凋亡和衰老（圖逡逑２Ｋ－Ｎ）。以上結(jié)果表明，ＩｇＥ能夠通過促進腹主動脈壁細胞的衰老和凋亡從而加重小逡逑鼠ＡＡＡ發(fā)生發(fā)展。逡逑Ａ邐Ｂ邐Ｃ邐Ｄ逡逑５０＾邋——邐４００邋＊邐０．１５－邋＊邋邋邋＾邋？邋——邋口邋ＰＢＳＡｐｏＥ’逡逑Ｃ邋＿邐＊邐ｃ邐－ｒ邐ｘ邐Ｉ邋邐＾邋ＢＯＶＡＡｐｏＥ－逡逑ｉ邋ＩＩ３００邋ｉ邋ｉ邋ｊｉ，邋｜邋ＢＯＶＡＡｐｏ？＂逡逑ｆ４Ｌ邋〖ｉ：ｎＬ邋ｆｃｆｉｌｉ逡逑Ｅ邐Ｆ邐Ｇ邐Ｈ邐？，逡逑？邐１．０ｉ邋？邋邋邋邋８ｉ邐；＾３０ｊ邋邋逡逑Ｈ４＇邋￣ｒ邐ｉｉ邋＾邐Ｌ邋｜逡逑‘邐■Ｍｍ邐‘邐ｉｔＬ逡逑１邐＾邐Ｋ邐Ｌ逡逑８０］邋——１１—邐一邋１00ｌ邐邐邋Ｈ邋４

逑細胞，ＳＡ－（３－ｇａｌ衰老染色結(jié)果表明，ＩｇＥ與Ａｎｇｌｌ相同都能夠促使平滑肌顯著衰老，逡逑（圖３Ｃ，邋Ｄ）。ｐ２１，也稱為細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑１邋（ｃｙｃｌｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅ逡逑ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ邋１）是細胞衰老的經(jīng)典標志物，也是代表其上游因子ｐ５３活性的重要靶因子，逡逑對丨ｇＥ刺激后的平滑肌細胞的檢測發(fā)現(xiàn)，ＩｇＥ刺激可以顯著上調(diào)平滑肌細胞ｐ２１的逡逑ｍＲＮＡ及蛋白水平的表達量，然而ｐ５３的ｍＲＮＡ及蛋白水平的表達量卻沒有顯著逡逑差異（圖３Ｅ－Ｇ）。于是在小鼠組織上加以驗證發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，哮喘引發(fā)高ＩｇＥ逡逑組小鼠的腹主動脈瘤組織ｍＲＮＡ水平上同樣出現(xiàn)ｐ２１表達顯著增高而ｐ５３的表達逡逑量沒有顯著統(tǒng)計學差異現(xiàn)象（圖３Ｈ，Ｉ），并且免疫組化染色結(jié)果顯示，哮喘小鼠腹主逡逑動脈瘤組織ｐ２１蛋白水平較對照組明顯增多圖３Ｊ，Ｋ）。這些發(fā)現(xiàn)表明，ＩｇＥ在體外和逡逑體內(nèi)都能夠誘發(fā)主動脈血管平滑肌發(fā)生衰老。逡逑Ａ邐Ｂ邐Ｃ逡逑８－１邐４０邋ｎ逡逑

本文編號：2819596