發(fā)布時(shí)間：2020-08-23 12:18

【摘要】：目的:探究吸煙對(duì)大鼠NLRP3炎癥小體信號(hào)通路的影響,以及褪黑素的保護(hù)效果,并探討NLRP3炎癥小體在吸煙導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化中的作用。方法:15只清潔級(jí)SD雄性大鼠,鼠齡6-8周,體重300±10g,隨機(jī)分為3組,每組5只:對(duì)照組(C組)、吸煙組(S組)、吸煙+褪黑素組(M組)。三組均給予標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)。S組及M組每日10點(diǎn)-12點(diǎn),14點(diǎn)-16點(diǎn)兩個(gè)時(shí)段置于煙熏籠內(nèi)煙熏,每時(shí)段各吸入20支點(diǎn)燃香煙�？傆�(jì)每日接受煙熏時(shí)間4小時(shí),每日接受40支香煙吸入。M組在每日接受煙熏之前,腹腔注射褪黑素20mg/kg;C組及S組在每日接受煙熏之前,腹腔注射等量載液。持續(xù)1周。喂養(yǎng)1周后,麻醉動(dòng)物,腹主動(dòng)脈取血,并分離獲取腹主動(dòng)脈。將腹主動(dòng)脈迅速置于-80℃冰箱中保存,用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法(RT-qPCR)檢測(cè)腹主動(dòng)脈組織中NLRP3mRNA的表達(dá)水平,以及用WesternBlot檢測(cè)腹主動(dòng)脈組織中NLRP3、ASC、IL-1β、caspase-1的表達(dá)水平。動(dòng)脈血離心分離血漿,用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)大鼠血漿IL-1β、IL-18、MCP-1水平。剩余血液作適當(dāng)稀釋,密度梯度離心法分離大鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC),WesternBlot檢測(cè)PBMC中NLRP3、caspase-1的表達(dá)水平。采用單因素方差分析比較三組間蛋白及mRNA水平的差異。結(jié)果:1.血漿炎癥因子情況:與C組相比,S組血漿IL-1β水平顯著升高(p0.001),IL-18水平顯著升高(p0.0001),MCP-1水平明顯升高(p0.01)。與S組相比,M組血漿IL-1β水平顯著降低(p0.001),IL-18水平顯著降低(p0.0001),MCP-1 水平較低(p0.05,p0.1)。2.PBMC 中 NLRP3、caspase-1 蛋白的表達(dá):與 C組相比,S組NLRP3、caspase-1表達(dá)明顯增多(p0.05)。M組與S組相比無(wú)顯著性差異。3.腹主動(dòng)脈組織NLRP3、caspase-1、ASC、IL-1β蛋白的表達(dá):與C組相比,S組NLRP3、IL-1β表達(dá)明顯增多(p0.05),caspase-1、ASC表達(dá)較多,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。與S組相比,M組NLRP3、caspase-1、IL-1β表達(dá)明顯降低(p0.05)。4.腹主動(dòng)脈組織NLRP3mRNA的表達(dá):與C組相比,S組NLRP3mRNA表達(dá)明顯升高(p0.05),而M組則明顯低于S組(p0.05)。結(jié)論:吸煙可導(dǎo)致大鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞及主動(dòng)脈組織NLRP3炎癥小體表達(dá)的增加,血漿中NLRP3炎癥小體下游炎癥因子IL-1β、IL-18及血漿MCP-1的水平升高。吸煙可能通過(guò)激活單核細(xì)胞NLRP3炎癥小體信號(hào)通路,促進(jìn)單核細(xì)胞募集,引起血管炎癥損傷,導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化。褪黑素可能通過(guò)抑制NLRP3炎癥小體信號(hào)通路對(duì)吸煙導(dǎo)致的血管炎癥損傷發(fā)揮保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R543.5
【圖文】：

各組大鼠血漿ＩＬ－ｉｐ、ＩＬ－１８、ＭＣＰ－１表達(dá)水平逡逑大鼠血漿ＩＬ－１Ｐ表達(dá)水平逡逑通過(guò)檢測(cè)三組大鼠血漿ＩＬ－ｌｐ含量，發(fā)現(xiàn)Ｓ組大鼠血漿ＩＬ－ｌｐ水平顯著高（ｐ＜０．００１）。相比于單純吸煙組，Ｍ組大鼠經(jīng)褪黑素干預(yù)，血漿ＩＬ－１（３水平低于Ｓ組（ｐ＜０．００１）。Ｍ組和Ｃ組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。具體見(jiàn)表３及圖１。逡逑表３各組大鼠血漿ＩＬ－ｉｐ蛋白水平（婦：ｓ）邐逡逑組別邐Ｍｍ邐ＩＬ－ｌｐ邋（ｐｇ／ｍｌ）逡逑Ｃ邐５邐４２．３５±２１．０２逡逑Ｓ邐５邐４０９２．２７±１８９７．３４逡逑Ｍ邐５邐３３１．６９±１２５．６６逡逑

檢測(cè)三組大鼠血漿ＩＬ－１８含量發(fā)現(xiàn)，Ｓ組大鼠血漿ＩＬ－１８水平顯著高于Ｃ組，逡逑差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ｐ＜0．000ｌ）。Ｍ組大鼠血漿ＩＬ－１８水平顯著低于Ｓ組（ｐ＜逡逑０．０００１）。Ｍ組和Ｃ組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。具體見(jiàn)表４及圖２。逡逑表４各組大鼠血漿ＩＬ－１８蛋白水平（無(wú)士ｓ）邐逡逑組別邐例數(shù)邐ＩＬ－１８邋（ｐｇ／ｍｌ）逡逑Ｃ邐５邐２６．９４±４．０４逡逑Ｓ邐５邐６５．３１±４．３２逡逑Ｍ邐５邐２４．３９±８．０１逡逑＊邋＊邋＊邋★邐＊邋＊邋＊邋＊逡逑８0邋ｒ邋，邐邐邐，逡逑Ｉ邐１１邐Ｉ逡逑６０邋■逡逑■逡逑Ｂ邐４０邐－邐ＨＨｍ逡逑：：ｈ邋■工逡逑■逡逑ｏ邐——ｉ—邐＾邐Ｌ＿ｒ＂＿邋—逡逑Ｏ邐＜ｂ逡逑圖２各組大鼠血漿ＩＬ－１８水平逡逑注：ＥＬＩＳＡ檢測(cè)各組大鼠血漿ＩＬ－１８水平。Ｃ：對(duì)照組；Ｓ：吸煙組；Ｍ：吸煙＋褪逡逑黑素組。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。逡逑１８逡逑

檢測(cè)三組大鼠血漿ＭＣＰ－１含量發(fā)現(xiàn)，Ｓ組大鼠血漿ＭＣＰ－１水平顯著高于Ｃ組逡逑（ｐ＜０．０１邋組大鼠血漿ＭＣＰ－１水平較低于Ｓ組，但差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（０．０５逡逑＜ｐ＜０．１）。Ｍ組和Ｃ組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。具體見(jiàn)表５及圖３。逡逑表５各組大鼠血漿ＭＣＰ－１蛋白水平（無(wú)土ｓ）邐逡逑組另邋ＩＩ邐＾邐ＭＣＰ－１邋（ｐｇ／ｍｌ）逡逑Ｃ邐５邐２５１．３５±３１．７７逡逑Ｓ邐５邐３７５．３３±５０．６１逡逑Ｍ邐５邐２９２．６７±６７．０７逡逑＊邋★逡逑５００「邐，邐，逡逑４００邋－邐｜逡逑＿邐Ｔ逡逑Ｄ）邐■邐＿＿＿邐Ｉ邐，逡逑２００邐．邐Ｈ逡逑■逡逑１００邋■逡逑０邋邋邋１邋邐＾邐邐ｒ邋邋邐逡逑圖３各組大鼠血漿ＭＣＰ＿１水平逡逑注：ＥＬＩＳＡ檢測(cè)各組大鼠血漿ＭＣＰ－１水平。Ｃ：對(duì)照組；Ｓ：吸煙組；Ｍ：吸煙＋褪逡逑黑素組。＊＊ｐ＜０．０１。逡逑１９逡逑

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本文編號(hào)：2801520