【摘要】：研究背景:主動(dòng)脈瓣膜鈣化的病理過程包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,瓣膜間質(zhì)細(xì)胞(VICs)向成骨樣細(xì)胞分化,炎癥和凋亡,但其機(jī)制尚不清楚。HDAC6是HDACⅡb亞族中的一員,在乳腺癌細(xì)胞中抑制HDAC6可觸發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。我們首先發(fā)現(xiàn)在鈣化性主動(dòng)脈瓣膜疾病患者的主動(dòng)脈瓣膜組織中,HDAC6表達(dá)顯著降低。研究已證實(shí)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與主動(dòng)脈瓣膜鈣化的進(jìn)展。因此,該論文旨在闡明HDAC6在主動(dòng)脈瓣膜鈣化中的作用和機(jī)制。方法及結(jié)果:體外應(yīng)用鈣化培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)人主動(dòng)脈瓣膜間質(zhì)細(xì)胞(hVICs),建立主動(dòng)脈瓣膜鈣化的細(xì)胞模型。特異性的HDAC6抑制劑Tubacin(10μM)處理hVICs48h,結(jié)果顯示hVICs的Runx2表達(dá)增加。這一結(jié)果被HDAC6沉默技術(shù)進(jìn)一步證實(shí),即在hVICs中敲低HDAC6顯著增加Runx2的表達(dá)。同時(shí)我們檢測(cè)到Tubacin處理hVICs48h后,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋白(p-IRE1α、p-PERK、p-eif2α、ATF4)表達(dá)增加。應(yīng)用siRNA技術(shù)敲低hVICs的HDAC6后,表現(xiàn)出與Tubacin處理同樣的結(jié)果,即HDAC6沉默后顯著激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。牛磺熊去氧膽酸(TUDCA)在體內(nèi)和體外被證實(shí)是一種經(jīng)典的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑。TUDCA預(yù)處理(100 μM)可以顯著抑制Tubacin處理或HDAC6沉默誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)通路的激活,同時(shí)抑制Runx2的表達(dá)。ATF4是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)通路中重要的成員。敲低ATF4也顯著抑制Tubacin處理或HDAC6沉默誘導(dǎo)的Runx2的表達(dá)。最后,hVICs分別被轉(zhuǎn)染慢病毒HDAC6 shRNA或者對(duì)照組scr shRNA,轉(zhuǎn)染后的hVICs給予TUDCA處理,以無(wú)TUDCA處理組為對(duì)照組,用鈣化誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)14天,每3天更換培養(yǎng)基。茜素紅染色結(jié)果顯示,HDAC6敲低使鈣結(jié)節(jié)形成增加,而TUDCA抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激后鈣結(jié)節(jié)形成減少。結(jié)論:HDAC6降低通過激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的成骨通路促進(jìn)主動(dòng)脈瓣膜鈣化。HDAC6對(duì)主動(dòng)脈瓣膜鈣化有保護(hù)作用,為預(yù)防和治療主動(dòng)脈瓣膜鈣化的提供了可能的新靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R542.52
【圖文】：

為了證實(shí)ＨＤＡＣ６是否參與主動(dòng)脈瓣膜鈣化，我們首先觀察了邋ＣＡＶＤ和正常逡逑人的主動(dòng)脈瓣膜組織中ＨＤＡＣ６的表達(dá)水平。ＶｏｎＫｏｓｓａ染色證實(shí)ＣＡＶＤ的主動(dòng)脈逡逑瓣膜組織中有明顯的鈣沉積（圖４．１邋Ａ）。免疫俎織化學(xué)染色（圖４．１Ｂ）和Ｗｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔ逡逑（圖４．１Ｃ）結(jié)果顯示，ＨＤＡＣ６在鈣化的主動(dòng)脈瓣膜組織中表達(dá)顯著減少。提示逡逑ＨＤＡＣ６可能參與主動(dòng)脈瓣膜的鈣化。逡逑Ａ邐Ｂ邐ｉ５ｉ逡逑Ｎｏｒｍａｌ邐Ｎｏｒｍａｌ邐＝邋＾邋ｉ逡逑＇邐‘邐．．．邐．一．邋Ｃ邋ｃ邋＾逡逑，：翁�。模靛濉鲥澹咤义希掊澹慑濉鲥濉鲥义希Я铄澹�？＇邋00Ｌ邋Ｓａｌ邋Ｓ逡逑＿、邋？邋＊邋＇邋■邋．邐、一邋．邋＊邋ｃ逡逑Ｙ邐５０邋ｕｍ邐？，邐５ｔＴａｍ邋＾邐邐逡逑邐±邐邋．１邐邐ｃ邐ＨＤＡＣ６邋垂懰－？逡逑ＣＡＶＤ邐ＣＡＶＤ邐Ｉ邐－］逡逑．，~枺媯海剩稿義襄五五邋五澹危錚潁恚幔戾澹茫粒鄭膩義賢跡矗卞澹齲模粒茫對(duì)冢茫粒鄭牡鬧鞫靄昴ぷ櫓斜澩錛跎馘義希ǎ粒┱５鬧鞫靄昴ぷ櫓透蘋鬧鞫靄昴ぷ櫓袂釁�，｀嶅P鑠義希桑茫錚螅螅崛舊１壤擼海擔(dān)板澹穡懟＃ǎ攏┱５鬧鞫靄昴ぷ櫓透蘋鬧鞫靄昴ぷ殄義現(xiàn)�，石蜡包埋轻叕，免疫讬┋化学扰f觳猓齲模粒茫�，并使用Ｉｍａ＜傚－Ｐ}镥澹校歟酰筧砑義轄卸糠治觥＃恚茫粒鄭淖楸齲危錚潁恚嶝欏１壤擼海擔(dān)板澹穡懟＃ǎ茫┱５鬧鞫義下靄昴ぷ櫓透蘋鬧鞫靄昴ぷ櫓�，Ｗｅｓｔｅ}鑠澹侖錚簦恚茫粒鄭謀

本文編號(hào)：2798941