【摘要】：目的:研究血管緊張素II(Angiotensin II,Ang II)誘導(dǎo)動脈粥樣硬化病變及其機(jī)制,進(jìn)一步探討自噬和脂質(zhì)代謝在Ang II誘導(dǎo)的動脈粥樣硬化病變發(fā)生和發(fā)展中的作用。方法:本研究采用雄性6~8周齡apoE~(-/-)小鼠,通過皮下植入Mini-osmotic Pump慢性灌輸Ang II并配以普通飼料或高脂飼料飼喂八周,建立動脈粥樣硬化模型,同時給予ATI受體阻斷劑(Losartan)、抗氧化劑(Tempol)、NADPH氧化酶抑制劑(Apocynin)、線粒體K_(ATP)通道阻斷劑(5-hydroxy decanoic acid salt,5-HD)和自噬抑制劑(3-methyladenine,3-MA)。定時檢測血壓、體重的變化,通過全自動生化分析儀檢測血清中血脂的變化,并計(jì)算動脈硬化指數(shù)的變化;通過油紅O染色檢測小鼠整體主動脈斑塊面積變化;用實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Quantitative Real-time PCR,Q-PCR)檢測apoE~(-/-)小鼠主動脈中Beclin-1、LC3-II mRNA和肝臟中脂質(zhì)代謝相關(guān)基因乙酰輔酶A羧化酶a(Acetyl COA carboxylase-a,ACCa)、脂肪酸合成酶(Fatty acid synthase,FASN)、載脂蛋白AI(Apolipoprotein AI,apoAI)、肝X受體α(Liver X receptorα,LXR-α)、低密度脂蛋白受體(low-density lipoprotein receptor,LDLR)、B族I型清道夫受體(Scavenger receptor class B type I,SR-BI)mRNA表達(dá)量變化,用蛋白質(zhì)印跡法Western blot方法檢測apoE~(-/-)小鼠主動脈中自噬蛋白LC3、Beclin-1表達(dá)量的變化。結(jié)果:1.油紅O結(jié)果顯示,Ang II慢性灌輸導(dǎo)致主動脈斑塊相對面積增加,而給與ATI受體阻斷劑、抗氧化劑、NADPH氧化酶抑制劑、線粒體K_(ATP)通道阻斷劑抑制主動脈斑塊相對面積的增加。血壓結(jié)果顯示,Ang II慢性灌輸可導(dǎo)致高血壓的發(fā)生,而給予ATI受體阻斷劑,抗氧化劑,NADPH氧化酶抑制劑,線粒體K_(ATP)通道阻斷劑抑制了高血壓的發(fā)生。2.Western blot和Real-time PCR結(jié)果顯示,Ang II慢性灌輸可誘導(dǎo)主動脈中自噬相關(guān)基因Beclin-1,LC3-II mRNA和蛋白表達(dá)量增加,而給予ATI受體阻斷劑、抗氧化劑、NADPH氧化酶抑制劑、線粒體K_(ATP)通道阻斷劑后自噬相關(guān)基因Beclin-1,LC3-II mRNA及蛋白表達(dá)量均減少。另外,給予自噬抑制劑顯著抑制了Ang II慢性灌輸誘導(dǎo)的高血壓的發(fā)生及發(fā)展,動脈粥樣指數(shù)的增加,主動脈斑塊面積的增加及自噬相關(guān)基因Beclin-1,LC3-II mRNA和蛋白表達(dá)量增加。3.血脂四項(xiàng)檢測結(jié)果顯示,Ang II慢性灌輸導(dǎo)致血清中總膽固醇(TC)、總甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL)含量顯著性升高及動脈粥樣硬化指數(shù)增加,而給予ATI受體阻斷劑、抗氧化劑、NADPH氧化酶抑制劑、線粒體K_(ATP)通道阻斷劑和自噬抑制劑顯著抑制了血清中TC、TG和LDL含量的升高和動脈粥樣硬化指數(shù)增加。Real-time PCR結(jié)果顯示,Ang II慢性灌輸導(dǎo)致肝臟中脂肪合成相關(guān)酶乙酰輔酶A羧化酶a(ACCa)、脂肪酸合成酶(FASN)mRNA的表達(dá)量顯著性升高;膽固醇代謝相關(guān)基因LXR-α、LDLR mRNA表達(dá)量顯著性降低,SR-BI mRNA的表達(dá)量顯著性升高。而給予AT1受體阻斷劑、抗氧化劑、NADPH氧化酶抑制劑、線粒體K_(ATP)通道阻斷劑和自噬抑制劑選擇性調(diào)控了Ang II慢性灌輸引起的各脂質(zhì)代謝基因表達(dá)變化。結(jié)論:1.Ang II誘導(dǎo)的動脈粥樣硬化病變由通過AT1受體介導(dǎo)的,氧化應(yīng)激參與了Ang II誘導(dǎo)的動脈粥樣硬化病變,其機(jī)制是激活NADPH氧化酶、開放線粒體K_(ATP)通道。2.Ang II激活的自噬信號通路在動脈粥樣樣硬化病變的發(fā)生及發(fā)展中發(fā)揮重要作用。3.Ang II可引起血脂異常和肝臟參與的脂質(zhì)代謝調(diào)控基因異常表達(dá),而AT1體阻斷劑、抗氧化劑、NADPH氧化酶抑制劑、線粒體K_(ATP)通道阻斷劑和自噬抑制劑可能通過調(diào)控不同的脂質(zhì)代謝基因發(fā)揮各自抗動脈粥樣硬化的作用。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R543.5
【圖文】：

12圖 2.2 . 不同處理組間小鼠血壓和心率的變化Fig 2.2 Change of mice blood pressure and heart rate between differeneatment groups (n=5, # P < 0.05 vs. control; *P < 0.05 vs. high fat; P < 0.05 vs. An

圖 2.3 . 不同處理組間小鼠動脈粥樣硬化斑塊面積變化分析Fig2.3 Changes of Atherosclerotic plaque area between different treatmentgroups (n=5, # P < 0.05 vs. control; *P < 0.05 vs. high fat; P < 0.05 vs. Ang II)2.2.4 Ang II誘導(dǎo)動脈粥樣硬化病變對apoE-/-小鼠動脈硬化指數(shù)的影響

圖 2.4 不同處理組小鼠動脈硬化指數(shù)分析ig2.4 Analysis of mice arteriosclerosis index in different treatment g(n=10, # P < 0.05 vs. control; *P < 0.05 vs. high fat; P < 0.05 vs. Ang II) 討論

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本文編號：2771649