【摘要】：目的:腹主動脈瘤(abdominal aortic aneurysm AAA)是以腹主動脈局部全層永久性擴(kuò)張為特點(diǎn),發(fā)病率與病死率均較高的一種血管疾病,常見于60歲以上老年人。隨著全球老齡化加重,AAA的發(fā)病率在過去30年中提升了7倍,AAA早期并無一些特殊癥狀,隨著瘤體的不斷進(jìn)展,一旦破裂,急診死亡率高達(dá)90%,嚴(yán)重威脅中老年人群身體健康。AAA特征性的病理改變?yōu)楦鞣N炎性細(xì)胞的浸潤、中層平滑肌細(xì)胞的凋亡、血管重塑、金屬蛋白酶類增高以致動脈壁彈性纖維的降解以及膠原纖維的沉積等。其中,炎性細(xì)胞的浸潤為主要特點(diǎn),再此過程中,大量炎癥細(xì)胞浸潤到血管壁中,分泌蛋白水解酶及多種炎癥因子并刺激平滑肌細(xì)胞分泌金屬蛋白酶從而降解彈性纖維。我們蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜結(jié)果顯示,相比于正常的腹主動脈與主動脈粥樣閉塞(aortic atherosclerotic occlusive disease AOD)患者,脂肪增強(qiáng)結(jié)合蛋白1(Adipocyte enhance binding protein 1 AEBP1)在AAA中表達(dá)明顯增高。AEBP1是一種廣泛表達(dá)的蛋白,其高表達(dá)在含細(xì)胞外基質(zhì)較為豐富的組織中,像脂肪組織、大血管壁、皮膚等器官,AEBP1首先證實(shí)作為一種轉(zhuǎn)錄抑制因子抑制脂肪形成過程中的aP2基因活性,隨后被證實(shí)為一種新型促炎因子,參與了巨噬細(xì)胞中膽固醇的外流以及炎癥應(yīng)答,AEBP1通過促進(jìn)NF-κb p65的抑制因子IκBα的磷酸化后泛素化降解而促進(jìn)NF-κB通路激活。傳統(tǒng)的NF-κB通路中,在外界刺激下,IκBα磷酸化后降解,P-p65由細(xì)胞質(zhì)中移位到細(xì)胞核中并與下游靶基因結(jié)合,參與炎癥應(yīng)答及金屬蛋白酶的分泌。NF-κB通路可以促進(jìn)AAA炎性細(xì)胞的浸潤及MMPs的轉(zhuǎn)錄,多個(gè)動物實(shí)驗(yàn)表明,抑制NF-κB的活性可以抑制AAA的發(fā)展。目前,針對無癥狀的小的AAA治療尚缺乏有效的方法,基因治療應(yīng)為主要方法之一,AEBP1與AAA的關(guān)系尚未明確報(bào)道。因此,本研究通過AAA臨床標(biāo)本、AAA動物實(shí)驗(yàn)造模以及體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)明確AEBP1與AAA的確切關(guān)系及其分子機(jī)制,旨在為AAA的發(fā)病機(jī)制提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù),進(jìn)而為AAA的基因治療提供新的治療思路和治療靶點(diǎn)。方法:1.嚴(yán)格按照入選及排除標(biāo)準(zhǔn),選用我院AAA患者,AOD患者以及正常對照(Healthy control HC)人群血清及臨床標(biāo)本,首先對三組臨床標(biāo)本進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜技術(shù)檢測差異表達(dá)的蛋白,隨后進(jìn)行ELISA、Real time PCR、Western Blot免疫印跡、免疫組化以及免疫熒光法檢測AEBP1的表達(dá)情況以及NF-κB通路的激活狀況。2.采用豬胰蛋白酶灌注的方法造AAA模型,并使用腺病毒外膜下注射方式沉默AEBP1基因表達(dá),將55只SD大鼠隨機(jī)分成假手術(shù)組(sham)、單純造模組(control)、造模+無干擾序列腺病毒注射組(control+AV)、造模+AEBP1干擾腺病毒注射組(control+shAEBP1)。檢測造模后動脈直徑、HE、EVG及Masson染色從宏觀到微觀明確造模成功,Western Blot免疫印跡以及免疫熒光法檢測AEBP1的表達(dá)情況、NF-κB通路的激活狀況以及與動脈瘤相關(guān)的炎癥因子TNFα、MCP-1、IL-6和IL-1β和金屬蛋白酶MMP-2和MMP-9表達(dá)情況。3.對人AAA標(biāo)本采用免疫雙熒光共定位實(shí)驗(yàn)明確AEBP1在AAA中表達(dá)位置,依據(jù)結(jié)果采用人源血管平滑肌細(xì)胞(Vascular smooth muscle cell VSMC),慢病毒轉(zhuǎn)染介導(dǎo)AEBP1基因沉默以及過表達(dá),并使用NF-κB通路抑制劑BAY11-7082抑制NF-κB通路活性,將細(xì)胞分為空白組(Blank)、陰性對照組(NC)、AEBP1沉默組(Sh)、AEBP1過表達(dá)組(Over)以及各組添加NF-κB抑制劑組:Blank+BAY組、NC+BAY組、Sh+BAY組、Over+BAY組。Real time PCR及Western Blot免疫印跡法檢測干擾效率,ELISA檢測各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中炎癥因子TNFα、IL-10、IL-6和IL-1β的表達(dá),Western Blot免疫印跡法檢測AEBP1的表達(dá)情況以及NF-κB通路的激活狀況以及與動脈瘤相關(guān)的炎癥因子TNFα、MCP-1、IL-10和IL-1β和金屬蛋白酶MMP-2和MMP-9表達(dá)情況,免疫共沉定實(shí)驗(yàn)明確AEBP1與IκBα在VSMC中結(jié)合狀況。結(jié)果:1.蛋白質(zhì)組學(xué)質(zhì)譜技術(shù)檢測差異表達(dá)蛋白發(fā)現(xiàn)在AAA患者中AEBP1的表達(dá)明顯高于對照組。臨床標(biāo)本Real time PCR、Western Blot免疫印跡以及免疫組化結(jié)果證實(shí)相比于AOD及HC組,AEBP1在AAA患者中mRNA及蛋白的表達(dá)明顯異常增高,臨床血清ELISA實(shí)驗(yàn)同樣證實(shí)AEBP1在AAA患者血清中高表達(dá)。Western Blot及免疫熒光結(jié)果表明,在AAA患者中,NF-κB通路處于異常激活狀態(tài)。2.動物實(shí)驗(yàn):相比于sham組,control組及control+AV組瘤體直徑明顯增寬,炎性細(xì)胞浸潤增多、彈性纖維破壞明顯以及膠原纖維沉積增多,而采用腺病毒沉默AEBP1表達(dá)的control+shAEBP1組則可以明顯減弱這些現(xiàn)象。Western Blot免疫印跡實(shí)驗(yàn)表明,control+shAEBP1組減少了AEBP1及p65的表達(dá),同時(shí)相比于control組及control+AV組,炎癥因子(TNF-α、MCP-1、IL-6、IL-1β)及金屬蛋白酶(MMP-2、MMP-9)表達(dá)也有所下調(diào)。免疫熒光及核蛋白Western Blot顯示,進(jìn)入細(xì)胞核的P-p65的表達(dá)在control+shAEBP1組也相應(yīng)減少。3.免疫雙熒光共定位實(shí)驗(yàn)表明AEBP1與中層血管平滑肌細(xì)胞標(biāo)志SMA共表達(dá)。Real time PCR和Western Blot檢測慢病毒成功介導(dǎo)了AEBP1基因的沉默和過表達(dá)。細(xì)胞培養(yǎng)上清液ELISA檢測炎性因子表明,AEBP1表達(dá)沉默后,可以減少炎性因子(TNFα、MCP-1、IL-10、IL-1β)的釋放,AEBP1過表達(dá)后,可以增加這些炎性因子的表達(dá),而該作用皆可被NF-κB抑制劑BAY11-7082抑制。隨后的Western Blot免疫印跡實(shí)驗(yàn)再次證實(shí),沉默或過表達(dá)AEBP1的表達(dá)可以減少或提高相應(yīng)的炎癥因子(TNF-α、MCP-1、IL-6、IL-1β)及金屬蛋白酶(MMP-2、MMP-9)的表達(dá),核蛋白Western Blot免疫印跡同樣表明,沉默AEBP1后減少P-p65的表達(dá),上述結(jié)果皆可被BAY11-7082抑制,說明AEBP1促進(jìn)炎癥因子及MMPs的釋放依賴于NF-κB通路的激活。免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí),AEBP1與NF-κb通路抑制因子IκBα在VSMC中可以以蛋白-蛋白相結(jié)合而起作用。結(jié)論:本研究證實(shí),AAA患者存在AEBP1的異常增高以及NF-κB通路的異常激活;在動物造模中沉默AEBP1的表達(dá)后,可以延緩AAA的發(fā)展過程以及減少NF-κB通路的異常激活;在VSMC中沉默或者過表達(dá)AEBP1,可以相應(yīng)的減少或增多炎癥因子及金屬蛋白酶的表達(dá),而添加NF-κB通路抑制劑BAY11-7082后可以抑制這些變化,表明AEBP1通過NF-κB通路而促進(jìn)了AAA的發(fā)展過程。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R543.16
【圖文】：

圖 3.2 各組標(biāo)本中 AEBP1、p65、IκBα的蛋白相對表達(dá)量 Western Blot 免疫印跡檢測 AAA 患者，AOD 患者以及 HC 人群中 AEBP蛋白相對表達(dá)；圖 B 半定量分析各組 AEBP1、NF-κB p65 及 IκBα的5，**p < 0.01�；颊呦啾扔趯φ战M人群血清中 AEBP1 表達(dá)增高例 AAA 患者血清、12 例 AOD 患者血清及 38 例 HC 組人群血清表明，相比于 AOD 和 HC 組，AAA 患者血清中 AEBP1 表達(dá)明顯8 vs AOD：0.27±0.32， p＜0.01；vs HC：0.01±0.03， p＜0.01），由于一些人群血清 AEBP1 的表達(dá)量低于試劑盒檢測計(jì)結(jié)果（圖 3.3）。以上研究提示，在血清中，AEBP1 在 AAA

圖 3.3 ELISA 實(shí)驗(yàn)檢測各組血清中 AEBP1 的表達(dá)量AAA患者，AOD患者以及HC人群血清中AEBP1表達(dá)，數(shù)據(jù)采用均相比于對照組人群石蠟切片中 AEBP1 表達(dá)增BP1 在石蠟切片中的表達(dá)狀況，我們對各組標(biāo)本進(jìn)行顯示，相比于 AOD 和 HC 組，在 AAA 組中，AEBP1 陽性陽性區(qū)域�。ˋAA：1.39±0.14 vs AOD：0.84±0.1302， p＜0.01；AOD vs HC，p＜0.01）（圖 3.4）。結(jié)果1 在 AAA 患者中表達(dá)增高。

圖 3.3 ELISA 實(shí)驗(yàn)檢測各組血清中 AEBP1 的表達(dá)量ELISA檢測AAA患者，AOD患者以及HC人群血清中AEBP1表達(dá)，數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差01。 AAA 患者相比于對照組人群石蠟切片中 AEBP1 表達(dá)增高為明確 AEBP1 在石蠟切片中的表達(dá)狀況，我們對各組標(biāo)本進(jìn)行了免疫組化5），結(jié)果顯示，相比于 AOD 和 HC 組，在 AAA 組中，AEBP1 陽性區(qū)域較廣泛強(qiáng)，HC 組陽性區(qū)域�。ˋAA：1.39±0.14 vs AOD：0.84±0.13， p＜0.00.06±0.02， p＜0.01；AOD vs HC，p＜0.01）（圖 3.4）。結(jié)果提示，在中，AEBP1 在 AAA 患者中表達(dá)增高。

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 陳彪;劉遠(yuǎn)文;;腹主動脈瘤的成因研究[J];柳州醫(yī)學(xué);2007年01期

2 高俊;李洋;楊茗蘭;白丹丹;;腹主動脈瘤的癥狀及治療[J];保健文匯;2019年11期

3 樂天洋;;中老年人須謹(jǐn)防腹主動脈瘤[J];心血管病防治知識(科普版);2013年12期

4 張光耀;;改進(jìn)腹主動脈瘤的篩查規(guī)則[J];心血管病防治知識(科普版);2011年02期

5 王深明;崔進(jìn);;我國腹主動脈瘤的治療現(xiàn)狀[J];中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志;2017年01期

6 楊許君;;腹主動脈瘤破裂患者腔內(nèi)治療的護(hù)理探究[J];現(xiàn)代診斷與治療;2016年21期

7 張利;李想;;小腹主動脈瘤研究進(jìn)展[J];腹部外科;2016年03期

8 王聚全;;腹主動脈瘤破裂患者腔內(nèi)治療的護(hù)理探究[J];中國衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)管理;2015年32期

9 王豪夫;;1例腹主動脈瘤破裂合并主動脈腔靜脈瘺腔內(nèi)治療[J];透析與人工器官;2016年02期

10 王雪鋼;白斗;武少輝;張效杰;蔣嵐杉;;血流動力學(xué)不穩(wěn)定的破裂性腹主動脈瘤腔內(nèi)治療3例[J];疑難病雜志;2014年12期

相關(guān)會議論文 前10條

1 張亞星;;基于性別和形態(tài)學(xué)特征的腹主動脈瘤破裂風(fēng)險(xiǎn)評估[A];第十二屆全國生物力學(xué)學(xué)術(shù)會議暨第十四屆全國生物流變學(xué)學(xué)術(shù)會議會議論文摘要匯編[C];2018年

2 秋陽;李治安;孫琳;孟冷;;超聲診斷腹主動脈瘤破裂的臨床應(yīng)用研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國超聲醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

3 張生奕;;腹主動脈瘤破裂1例報(bào)告[A];中華醫(yī)學(xué)會急診醫(yī)學(xué)分會第十三次全國急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會大會論文集[C];2010年

4 郝滬明;;腹主動脈瘤膜支架放置術(shù)后的彩超隨訪掃查[A];中國超聲醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第九屆全國腹部超聲醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

5 楊奇盛;趙剡;王翔;宋小兵;潘正啟;沈俊;;腹主動脈瘤破裂診治體會[A];中華醫(yī)學(xué)會急診醫(yī)學(xué)分會第十六次全國急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文集[C];2013年

6 楊顯紅;;腹主動脈瘤病人的健康教育[A];全國神經(jīng)內(nèi)外科�？谱o(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會議論文匯編[C];2004年

7 潘松齡;;腹主動脈瘤若干問題探討[A];浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會周圍血管疾病專業(yè)委員會第一次學(xué)術(shù)年會暨省級繼續(xù)教育學(xué)習(xí)班資料匯編[C];2005年

8 ;腹主動脈瘤的診斷與急救處理[A];第十一次全國急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中華醫(yī)學(xué)會急診醫(yī)學(xué)分會成立二十周年慶典論文匯編[C];2006年

9 汪翠萍;李志娟;李紅光;;手術(shù)治療腹主動脈瘤36例護(hù)理體會[A];全國外科護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會議論文匯編[C];2008年

10 高祖婕;孫安強(qiáng);;腹主動脈瘤病后破裂風(fēng)險(xiǎn)差異的生物力學(xué)分析[A];第十二屆全國生物力學(xué)學(xué)術(shù)會議暨第十四屆全國生物流變學(xué)學(xué)術(shù)會議會議論文摘要匯編[C];2018年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 特約記者 周厚亮;腹主動脈瘤防治或有新路徑[N];健康報(bào);2019年

2 巫雨玲 鄒爭春 記者 陸成寬;抑制基因缺失增加腹主動脈瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)[N];科技日報(bào);2019年

3 吳巍巍 楊宇 北京清華長庚醫(yī)院;警惕體內(nèi)的定時(shí)炸彈——腹主動脈瘤[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2016年

4 通訊員 胡冰峰;警惕腹主動脈瘤[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2015年

5 通訊員 伍西明 羅聞;3D打印術(shù)輔助 治療腹主動脈瘤[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2014年

6 金啟明;藥物治療不能逆轉(zhuǎn)腹主動脈瘤[N];中國醫(yī)藥報(bào);2013年

7 本報(bào)記者 張磊;80%腹主動脈瘤患者為男性[N];健康報(bào);2013年

8 程智;兇險(xiǎn)的腹主動脈瘤[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2004年

9 記者 朱國旺;腹主動脈瘤一旦發(fā)現(xiàn)應(yīng)立即治療[N];中國醫(yī)藥報(bào);2010年

10 李霽;腹主動脈瘤覆膜支架植入術(shù)在湘獲成功[N];中國醫(yī)藥報(bào);2001年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 任建聰;AEBP1通過NF-κB通路促進(jìn)腹主動脈瘤發(fā)生發(fā)展的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2019年

2 翟茂材;熊果酸對腹主動脈瘤的抑制作用及機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2018年

3 鐘林濤;METTL3調(diào)節(jié)M~6A甲基化修飾介導(dǎo)的前體miR34a加工誘導(dǎo)腹主動脈瘤發(fā)生發(fā)展[D];南方醫(yī)科大學(xué);2019年

4 李俊;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在腹主動脈瘤組織修復(fù)中的作用及機(jī)制研究[D];中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué);2019年

5 韓宗霖;PGE2抑制劑通過miR-29b抑制腹主動脈瘤進(jìn)展的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2018年

6 李君;血脂水平影響腹主動脈瘤發(fā)展及破裂的潛在機(jī)制的探討[D];山東大學(xué);2018年

7 梅志軍;結(jié)構(gòu)-負(fù)荷失衡在腹主動脈瘤形成中的作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2004年

8 陸清聲;腹主動脈瘤形成機(jī)制中血液動力學(xué)作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

9 熊江;壁應(yīng)力分布個(gè)體化預(yù)測腹主動脈瘤破裂的初步研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

10 倪松;Ⅲ型膠原在腹主動脈瘤成因中的作用的初步研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2002年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 胡家新;PM2.5促進(jìn)腹主動脈瘤形成機(jī)制的研究[D];南京大學(xué);2019年

2 陳紅梅;近端狹窄所致血流動力學(xué)改變對兔腹主動脈瘤轉(zhuǎn)歸的影響[D];鄭州大學(xué);2019年

3 王征;乙醛脫氫酶2對腹主動脈瘤發(fā)生發(fā)展的影響及機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2019年

4 薛飛;血管緊張素-（1-7）在腹主動脈瘤發(fā)病中的作用及機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2019年

5 郭素麗;破裂性和完整性腹主動脈瘤腔內(nèi)血栓影像學(xué)因素的差異性分析[D];吉林大學(xué);2019年

6 孫一力;LncRNA H19通過充當(dāng)內(nèi)源競爭性RNA促進(jìn)白介素-6介導(dǎo)的血管炎癥和腹主動脈瘤形成[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

7 羅寬;常溫體外循環(huán)在復(fù)雜腹主動脈瘤治療中的應(yīng)用[D];吉林大學(xué);2018年

8 蔣珊珊;血糖、血脂對腹主動脈瘤腔內(nèi)血栓的影響[D];中國醫(yī)科大學(xué);2018年

9 牛浩;高齡腹主動脈瘤患者的臨床診治特點(diǎn)及預(yù)后分析[D];中國醫(yī)科大學(xué);2018年

10 趙理杰;多酚酸類似物對腹主動脈瘤的治療作用及初步藥代動力學(xué)研究[D];安徽中醫(yī)藥大學(xué);2018年

本文編號：2767626