【摘要】：目的房顫(Atrial fibrillation,AF)是較為普遍的、慢性且持續(xù)性的一類心律失常,具有高發(fā)性和高危性兩大特征,而且從治療和預(yù)后來看,房顫目前的治療仍有一定復(fù)發(fā)率,由房顫引起的腦卒中死亡率高達(dá)25%。研究表明心房顫動(dòng)的發(fā)生發(fā)展機(jī)制主要包括電重構(gòu)和機(jī)械重構(gòu)兩方面,電重構(gòu)一般表現(xiàn)為離子通道的改變,而結(jié)構(gòu)重構(gòu)的突出表現(xiàn)為心肌纖維化。DNA甲基化是指生物體在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的催化作用下將甲基轉(zhuǎn)移到特定堿基上的過程,由此可造成生物體發(fā)生諸如胚胎分化、基因失活,器官衰老等現(xiàn)象。目前有越來越多的文獻(xiàn)研究證明作為DNA甲基轉(zhuǎn)移酶重要成員之一的DNMT3A對(duì)心肌纖維化中心肌成纖維細(xì)胞發(fā)生發(fā)展的水平有重要的影響。micro RNAs(mi RNAs or mi Rs)是一類小片段非編碼RNA,在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)。先前的研究顯示mi R-200b可以通過調(diào)節(jié)相應(yīng)的靶基因參與細(xì)胞增殖、凋亡、癌變、纖維化等病理生理過程。已有文獻(xiàn)研究指出mi R-200b可調(diào)控的DNMT3A表達(dá)影響非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生發(fā)展。但DNMT3A對(duì)心肌纖維化發(fā)生發(fā)展的影響是否也受到mi R-200b的調(diào)控目前還不清楚。因此本研究通過觀察心肌成纖維細(xì)胞中mi R-200b及其潛在的靶基因DNMT3A在心肌纖維化過程中的表達(dá)情況,及其調(diào)控關(guān)系在心肌纖維化過程中的作用,為探尋心肌纖維化提供理論依據(jù)。方法體內(nèi)實(shí)驗(yàn):將60只8周齡雄性SD大鼠隨機(jī)分為模型組及對(duì)照組。模型組的大鼠予以誘導(dǎo)劑ISO 1次/d[5mg/(kg.d)]皮下注射,對(duì)照組給予等劑量的生理鹽水,持續(xù)7d。造模成功后處死動(dòng)物取出心臟標(biāo)本,HE染色法和Masson染色法觀測(cè)各組心臟標(biāo)本中的心肌纖維化程度及膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF);采用免疫組化法檢測(cè)各組大鼠心肌組織Col1A1、α-SMA和DNMT3A表達(dá);q RT-PCR檢測(cè)mi R-200b的表達(dá);Western blot法測(cè)定α-SMA、Col1A1、DNMT3A的表達(dá)。體外實(shí)驗(yàn):培養(yǎng)SD乳大鼠心肌成纖維細(xì)胞。將mi R-200b促進(jìn)劑(mimics)、抑制劑(inhibitors)分別轉(zhuǎn)染于CFs中,并設(shè)立陰性及空白對(duì)照組。采用q RT-PCR檢測(cè)mi R-200b、DNMT3A、Col1A1和α-SMA的RNA水平的表達(dá);采用Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染不同試劑后的CFs中DNMT3A、Col1A1和α-SMA蛋白表達(dá);采用MTT法觀察分別轉(zhuǎn)染后CFs的增殖情況。結(jié)果體內(nèi)實(shí)驗(yàn):兩組對(duì)比,HE染色和Masson染色結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組SD大鼠標(biāo)本間質(zhì)中出現(xiàn)明顯的膠原纖維增生,實(shí)驗(yàn)組心肌間質(zhì)CVF發(fā)生明顯的增加改變。免疫組化結(jié)果顯示與對(duì)照組比較,模型組Col1A1、α-SMA和DNMT3A的蛋白表達(dá)含量明顯升高。q RT-PCR結(jié)果顯示相較于正常組,模型組心臟標(biāo)本提取的總RNA中mi RNA-200b表達(dá)水平明顯下降。Western blot檢測(cè)表明模型組α-SMA、Col1A1、DNMT3A的含量水平明顯高于對(duì)照組。體外實(shí)驗(yàn):q RT-PCR結(jié)果顯示,α-SMA、Col1A1、DNMT3A在mi R-200b促進(jìn)劑組的CFs中表達(dá)均明顯低于正常組及陰性對(duì)照組,而在mi R-200b抑制劑組的CFs中則反之。Western blot結(jié)果顯示,促進(jìn)劑組中DNMT3A、Col1A1、α-SMA蛋白表達(dá)降低,而在抑制劑組表達(dá)上升。MTT結(jié)果表明mi R-200b可抑制CFs生長(zhǎng)。結(jié)論綜上所述,mi R-200b可能是通過抑制DNMT3A,對(duì)CFs甲基化產(chǎn)生影響,控制CFs的活化,降低心肌纖維化水平。而DNMT3A可能是心肌纖維化的表觀遺傳學(xué)治療靶點(diǎn)之一,同時(shí)也為預(yù)防和研究心肌纖維化產(chǎn)生提供新的思路。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R541.75
【圖文】：

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文能發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞有所增生。Masson染色 圖2中與正常組比較，ISO模型組SD大鼠Masson染色可見心肌組織間膠原纖維增多。

圖 1 HE染色A 對(duì)照組 B 實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒MFigure 1 HE stainingA Blank control group B Model group

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文26圖3 免疫組化Figure3 Immumohistochemical Stainingα-SMACol1A1DNMT3AVehicle Modle

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本文編號(hào)：2782975