【摘要】：目的:吸煙是2型糖尿病的危險因素,也是導(dǎo)致心血管疾病的發(fā)生發(fā)展的重要因素。本實驗通過體外研究高糖高脂條件下,尼古丁對H9c2細胞的影響模擬在吸煙人群中,糖尿病患者心肌細胞的損傷模型,進而探討尼古丁引起高糖高脂條件下H9c2細胞的損傷機制,通過檢測ERK信號蛋白明確其對心臟損傷的影響。方法:1.檢測在高糖高脂條件下,尼古丁對細胞凋亡的影響。將H9c2細胞分為:正常對照組,尼古丁組(6×10~(-8)M、6×10~(-7)M、6×10~(-6)M),高糖高脂組(HGHL,葡萄糖33mmol/L+棕櫚酸鈉500μmol/L),尼古丁聯(lián)合高糖高脂組(6×10~(-8)M+HGHL、6×10~(-7)M+HGHL、6×10~(-6)M+HGHL)。尼古丁干預(yù)2 h后,高糖高脂處理24 h,用蛋白免疫印跡方法(Western Blot)來檢測相關(guān)蛋白cleaved caspase-3,cleaved caspase-8,cleaved caspase-9,cleaved caspase-11,cleaved caspase-12的表達情況,采用流式細胞術(shù)檢測H9c2細胞凋亡率。2.檢測尼古丁在高糖高脂條件下對細胞纖維化的影響。本部分實驗分為四組:正常對照組、尼古丁組(NIC,6×10~(-7)M)、高糖高脂組(HGHL)、尼古丁聯(lián)合高糖高脂組(NIC+HGHL)。用Real-Time PCR檢測與H9c2細胞纖維化有關(guān)的MMP2、CollagenⅠ、CollagenⅢ、Smad3、TGF-β等基因的表達。3.檢測ERK家族對H9c2細胞凋亡和纖維化的影響。1)實驗分組為正常對照組、尼古丁組(NIC,1×10~(-7)M、2×10~(-7)M、4×10~(-7)M)、高糖高脂組(HGHL),尼古丁聯(lián)合高糖高脂組(1×10~(-7)M NIC+HGHL、2×10~(-7)M NIC+HGHL、4×10~(-7)M NIC+HGHL)采用Western Blot技術(shù)檢測ERK1/2、ERK3、ERK5的蛋白表達;2)實驗分組為:正常組(CON)、尼古丁組(NIC,1×10~(-7)M)、尼古丁+ERK5抑制劑組(BIX02189+NIC),通過免疫熒光觀察ERK5的核轉(zhuǎn)位情況;3)實驗分為:正常對照組、尼古丁組(NIC,1×10~(-7)M)、高糖高脂組、尼古丁+高糖高脂組、PD98059/BIX0218組、尼古丁+PD98059/BIX02189組、高糖高脂+PD98059/BIX02189組、尼古丁+高糖高脂+PD98059/BIX02189組。采用Western Blot技術(shù)以及PCR來探究ERK1/2抑制劑(PD98059)及ERK5抑制劑(BIX02189)對凋亡及纖維化表達的影響。結(jié)果:1.在高糖高脂條件下,尼古丁增加cleaved caspase-9和cleaved caspase-3的活化及細胞凋亡率,進而促進H9c2細胞凋亡;單純尼古丁增加與焦亡相關(guān)的cleaved caspase-11及與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡相關(guān)的cleaved caspase-12的蛋白表達。與正常對照組相比,cleaved caspase-3、cleaved caspase-8和cleaved caspase-9在高糖高脂以及尼古丁聯(lián)合高糖高脂蛋白表達顯著增加(P0.01),其中,與高糖高脂組相比,6×10~(-6)M尼古丁聯(lián)合高糖高脂cleaved caspase-3、cleaved caspase-9蛋白表達增加顯著(P0.01);細胞凋亡率cleaved caspase-3蛋白表達趨勢相同;而與正常對照組相比,與細胞焦亡相關(guān)的cleaved caspase-11及與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡相關(guān)的cleaved caspase-12尼古丁組蛋白表達顯著升高(P0.01)。2.在高糖高脂條件下,尼古丁增加MMP2、MMP8、IL-6、CollagenⅠ、CollagenⅢ、SMAD3、TGF-β及AKT等基因的表達,進而促進H9c2細胞向肌成纖維細胞轉(zhuǎn)化,導(dǎo)致心肌細胞纖維化。與正常對照組相比,高糖高脂組及尼古丁聯(lián)合高糖高脂組MMP2、MMP8以及IL-6基表達顯著升高(P0.01);CollagenⅠ、CollagenⅢ、Smad3、TGF-β及AKT在尼古丁組及尼古丁聯(lián)合高糖高脂組基因表達升高顯著(P0.01);而MCP-1在尼古丁聯(lián)合高糖高脂組基因表達顯著升高(P0.01)。3.ERK5抑制劑(BIX02189)減少cleaved caspase-9和cleaved caspase-3蛋白表達和與纖維化有關(guān)基因的表達。30min、1h時,pERK5在高糖高脂組、尼古丁聯(lián)合高糖高脂組蛋白表達顯著低于尼古丁組(P0.01),且在30min時,pERK1/2蛋白表達與pERK5的蛋白表達有相同的效應(yīng)(P0.01),提示pERK1/2及pERK5參與在高糖高脂條件下,尼古丁對H9c2細胞的損傷。與高糖高脂組相比,PD98059+高糖高脂及PD98059+尼古丁+高糖高脂cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白表達顯著增加(P0.001);而與高糖高脂組相比,BIX02189+高糖高脂組及BIX02189+尼古丁+高糖高脂組cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白表達顯著降低(P0.001),表明ERK5抑制劑能減少H9c2細胞的凋亡。與高糖高脂組、尼古丁聯(lián)合高糖高脂組相比,BIX02189能顯著降低MMP2、MMP8基因的表達(P0.001)。且與尼古丁組及尼古丁聯(lián)合高糖高脂組相比,BIX02189能顯著降低TGF-β、AKT、CollagenⅠ及CollagenⅢ基因的表達(P0.001);同時PD98059能減少MMP2、MMP8、SMAD3基因的表達(P0.001)。結(jié)論:1.在高糖高脂條件下,尼古丁增加H9c2細胞凋亡,其中,單純尼古丁能引起細胞焦亡及與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有關(guān)凋亡的增加。2.在高糖高脂條件下,尼古丁增加H9c2細胞與纖維化有關(guān)基因表達,進而促進H9c2細胞纖維化。3.在高糖高脂條件下,尼古丁增加ERK家族活化,其中以ERK5尤為顯著,通過抑制ERK5磷酸化入核減少H9c2細胞的凋亡和纖維化。
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R587.2;R54
【圖文】：

11圖 1-1 尼古丁對 H9c2 細胞凋亡率的影響（x± s, n＝3）注：與 CON 組相比 ***P<0.001與 HGHL 組相比##P<0.001

12圖 1-2 尼古丁對 H9c2 細胞凋亡率的影響（x± s, n＝3）注：與 CON 組相比 ***P<0.001與 HGHL 組相比##P<0.001

在高糖高脂條件下，尼古丁對纖維化基因表達的影響（x±s,n＝6）

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 鄧過房;;2016年諾貝爾生理或醫(yī)學獎背景下的細胞死亡方式再認識[J];中學生物學;2017年05期

2 寧旭;于忠鳴;;創(chuàng)造性的自主毀滅——細胞凋亡簡介[J];中學生物學;2006年10期

3 劉春秋;卞茂紅;;藥物致紅細胞凋亡的研究進展[J];臨床輸血與檢驗;2017年04期

4 劉晨;馮雪;;人CXCR4基因?qū)σ认侔㏒W1990細胞凋亡和細胞周期的影響[J];健康之路;2017年06期

5 王方;;過表達TIPE2上調(diào)BID分子促進H446細胞凋亡[J];科學中國人;2017年18期

6 賈寧;孫榮釗;;病毒感染對細胞凋亡的影響及作用機制[J];中國動物檢疫;2012年08期

7 趙君怡;劉偉國;郭秀麗;;一氧化氮與細胞凋亡相關(guān)疾病的關(guān)系及其調(diào)控[J];中國藥學雜志;2010年14期

8 黃小丹;;細胞凋亡與疾病[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2009年05期

9 陳藝娟;鄧甲興;林永利;;中藥影響細胞凋亡的研究進展[J];福建畜牧獸醫(yī);2008年01期

10 劉伍梅;汪銘書;程安春;周毅;劉芳;張平英;李雪梅;陳孝躍;;PRRSV感染Marc-145細胞凋亡的形態(tài)學觀察[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2008年03期

相關(guān)會議論文 前10條

1 李佑生;王文健;劉毅;何春燕;何燕銘;陳偉華;應(yīng)健;;黃芪多糖丹酚酸對高糖誘導(dǎo)的足細胞凋亡的影響[A];中華中醫(yī)藥學會血栓病分會第四次學術(shù)研討會暨廣東省中醫(yī)藥學會血栓病專業(yè)委員會首屆學術(shù)研討會論文集[C];2010年

2 覃玉榮;張志勇;;細胞濃度變化對細胞凋亡率影響及其機理初探[A];全國電磁兼容學術(shù)會議論文集[C];2006年

3 于青;袁偉杰;姚建;;晚期糖基化終末產(chǎn)物引起足細胞凋亡的機制[A];2007年浙滬兩地腎臟病學術(shù)年會資料匯編[C];2007年

4 吳經(jīng)緯;湯長發(fā);;運動中細胞凋亡的線粒體變化特征[A];湖南省生理科學會2006年度學術(shù)年會論文摘要匯編[C];2007年

5 蒲小平;李長齡;屠鵬飛;宋志宏;;中藥肉叢蓉成分抗神經(jīng)細胞凋亡的實驗研究[A];第七屆全國生化藥理學術(shù)討論會論文摘要集[C];2000年

6 符必謙;奚勝艷;王彥暉;;中藥及復(fù)方促腫瘤細胞凋亡的作用及機制[A];第二屆臨床中藥學大會論文集[C];2018年

7 林其誰;;線粒體與細胞凋亡[A];第七屆全國生物膜學術(shù)討論會論文摘要匯編[C];1999年

8 邱潔;高海青;;鋅在細胞凋亡中的作用研究進展[A];山東省微量元素科學研究會第三屆學術(shù)研討會論文匯編[C];2006年

9 寧存德;;細胞凋亡與口腔疾病[A];FDI、CSA臨床口腔進展學術(shù)會議論文匯編[C];1999年

10 華子春;;靶向性誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡藥物研發(fā)[A];全國第十一屆生化與分子藥理學學術(shù)會議論文集[C];2009年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 方方　曹雪琴;吳政星的挑戰(zhàn)與求索[N];科學時報;2011年

2 實習生 劉雨亭;細胞凋亡如何推進？以觸發(fā)波的“名義”[N];科技日報;2018年

3 ;“細胞凋亡療法”正逐步成為治療癌癥的新途徑[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報;2002年

4 記者 何德功;基因變異可能致癲癇[N];新華每日電訊;2004年

5 ;3’取代吲哚類衍生物誘導(dǎo)HL－60細胞凋亡的實驗研究[N];中國醫(yī)藥報;2003年

6 ;As_(2)S_(2)與STI571協(xié)同誘導(dǎo)K562細胞凋亡[N];中國醫(yī)藥報;2003年

7 董學清 吳延華;阿膠抑癌作用顯著[N];中國醫(yī)藥報;2003年

8 高書明;誘導(dǎo)癌細胞凋亡[N];中國醫(yī)藥報;2004年

9 楊堤林;中藥可誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡[N];中國中醫(yī)藥報;2004年

10 記者張建松;治療癌癥新途徑：細胞凋亡療法[N];科技日報;2002年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 林鵬;水貂腸炎病毒NS1非結(jié)構(gòu)蛋白調(diào)控細胞凋亡的分子機制[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2019年

2 馬邦云;升麻鱉甲湯加減方調(diào)控MAPK信號通路誘導(dǎo)AML細胞凋亡的研究[D];南京中醫(yī)藥大學;2019年

3 雋晨霞;LncRNA MALAT1通過對CD80的轉(zhuǎn)錄調(diào)控影響細胞凋亡的機制[D];南京醫(yī)科大學;2019年

4 李玉明;豬繁殖與呼吸綜合征病毒誘導(dǎo)bystander細胞凋亡機制研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2017年

5 魏薇;我國優(yōu)勢基因型弓形蟲蟲株致密顆粒蛋白15誘導(dǎo)人絨毛膜細胞JEG-3凋亡的機制研究[D];安徽醫(yī)科大學;2018年

6 徐祥;Nupr1及C/EBPβ在甲基苯丙胺誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性中的作用[D];南方醫(yī)科大學;2018年

7 沈雯;循環(huán)miRNA參與吸煙所致COPD的作用及機制研究[D];昆明醫(yī)科大學;2018年

8 朱思遠;晚期氧化蛋白產(chǎn)物誘導(dǎo)成骨細胞凋亡的機制研究[D];南方醫(yī)科大學;2018年

9 鄭旭;白藜蘆醇對甲狀腺癌防治作用的實驗研究[D];大連醫(yī)科大學;2018年

10 柏素云;新型吡唑香豆素衍生物和二茂鐵吡唑衍生物對細胞凋亡、自噬和細胞周期的調(diào)節(jié)及機制研究[D];山東大學;2015年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 楊嵐菲;電針對大鼠頸肌慢性損傷模型細胞凋亡的影響[D];福建中醫(yī)藥大學;2019年

2 姚敏鵬;視黃醇結(jié)合蛋白4（RBP4）激活NLRP3炎性小體在促進梗死心肌細胞凋亡中的作用研究[D];南京醫(yī)科大學;2019年

3 武珍;FOXO3a上調(diào)Mxi1-0促進缺氧后內(nèi)皮細胞凋亡[D];南京醫(yī)科大學;2019年

4 羅逸航;大鼠輸尿管不全梗阻對其平滑肌影響的研究[D];遵義醫(yī)科大學;2019年

5 李靜;Tipranavir抗肝癌作用及其相關(guān)機制研究[D];重慶理工大學;2019年

6 姚浩;青蒿琥酯通過PI3K/Akt/mTOR體外誘導(dǎo)H929和U266細胞凋亡及自噬的實驗研究[D];南京中醫(yī)藥大學;2019年

7 崔云霞;不同濃度D-纈氨酸對小鼠成纖維細胞L929增殖和凋亡的影響[D];吉林大學;2019年

8 徐瀅;豬流行性腹瀉病毒引起Vero細胞凋亡的分子機制研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2019年

9 任倩;FTO通過抑制線粒體UPR緩解小鼠脂肪細胞凋亡的作用機制[D];西北農(nóng)林科技大學;2019年

10 王小燕;血管緊張素（1-7）通過下調(diào)JNK/Caspase-3信號通路減少高糖誘導(dǎo)的INS-1細胞凋亡[D];山西醫(yī)科大學;2019年

本文編號：2776799