微小RNA-499抑制快速起搏致心力衰竭大鼠的心肌細胞凋亡

發(fā)布時間：2020-07-23 10:55

【摘要】：目的:右心室快速起搏是研究充血性心力衰竭(心衰)機制的經(jīng)典方法,目前用于制作此類模型的多為較大動物的心衰模型。心肌細胞的凋亡是心力衰竭(心衰)的重要原因。本實驗旨在建立快速起搏致心衰大鼠模型及探究微小RNA-499(Micro-RNA 499,MiR-499)在非缺血性心衰中對心肌細胞凋亡的影響。方法:(1).建立快速起搏致心衰大鼠模型:將30只290-310g雄性健康SD大鼠隨機分為3組,分別為正常對照組、假手術組和起搏組。正常對照組常規(guī)飼養(yǎng);假手術及起搏組行起搏器及電極植入術,然后假手術組常規(guī)飼養(yǎng);起搏組以550次/分持續(xù)快速心室起搏4周。起搏4周后觀察實驗動物的一般情況,測量大鼠自主心率、體重、心臟質量,超聲診斷儀檢測動物模型心功能,包括左室射血分數(shù)(LVEF)、左室短軸縮短率(LVFS)、左心室收縮末期壓(LVESP)及左心室舒張末期壓(LVEDP)等。(2)構建miR-499腺相關病毒(adeno-associatedvirus,AAV)載體,將后者轉染入大鼠體內(nèi),通過定量逆轉錄聚合酶鏈反應(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)使miR-499在大鼠體內(nèi)的表達上調(diào),選擇40只290-310g雄性健康SD大鼠隨機分為4組:1.假手術,2.假手術+miR-499組,3.起搏+空載體組,4.起搏+MiR-499組。假手術組及起搏組大鼠均行起搏器及電極植入術(步驟同前),其中上調(diào)MiR-499的組別(第2、4組)大鼠在右心室心尖部縫合電極后,于左心腔內(nèi)注射滴度為1×1012vg/mL病毒200μL,同時夾閉主動脈10秒鐘。使病毒在心臟收縮的基礎上經(jīng)冠狀動脈均勻轉染至心肌組織,余操作同前。起搏組(3、4組)術后5天開始間斷打開起搏器開關,術后7天開始以550次/分頻次快速持續(xù)起搏4周,假手術組(1、2組)不進行起搏處理。用qRT-PCR檢測大鼠體內(nèi)miR-499的表達水平,用蛋白質印跡法檢測大鼠心衰模型中PDCD4和PACS2的含量,用免疫組化及TUNEL法檢測心肌細胞凋亡程度。結果:(1)本實驗建立的心衰動物模型均出現(xiàn)活動能力下降、食欲減退、呼吸急促等表現(xiàn)。正常對照組與起搏組相比LVEF分別為83.3%和64.3%(P0.01),LVFS分別為 46.5%和 29.1%(P0.01),LVEDP 分別為 2.4mmHg 和 34.8mmHg(P0.01),自主心率分別377.3次/分和411.6次/分(P0.05),體重分別為502.1g和410.1g(P0.05),心臟質量分別為1.18g和1.64g(P0.01)。(2)快速起搏致心衰大鼠模型及rno-miR-499腺相關病毒載體及空載體構建成功,將后者轉染入大鼠體內(nèi)后模型體內(nèi)miR-499表達上調(diào)。結果表明MiR-499的過表達可使大鼠心衰模型心肌組織中PDCD4和PACS2的表達明顯降低(P0.01)。HE染色可見心臟結構重構程度減輕,TUNEL法檢測心肌細胞組織凋亡程度減小(P0.01)。同時,快速起搏可致大鼠心臟出現(xiàn)結構重構,心肌組織的凋亡程度增加,但MiR-499的過表達則使其程度減小。結論:(1)本實驗成功建立快速起搏致心衰大鼠模型。這種疾病模型可較好的模擬人類慢性心衰機制、心臟結構、血流動力學和一般情況的改變。(2)上調(diào)miR-499可降低PDCD4和PACS2的表達,抑制快速起搏所致心衰大鼠心肌細胞的凋亡。
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R541.6
【圖文】：

示意圖,電極植入,起搏器,大鼠

圖１邋ＳＤ大鼠起搏器及電極植入過程示意圖逡逑６．術后處理：術后３天在大鼠胸腹部放置防咬圈，斷裂，隔日拆卸防咬圈觀察；假手術組和起搏組術后每７天；起搏組于術后５天開始間斷打開起搏器開關起搏快速起搏（起搏頻率為５５０次／分），持續(xù)起搏４周。逡逑７．術后觀察：逡逑１）觀察各組飲食、睡眠、活動、毛發(fā)色澤、體重等２）心臟超聲檢查：停止起搏后，３％戊巴比妥鈉４０ｍｇ／ｐｅｒｍｉｎｕｔｅ，ｂｐｍ），用超聲心動儀測定左室射血分數(shù)（Ｌ（ＬＶＦＳ，％）。逡逑３）采用多道生理信號采集處理系統(tǒng)檢測：麻醉下經(jīng)

對比圖,起搏,放大倍數(shù),對比圖