【摘要】：目的觀察缺血預(yù)處理(Ischemic Preconditioning,IPC)是否能通過對PERK/Nrf2信號通路的影響,從而保護Wistar大鼠心肌免受缺血再灌注(Ischemia/Reperfusion,I/R)損傷,以及鋅離子是否參與IPC這一保護機制。方法將50只Wistar大鼠,雄性,250-350 g,隨機分成5組(n=10):空白對照組(Control組)、缺血再灌注組(I/R組)、缺血預(yù)處理組(I/R+IPC組)、缺血預(yù)處理和鋅離子螯合劑N,N,N,N-四(2-吡啶甲基)乙二胺(N,N,N,N-tetrakis-(2-pyridylmethyl)ethylenediamine,TPEN)組(I/R+IPC+TPEN組)、缺血再灌注加鋅離子螯合劑TPEN組(I/R+TPEN組)。Control組懸掛心臟后只穿線,不結(jié)扎血管。I/R組懸掛心臟后穩(wěn)定20 min,然后在前降支兩側(cè)穿線,結(jié)扎前降支,缺血30 min,再灌注2 h。I/R+IPC組先進行5 min缺血,5 min再灌注,循環(huán)3次,然后缺血30 min,再灌注2 h。I/R+IPC+TPEN組先給予TPEN,5 min之后IPC,然后進行缺血30 min,再灌注2 h。I/R+TPEN組先給予TPEN,5 min之后進行缺血30 min,再灌注2 h。利用鋅離子濃度檢測試劑盒測定各組大鼠心肌組織內(nèi)鋅離子濃度;應(yīng)用三苯基氯化四唑(Triphenyltetrazolium Chloride,TTC)與伊文斯蘭(Evans Blue)雙染色法檢測各組大鼠心肌梗死面積比;用蘇木素伊紅(hematoxylin and eosin,HE)染色觀察各組大鼠組織形態(tài)學變化;利用蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)檢測各組大鼠心肌中磷酸化蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激酶(Phosphorylated protein kinase-like endoplasmic reticulum kinase,pPERK)和抗氧化應(yīng)激蛋白質(zhì)核因子E2相關(guān)因子2(Nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)表達水平;利用免疫組織化學法(immunochemistry)定性分析pPERK、Nrf2蛋白表達情況;應(yīng)用末端脫氧核苷基轉(zhuǎn)移酶介導的d UTP原位末端標記(Terminal deoxynu-cleotidyl transferase-mediated d UTP nick end labeling,TUNEL)染色法檢測各組大鼠心肌組織凋亡指數(shù)。結(jié)果1鋅離子濃度測定:與Control組相比,I/R組在心肌缺血再灌注后組織內(nèi)鋅離子濃度顯著降低(P0.05)。與I/R組相比,I/R+IPC組組織內(nèi)鋅離子濃度顯著增加(P0.05)。2 TTC與Evans blue雙染:與Control組相比,I/R組心肌梗死面積比顯著增加(P0.05)。與I/R組相比,I/R+IPC組梗死面積比明顯減少(P0.05)。在I/R+IPC+TPEN組,心肌梗死面積比較I/R+IPC組顯著增加(P0.05)。3 HE染色:I/R組較Control組心肌組織出現(xiàn)明顯心肌纖維排列紊亂、斷裂,細胞核溶解,而I/R+IPC組相對于I/R組,心肌組織形態(tài)損害明顯改善,而這種效應(yīng)被TPEN逆轉(zhuǎn)。4 Western blot:與Control組相比,I/R組p-PERK、Nrf2兩種蛋白表達顯著增多(P0.05)。與I/R組相比,I/R+IPC組表達顯著減少(P0.05),加入TPEN后兩種蛋白表達明顯增多(P0.05)。5免疫組織化學:與Control組相比,I/R組心肌細胞中累積光密度(IOD)較高,可見大量棕黃色顆粒。與I/R組相比,I/R+IPC組心肌細胞中累積光密度(IOD)相對較低,棕黃色顆粒顯著減少。而I/R+IPC+TPEN組結(jié)果與I/R+IPC組相反。6 TUNEL法檢測細胞凋亡指數(shù):與Control組相比,I/R組大鼠心肌中的調(diào)亡指數(shù)(AI)顯著增加(35.80±5.310%對5.80±2.864%,P0.05)。而I/R+IPC組中的AI顯著低于I/R組中的AI(16.20±4.817%對35.80±5.310%,P0.05)。I/R+IPC+TPEN組中AI相對于I/R+IPC組明顯升高(32.60±6.025%對16.20±4.817%,P0.05)。結(jié)論1缺血預(yù)處理可能通過抑制PERK/Nrf2通路保護心肌。2缺血預(yù)處理可能通過鋅離子抑制PERK/Nrf2通路,發(fā)揮心肌保護作用。圖 7 幅;表 3 個;參 206 篇。
【學位授予單位】：華北理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R542.2
【圖文】：

I/R 組:缺血再灌注組,I/R+IPC 組:缺血預(yù)處理組。數(shù)據(jù)表圖 1 缺血預(yù)處理對鋅離子濃度變化的影響1 Effect of ischemic preconditioning on zinc ion concen表 1 缺血預(yù)處理對鋅離子濃度變化的影響

I/R 組:缺血再灌注組,I/R+IPC 組:缺血預(yù)處理組,I/R+IPC+TPEN I/R+TPEN 組:缺血再灌注加鋅離子抑制劑 TPEN 組。圖為各組大鼠心肌 3 鋅離子在缺血預(yù)處理保護機制中對大鼠心肌組織形態(tài)學的ffect of zinc on myocardial histomorphology in IPC myocardial p

【參考文獻】

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本文編號：2787022