研究背景:心力衰竭簡稱心衰(Heart Failure,HF),是指在各種因素的影響下(如缺血缺氧、炎癥、負(fù)荷過重等)導(dǎo)致心肌損傷,引起心肌結(jié)構(gòu)改變和功能異常,從而導(dǎo)致心臟泵血功能降低而無法滿足機(jī)體代謝需要的臨床綜合征。心力衰竭常常是多種心臟疾病(如高血壓、冠心病、心肌梗死等)終末階段的表現(xiàn),而非一種獨(dú)立的疾病。心力衰竭患者的臨床結(jié)局較差,并且死亡率很高,已發(fā)展為世界心血管領(lǐng)域的重要公共衛(wèi)生問題。現(xiàn)階段人們?nèi)匀辉诜e極探索心力衰竭的發(fā)病機(jī)制,可能與心肌細(xì)胞的凋亡及炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是體內(nèi)蛋白質(zhì)加工、折疊、轉(zhuǎn)運(yùn)的場所,當(dāng)缺血缺氧、脂質(zhì)負(fù)荷過重、病毒感染、藥物或毒素影響時,會破壞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài),從而誘發(fā)折疊或未折疊的蛋白在腔內(nèi)聚集或鈣離子(Ca~(2+))穩(wěn)態(tài)失衡的狀態(tài)即內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress,ERS)。當(dāng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)劇烈或持續(xù)時間較長時,會進(jìn)一步誘發(fā)細(xì)胞凋亡機(jī)制引起細(xì)胞死亡。肌漿網(wǎng)鈣離子轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶-2a(SERCA2a)通過參與心肌細(xì)胞的鈣離子轉(zhuǎn)運(yùn)維持鈣離子穩(wěn)態(tài)來調(diào)控心肌細(xì)胞收縮與舒張功能。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激時,SERCA2a活性減低或者表達(dá)減少引起心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子穩(wěn)態(tài)失衡,從而導(dǎo)致心肌細(xì)胞收縮功能障礙而發(fā)生心力衰竭。曲美他嗪(Trimetazidine,TMZ)是臨床上用來治療心肌缺血的藥物。已有大量研究表明,在心肌缺血的患者中,TMZ可以通過減少心肌細(xì)胞內(nèi)自由基的產(chǎn)生從而減弱氧化應(yīng)激反應(yīng)、緩解鈣超載,繼而提高心肌的抗缺氧能力,縮小心肌缺血壞死的面積,起到保護(hù)心臟結(jié)構(gòu)與功能的作用。近年來,有相關(guān)文獻(xiàn)報道,在缺血性心肌病中,TMZ可以通過調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度從而維持鈣離子穩(wěn)態(tài)的平衡,發(fā)揮心肌保護(hù)作用。然而在心力衰竭時,TMZ是否可以通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激保護(hù)心肌鮮有報道。因此在本研究中,我們采用異丙腎上腺素(ISO)誘導(dǎo)心力衰竭模型,探討TMZ是否可以改善小鼠的心功能,并對其中機(jī)制進(jìn)行探索;同時,在體外利用心肌細(xì)胞研究TMZ對ISO介導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷是否有保護(hù)作用,及可能的分子機(jī)制。研究方法:1、在體研究:以8周大、雄性C57小鼠作為研究對象,采用ISO誘導(dǎo)心力衰竭模型,并將小鼠隨機(jī)分為以下六組(每組8只):(1)sham組;(2)TMZ組:TMZ20mg/Kg,灌胃,每天三次;(3)ISO組:30mg/kg每天,皮下注射;(4)ISO+TMZ組;(5)ISO+TMZ+rAAV-siSERCA2a組:小鼠在ISO和TMZ處理前,通過尾靜脈注射rAAV-siSERCA2a(1×10~(11)/Kg);(6)ISO+TMZ+rAAV-GFP組:小鼠在ISO和TMZ處理前,通過尾靜脈注射rAAV-GFP(1×10~(11)/Kg)。干預(yù)2周后,采用心臟超聲檢查及心導(dǎo)管檢查(Millar導(dǎo)管)檢測小鼠的心臟形態(tài)學(xué)及功能學(xué)改變。同時,通過免疫組織化學(xué)以及免疫印跡方法檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)的標(biāo)記蛋白和SERCA2a蛋白的表達(dá)情況。2、體外研究:以H9C2心肌細(xì)胞系作為研究對象,采用ISO誘導(dǎo)心肌損傷模型,予以TMZ預(yù)處理,觀察TMZ在體外是否可以緩解ISO誘導(dǎo)的心肌損傷,并對其中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路相關(guān)蛋白進(jìn)行檢測。另外,通過予以siSERCA2a沉默SERCA2a的表達(dá),研究SERCA2a在TMZ保護(hù)心肌細(xì)胞中的作用及具體機(jī)制。研究結(jié)果:結(jié)果表明,經(jīng)小鼠心臟超聲和Millar導(dǎo)管檢查,與Sham組相比,ISO組可見小鼠的收縮功能和舒張功能均降低,當(dāng)給予TMZ干預(yù)后,小鼠心功能改善,而在ISO+TMZ+rAAV-siSERCA2a組,此效應(yīng)明顯被抑制,表明TMZ可能通過SERCA2a發(fā)揮改善心功能的作用。在TUNEL檢測細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)中,我們觀察到ISO可以明顯誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡,而TMZ對于心肌細(xì)胞凋亡具有改善作用,且該作用被SERCA2a的沉默所逆轉(zhuǎn)。經(jīng)免疫印跡方法檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋白GRP78和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路上特異性的凋亡相關(guān)蛋白CHOP蛋白,結(jié)果顯示在單獨(dú)使用TMZ干預(yù)時,GRP78蛋白及CHOP蛋白表達(dá)與對照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,在ISO組中,GRP78蛋白及CHOP蛋白的表達(dá)量均有所升高,而TMZ可以降低這兩種蛋白的表達(dá)量,rAAV-si-SERCA2a干預(yù)后,可以抑制TMZ的作用。在體外實(shí)驗(yàn)中,經(jīng)免疫蛋白印跡法檢測不同組別中GRP78、CHOP、SERCA2a三種蛋白的表達(dá)量,結(jié)果顯示,與對照組相比,ISO干預(yù)明顯誘導(dǎo)了GRP78、CHOP蛋白的表達(dá)量升高,而SERCA2a蛋白的表達(dá)量降低,TMZ干預(yù)抑制了ISO的上述效應(yīng),而這一作用可以被SERCA2a沉默所阻斷。使用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞的凋亡情況,結(jié)果顯示,ISO可以明顯誘導(dǎo)H9C2細(xì)胞發(fā)生凋亡,而TMZ可以顯著緩解H9C2細(xì)胞凋亡,且該作用被SERCA2a的沉默所逆轉(zhuǎn)。研究結(jié)論:1.在體內(nèi)研究中,ISO可以明顯誘導(dǎo)心力衰竭,包括心臟的形態(tài)學(xué)改變(心室壁增厚、心臟增大)、血液流變學(xué)改變(心室內(nèi)壓力變化速率下降、心室舒張末期壓力增高等),同時誘導(dǎo)心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,而TMZ可以明顯的抑制ISO所誘導(dǎo)的心力衰竭,并且這一作用可能與SERCA2a表達(dá)上調(diào),從而減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有關(guān);2.在體外研究中,ISO干預(yù)可以明顯的誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,刺激心肌細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞凋亡,外源性TMZ可以明顯的抑制ISO的上述效應(yīng),而這一作用可以被SERCA2a沉默所阻斷。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R541.6
【部分圖文】：

圖 1-3 心肌組織 TUNEL 染色。（A）心肌組織 TUNEL 染色。（B）心肌細(xì)胞凋亡比sham：即空白對照組；TMZ：TMZ 20mg/Kg，灌胃，每天三次；ISO：30mg/kg 每皮下注射； ISO+TMZ：TMZ（20mg/Kg）灌胃（每天三次）后，皮下注射 ISO；ISO+TMZ+rAAV-siSERCA2a：小鼠在 ISO 和 TMZ 處理前，通過尾靜脈注射rAAV-siSERCA2a （1×1011/Kg）；ISO+TMZ+rAAV-GFP：小鼠在 ISO 和 TMZ 處理

圖 2-3Western-blot 檢測心肌組織的 GRP78 蛋白和 CHOP 蛋白表達(dá)量。A.心肌組織磨后，收集蛋白，采用針對 GRP78 和 CHOP 抗體進(jìn)行 Western-blot 檢測的結(jié)果。B蛋白表達(dá)量的灰度掃描統(tǒng)計(jì)圖。sham：即空白對照組；TMZ：TMZ 20mg/Kg，灌胃每天三次；ISO：30mg/kg 每天，皮下注射； ISO+TMZ：TMZ（20mg/Kg）灌胃（天三次）后，皮下注射 ISO；ISO+TMZ+rAAV-siSERCA2a：小鼠在 ISO 和 TMZ 處前，通過尾靜脈注射 rAAV-siSERCA2a （1×1011/Kg）；ISO+TMZ+rAAV-GFP：小鼠ISO 和 TMZ 處理前，通過尾靜脈注射 rAAV-GFP（1×1011/Kg）。*P<0.05 vs. sham；P<0.05 vs. ISO；& P<0.05 vs. ISO+TMZ。2.2.3.2 曲美他嗪通過調(diào)節(jié) SERCA2a 抑制體外心肌細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激為了進(jìn)一步驗(yàn)證上述結(jié)果，我們在體外也進(jìn)行了相對應(yīng)的研究。使用 Western-b方法檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的標(biāo)志性蛋白 GRP78 和與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)的凋亡通路的標(biāo)志蛋白 CHOP，以及 SERCA2a，用 GAPDH 作為內(nèi)參照。結(jié)果顯示（圖 2-4），與 con

圖2-4 Western-blot 檢測心肌細(xì)胞的 GRP78 蛋白、CHOP 蛋白及SERCA.在對心肌細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)干預(yù)后，收集蛋白，進(jìn)行 Western-blot 檢量的灰度掃描統(tǒng)計(jì)圖。control：即空白對照組；Lipo 2000：單獨(dú)使細(xì)胞 TMZ：20μM 干預(yù) 24 小時；ISO：100nM 干預(yù) 24 小時；ISO+TM和 TMZ（20μM）共同干預(yù)細(xì)胞；ISO+TMZ+ Si-SERCA2a：向細(xì)胞干預(yù) 24 小時后，加 ISO（100nM）、TMZ（20μM）和共同干預(yù)細(xì)胞；ISO向細(xì)胞轉(zhuǎn)染 Si-SERCA2a 干預(yù) 24 小時后，加 ISO（100nM）、TMZ（預(yù)細(xì)胞。* P<0.05 vs.sham；# P<0.05 vs.ISO；& P<0.05 vs.ISO+TMZ

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 呂敏;;鹽酸曲美他嗪治療冠心病穩(wěn)定型心絞痛的效果觀察[J];中國醫(yī)藥指南;2019年35期

2 王林;;曲美他嗪在缺血性心肌病心力衰竭治療中的應(yīng)用效果分析[J];心血管病防治知識(學(xué)術(shù)版);2018年16期

3 郎輝輝;;琥珀酸美托洛爾緩釋片聯(lián)合曲美他嗪在冠心病不穩(wěn)定型心絞痛治療中的應(yīng)用價值研究[J];北方藥學(xué);2019年01期

4 李麗;;曲美他嗪在缺血性心肌病心力衰竭治療中臨床效果分析[J];中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志;2019年02期

5 周濤;;曲美他嗪對擴(kuò)張型心肌病心力衰竭治療效果的臨床效果[J];中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志;2019年02期

6 趙興瓊;;曲美他嗪治療缺血性心肌病心力衰竭的療效評價[J];世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘;2019年11期

7 高霞;;琥珀酸美托洛爾緩釋片聯(lián)合曲美他嗪片在冠心病不穩(wěn)定型心絞痛治療中的應(yīng)用效果分析[J];臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)電子雜志;2019年40期

8 楊秀軍;;分析琥珀酸美托洛爾緩釋片、曲美他嗪對冠心病不穩(wěn)定型心絞痛的聯(lián)合治療價值[J];中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志;2019年15期

9 付忠;;琥珀酸美托洛爾緩釋片聯(lián)合曲美他嗪在冠心病不穩(wěn)定型心絞痛治療中的應(yīng)用價值評價[J];中國社區(qū)醫(yī)師;2019年28期

10 孫寶軍;;琥珀酸美托洛爾緩釋片聯(lián)合曲美他嗪在冠心病不穩(wěn)定型心絞痛治療中的應(yīng)用價值研究[J];中國醫(yī)藥指南;2019年30期

相關(guān)會議論文 前10條

1 蔣家祥;庾美玲;陳觀照;歐玲;;曲美他嗪聯(lián)合麝香保心丸治療老年冠心病慢性心力衰竭[A];第十三次全國心血管病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

2 王洪濤;徐泉崧;;鹽酸曲美他嗪治療32例心絞痛療效觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會心血管病學(xué)分會第十次全國心血管病學(xué)術(shù)會議匯編[C];2008年

3 吳_g;智艷芳;;曲美他嗪抗心律失常作用及其可能的抗氧化損傷機(jī)制[A];中華醫(yī)學(xué)會心血管病學(xué)分會第十次全國心血管病學(xué)術(shù)會議匯編[C];2008年

4 李會會;;曲美他嗪治療冠心病合并糖尿病的療效觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會心血管病學(xué)分會第十次全國心血管病學(xué)術(shù)會議匯編[C];2008年

5 傅向華;賈新未;張晶;吳偉力;谷新順;李亮;;曲美他嗪對缺血性心臟病的保護(hù)作用[A];中華醫(yī)學(xué)會第11次心血管病學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

6 劉雪會;蓋迎利;劉飛;陳超;徐明;李昭屏;;曲美他嗪對壓力超負(fù)荷大鼠心肌纖維化的作用[A];第七屆海峽兩岸心血管科學(xué)研討會論文集[C];2009年

7 龐明;;高齡冠心病病人長期服用曲美他嗪治療心絞痛的觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會第11屆全國內(nèi)科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

8 趙錦國;張愛英;;曲美他嗪治療穩(wěn)定性勞力型心絞痛患者的療效觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會心血管病學(xué)分會第十次全國心血管病學(xué)術(shù)會議匯編[C];2008年

9 徐冉;于波;魏林;李曉光;侯靜波;;曲美他嗪治療缺血性心肌病心力衰竭的療效及血漿B型腦鈉肽的變化[A];中華醫(yī)學(xué)會心血管病學(xué)分會第十次全國心血管病學(xué)術(shù)會議匯編[C];2008年

10 趙紅麗;李潞;劉麗敏;王宇;李純;;曲美他嗪對冠心病心力衰竭患者血漿氮末端腦鈉肽水平及運(yùn)動耐量的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會心血管病學(xué)分會第十次全國心血管病學(xué)術(shù)會議匯編[C];2008年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 特約撰稿 蔡德山;曲美他嗪緩釋片增長506% 恒瑞、齊魯向原研藥發(fā)起挑戰(zhàn)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2019年

2 路紅霞 北京嘉林藥業(yè)股份有限公司;曲美他嗪成熟市場繼續(xù)飛奔[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2015年

3 國訊;曲美他嗪不再用于耳鳴、眩暈的治療 警惕其引起的運(yùn)動障礙等安全性風(fēng)險[N];中國醫(yī)藥報;2014年

4 福建省寧德人民醫(yī)院藥劑科 李枝端;曲美他嗪的超說明書應(yīng)用現(xiàn)象應(yīng)引起重視[N];中國醫(yī)藥報;2013年

5 記者 李雪墨;國家總局提示曲美他嗪安全性風(fēng)險[N];中國醫(yī)藥報;2014年

6 蔡德山;抗心絞痛亞類藥曲美他嗪增長快[N];中國醫(yī)藥報;2011年

7 馮友根;抗心肌缺血新藥曲美他嗪[N];中國醫(yī)藥報;2004年

8 記者 喬寧;帕金森病患者禁用曲美他嗪[N];健康報;2014年

9 特約撰稿 蔡德山;心肌迎來“節(jié)能增排”新動力[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2011年

10 解放軍總醫(yī)院心血管內(nèi)科 衣淑華 劉國樹;治療缺血性心臟病新藥[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報;2001年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前9條

1 吳世勇;自噬在曲美他嗪保護(hù)心肌缺血再灌注損傷中的作用及機(jī)制[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2019年

2 張宇杰;老年人體成分情況調(diào)查及曲美他嗪干預(yù)研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2019年

3 霍紅;黃芪甲苷聯(lián)合曲美他嗪對心力衰竭犬能量代謝的影響[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2018年

4 師文;曲美他嗪改善大鼠急性心肌缺血線粒體損傷的機(jī)制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2016年

5 劉秋江;加味參附顆粒對慢性心力衰竭及心肌能量代謝的研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2013年

6 戴中亮;乳酸穿梭在心肌缺血再灌注損傷中保護(hù)作用研究[D];華中科技大學(xué);2012年

7 張雷;早期能量代謝調(diào)節(jié)在糖尿病心肌病中的作用及機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2017年

8 彭澍;曲美他嗪對慢性心力衰竭療效的系統(tǒng)評價[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

9 李楠;調(diào)節(jié)底物代謝對衰竭心肌代謝重構(gòu)的干預(yù)作用及相關(guān)機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 侯慧英;曲美他嗪通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)揮心肌保護(hù)作用[D];華中科技大學(xué);2019年

2 吳珂菲;曲美他嗪通過激活Nrf2和抑制炎性小體降低脂多糖誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷[D];華中科技大學(xué);2019年

3 陳玉磊;曲美他嗪對缺氧/復(fù)氧心肌細(xì)胞焦亡的影響[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2019年

4 張奕;曲美他嗪對心肌梗死后心力衰竭大鼠心肌和骨骼肌能量代謝的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2018年

5 劉春;能量代謝調(diào)節(jié)在PCI圍手術(shù)期與衰老進(jìn)程中的腎臟保護(hù)作用[D];濟(jì)南大學(xué);2019年

6 苗孟丹;曲美他嗪對冠心病患者運(yùn)動耐量的影響[D];河北工程大學(xué);2018年

7 霍世芳;曲美他嗪的心臟細(xì)胞保護(hù)機(jī)制對于穩(wěn)定型心絞痛患者的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2018年

8 張培培;觀察曲美他嗪治療糖尿�。ú〕獭�10年）合并心功能不全患者的療效[D];石河子大學(xué);2017年

9 張虹;曲美他嗪對離體心肌細(xì)胞缺血再灌注損傷誘導(dǎo)的自噬基因Beclin1的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2017年

10 陳仕健;鹽酸曲美他嗪對冠心病合并勃起功能障礙患者的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2017年

本文編號：2807407