【摘要】：研究目的:本課題通過定量檢測急性心肌梗死患者(實驗組)和參加健康體檢的心電圖正常、無心血管疾病的健康人(對照組)血清自噬相關(guān)基因-7(ATG-7)的蛋白表達(dá),并比較血清ATG-7蛋白表達(dá)在兩組中的差異,分析血清ATG-7蛋白表達(dá)量與急性心肌梗死患者的相關(guān)性。采用Philips HD11XE彩色多普勒超聲診斷儀行心臟多普勒超聲檢查,測量左室舒張末期內(nèi)徑(Left Ventricular End Diastolic Diameter,LVEDD)和左心室射血分?jǐn)?shù)(Left Ventricular Ejection Fraction,LVEF),探討血清ATG-7蛋白表達(dá)在急性心肌梗死患者臨床診斷中的應(yīng)用價值,及血清ATG-7蛋白表達(dá)與急性心肌梗死患者LVEDD和LVEF的關(guān)系。研究方法:選取2016年12月至2017年12月青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心內(nèi)科診斷并住院治療的急性心肌梗死患者50例作實驗組,并同期選取青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院健康體檢中心50例參加健康體檢的心電圖正常、無心血管疾病的健康人作為對照組。所有入選患者基線資料采集,包括包括姓名、性別、年齡、發(fā)病時間、吸煙史、家族史、血常規(guī)、凝血功能、血糖血脂、肝腎功及心電圖、冠狀動脈造影結(jié)果,所有入選患者均在D動SA局麻下經(jīng)橈脈或股動脈路徑行冠狀動脈造影術(shù)明確診斷,根據(jù)冠狀動脈造影結(jié)果行PCI術(shù)。所有入選患者采用Philips HD11XE彩色多普勒超聲診斷儀行心臟多普勒超聲檢查診斷,測量左室舒張末期內(nèi)徑和左心室射血分?jǐn)?shù)。測量3次,取平均值�；颊呷朐汉笤谛泄诿}造影術(shù)前抽取靜脈血檢測ATG-7蛋白含量,所有數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS22.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計量資料采用均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,符合正態(tài)分布及方差齊性的組間計量資料比較采用t檢驗,不符合正態(tài)分布和/或方差齊性采用非參數(shù)檢驗。計數(shù)資料采用百分?jǐn)?shù)(%)表示;組間計數(shù)資料采用x2檢驗。相關(guān)分析采用Pearson直線相關(guān)分析(r)表示。以P0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。研究結(jié)果:(1)兩組受試者的性別、年齡、體重指數(shù)、高血壓病史、糖尿病史差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),而實驗組受試者的血脂異常病史比例顯著高于對照組(P0.05),實驗組受試者的血清ATG-7蛋白、LVEDD較對照組顯著升高,而LVEF較對照組受試者顯著降低(P0.05);(2)ST段抬高型心肌梗死患者(STEMI)和非ST段抬高心肌梗死患者(NSTEMI)血清ATG-7水平和心功能指標(biāo)LVEDD、LVEF差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);(3)不同Killip分級(用于在AMI急性心梗所致的心力衰竭的臨床分級)患者血清ATG-7蛋白表達(dá)水平和心功能指標(biāo)LVEDD、LVEF差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),血清ATG-7蛋白表達(dá)水平隨著Killip分級升高而顯著升高(P0.05),LVEDD隨著Killip分級升高而顯著增大(P0.05),LVEF隨著NYHA分級升高而顯著減小(P0.05);(4)相關(guān)性分析結(jié)果顯示,血清ATG-7蛋白表達(dá)水平與LVEDD呈正相關(guān)(P0.05),而與LVEF呈負(fù)相關(guān)(P0.05)。研究結(jié)論:(1)實驗結(jié)果表明,急性心肌梗死患者組血清ATG-7蛋白水平較健康受試組顯著升高,說明ATG-7蛋白是一種潛在的急性心肌梗死臨床診斷的標(biāo)志物。但STEMI和NSTEMI患者之間ATG-7蛋白表達(dá)水平無顯著差別,說明患者血清中的ATG-7蛋白無法用來區(qū)分STEMI和NSTEMI。(2)急性心肌梗死患者心功能Killip分級不同,血清ATG-7蛋白水平也顯著不同,隨著Killip分級升高而血清ATG-7水平也顯著上升,說明ATG-7蛋白是一種臨床上區(qū)分Killip分級的潛在蛋白標(biāo)志物。(3)急性心肌梗死患者中血清ATG-7蛋白水平與LVEDD呈正相關(guān),而與LVEF呈負(fù)相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R542.22
【圖文】：

圖 1 細(xì)胞自噬的原理自噬相關(guān)基因（Autophagy-Related Gene, ATG）即調(diào)控自噬的基因，目前在菌種的研究中已發(fā)現(xiàn)了 32 種自噬相關(guān)基因，所有真核生物體內(nèi)包括所有哺乳動內(nèi)均發(fā)現(xiàn)有自噬，其自噬相關(guān)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)相似，僅命名有所不同[17-20]。目前，ATG 基因被發(fā)現(xiàn)參與自噬體形成[21]。我們假設(shè) ATG-7 可能是激活基礎(chǔ)自噬功能在靶點(diǎn)。ATG-7 在自噬體（autophagosome）生物合成過程中發(fā)揮了雙重作用。面，做為 E1 樣連接酶（E1-like ligase），ATG-7 可以與 ATG-5 和 ATG-12 結(jié)合是自噬體形成的關(guān)鍵步驟[22-26]。另一方面，通過添加一個磷脂酰乙醇胺（phosphatidylethanolamine group），ATG-7 將 ATG-8（LC3）從一個不成熟的胞式轉(zhuǎn)化為成熟的自噬體膜蛋白[27-30]�；蚯贸� ATG-7 引起自噬缺失，說明 AT自噬功能的關(guān)鍵因子[31-33]。本研究通過定量檢測 AMI 病人血清 ATG-7 的表達(dá)水平，進(jìn)一步探討自噬在中的作用，從而為 AMI臨床診斷提供另一種線索和依據(jù)。

圖 1.1 血清 ATG-7 蛋白（Target Protein）表達(dá)水平檢測流程具體的 ELISA 方法如圖 1.1 所示，把純化的 ATG-7 抗體包被于酶標(biāo)板制成固抗體，依次加入處理后的病人血清或 ATG-7 蛋白抗原，然后洗去載體上游離成分加入過氧化物酶標(biāo)記（Horseradish Peroxidase，HRP）和生物素化的特異性抗原抗的親和素，制備抗體原- 抗體 - 酶標(biāo)抗體復(fù)合物，洗滌后，加入四甲基聯(lián)苯（Tetramethylbenzidine，TMB）顯色。TMB 與 HRP 發(fā)生反應(yīng)，使顯色劑由無色變色，加終止液后最終變?yōu)辄S色。溶液的顏色和樣品中 ATG-7 蛋白濃度呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀讀取樣品在 450 nm 波長下所測定的各溶液的吸光度，通過利用 ATG-7 蛋標(biāo)準(zhǔn)樣品構(gòu)建的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算病人血清 ATG-7 蛋白的濃度。

圖 1.1 血清 ATG-7 蛋白（Target Protein）表達(dá)水平檢測流程具體的 ELISA 方法如圖 1.1 所示，把純化的 ATG-7 抗體包被于酶標(biāo)板制成固相抗體，依次加入處理后的病人血清或 ATG-7 蛋白抗原，然后洗去載體上游離成分，加入過氧化物酶標(biāo)記（Horseradish Peroxidase，HRP）和生物素化的特異性抗原抗體的親和素，制備抗體原- 抗體 - 酶標(biāo)抗體復(fù)合物，洗滌后，加入四甲基聯(lián)苯胺（Tetramethylbenzidine，TMB）顯色。TMB 與 HRP 發(fā)生反應(yīng)，使顯色劑由無色變藍(lán)色，加終止液后最終變?yōu)辄S色。溶液的顏色和樣品中 ATG-7 蛋白濃度呈正相關(guān)。應(yīng)用酶標(biāo)儀讀取樣品在 450 nm 波長下所測定的各溶液的吸光度，通過利用 ATG-7 蛋白標(biāo)準(zhǔn)樣品構(gòu)建的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算病人血清 ATG-7 蛋白的濃度。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

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本文編號：2767598