【摘要】：目的房顫(Atrial fibrillation,AF)是較為普遍的、慢性且持續(xù)性的一類心律失常,具有高發(fā)性和高危性兩大特征,而且從治療和預后來看,房顫目前的治療仍有一定復發(fā)率,由房顫引起的腦卒中死亡率高達25%。研究表明心房顫動的發(fā)生發(fā)展機制主要包括電重構和機械重構兩方面,電重構一般表現(xiàn)為離子通道的改變,而結(jié)構重構的突出表現(xiàn)為心肌纖維化。DNA甲基化是指生物體在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的催化作用下將甲基轉(zhuǎn)移到特定堿基上的過程,由此可造成生物體發(fā)生諸如胚胎分化、基因失活,器官衰老等現(xiàn)象。目前有越來越多的文獻研究證明作為DNA甲基轉(zhuǎn)移酶重要成員之一的DNMT3A對心肌纖維化中心肌成纖維細胞發(fā)生發(fā)展的水平有重要的影響。micro RNAs(mi RNAs or mi Rs)是一類小片段非編碼RNA,在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)靶基因的表達。先前的研究顯示mi R-200b可以通過調(diào)節(jié)相應的靶基因參與細胞增殖、凋亡、癌變、纖維化等病理生理過程。已有文獻研究指出mi R-200b可調(diào)控的DNMT3A表達影響非小細胞肺癌的發(fā)生發(fā)展。但DNMT3A對心肌纖維化發(fā)生發(fā)展的影響是否也受到mi R-200b的調(diào)控目前還不清楚。因此本研究通過觀察心肌成纖維細胞中mi R-200b及其潛在的靶基因DNMT3A在心肌纖維化過程中的表達情況,及其調(diào)控關系在心肌纖維化過程中的作用,為探尋心肌纖維化提供理論依據(jù)。方法體內(nèi)實驗:將60只8周齡雄性SD大鼠隨機分為模型組及對照組。模型組的大鼠予以誘導劑ISO 1次/d[5mg/(kg.d)]皮下注射,對照組給予等劑量的生理鹽水,持續(xù)7d。造模成功后處死動物取出心臟標本,HE染色法和Masson染色法觀測各組心臟標本中的心肌纖維化程度及膠原容積分數(shù)(CVF);采用免疫組化法檢測各組大鼠心肌組織Col1A1、α-SMA和DNMT3A表達;q RT-PCR檢測mi R-200b的表達;Western blot法測定α-SMA、Col1A1、DNMT3A的表達。體外實驗:培養(yǎng)SD乳大鼠心肌成纖維細胞。將mi R-200b促進劑(mimics)、抑制劑(inhibitors)分別轉(zhuǎn)染于CFs中,并設立陰性及空白對照組。采用q RT-PCR檢測mi R-200b、DNMT3A、Col1A1和α-SMA的RNA水平的表達;采用Western blot檢測轉(zhuǎn)染不同試劑后的CFs中DNMT3A、Col1A1和α-SMA蛋白表達;采用MTT法觀察分別轉(zhuǎn)染后CFs的增殖情況。結(jié)果體內(nèi)實驗:兩組對比,HE染色和Masson染色結(jié)果顯示實驗組SD大鼠標本間質(zhì)中出現(xiàn)明顯的膠原纖維增生,實驗組心肌間質(zhì)CVF發(fā)生明顯的增加改變。免疫組化結(jié)果顯示與對照組比較,模型組Col1A1、α-SMA和DNMT3A的蛋白表達含量明顯升高。q RT-PCR結(jié)果顯示相較于正常組,模型組心臟標本提取的總RNA中mi RNA-200b表達水平明顯下降。Western blot檢測表明模型組α-SMA、Col1A1、DNMT3A的含量水平明顯高于對照組。體外實驗:q RT-PCR結(jié)果顯示,α-SMA、Col1A1、DNMT3A在mi R-200b促進劑組的CFs中表達均明顯低于正常組及陰性對照組,而在mi R-200b抑制劑組的CFs中則反之。Western blot結(jié)果顯示,促進劑組中DNMT3A、Col1A1、α-SMA蛋白表達降低,而在抑制劑組表達上升。MTT結(jié)果表明mi R-200b可抑制CFs生長。結(jié)論綜上所述,mi R-200b可能是通過抑制DNMT3A,對CFs甲基化產(chǎn)生影響,控制CFs的活化,降低心肌纖維化水平。而DNMT3A可能是心肌纖維化的表觀遺傳學治療靶點之一,同時也為預防和研究心肌纖維化產(chǎn)生提供新的思路。
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R541.75
【圖文】：

安徽醫(yī)科大學碩士學位論文能發(fā)現(xiàn)成纖維細胞有所增生。Masson染色 圖2中與正常組比較，ISO模型組SD大鼠Masson染色可見心肌組織間膠原纖維增多。

圖 1 HE染色A 對照組 B 實驗模型組Figure 1 HE stainingA Blank control group B Model group

安徽醫(yī)科大學碩士學位論文26圖3 免疫組化Figure3 Immumohistochemical Stainingα-SMACol1A1DNMT3AVehicle Modle

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本文編號：2782975