【摘要】：目的:目前阿米替林等抗抑郁藥對心肌細(xì)胞鈉通道的急性阻滯效應(yīng)已有報(bào)道,但不能解釋臨床上常見的長期用藥引發(fā)Brugada綜合征等室性心律失常的現(xiàn)象,因此該研究通過比較阿米替林的急性效應(yīng)和慢性效應(yīng)對心室肌細(xì)胞鈉通道分布及門控特性的差異,對藥物誘發(fā)Brugada綜合征的可能機(jī)制進(jìn)行探討。方法:以S.D.大鼠為研究對象,將大鼠隨機(jī)分為1d給藥組、7d給藥組和對照組,比較阿米替林給藥1d所致急性效應(yīng)和給藥7d所致慢性效應(yīng)對心室肌細(xì)胞Nav1.5的影響:在動(dòng)物水平觀察不同用藥時(shí)間對大鼠ECG的影響;在細(xì)胞水平,通過全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)觀察峰鈉電流密度、穩(wěn)態(tài)激活曲線、穩(wěn)態(tài)失活曲線、失活后恢復(fù)曲線等鈉通道門控特性,通過貼附式膜片鉗技術(shù)分別觀察閏盤和側(cè)膜部位鈉電流密度、穩(wěn)態(tài)激活曲線、穩(wěn)態(tài)失活曲線、失活后恢復(fù)曲線等鈉通道門控特性,比較二者差異;通過蛋白免疫印跡技術(shù)分析細(xì)胞膜Nav1.5蛋白表達(dá)量的差異;通過共聚焦顯微鏡觀察Nav1.5在心室肌細(xì)胞的分布情況。結(jié)果:(1)阿米替林1d給藥組大鼠ECG的ST段部分升高,比例約占60%,7d給藥組中ST段升高的比例有所增加80%,且升高幅度較1d給藥組明顯(0.3±0.07 m V vs 0.1±0.09 m V,P0.05)。(2)利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)可知:阿米替林1d給藥組的峰鈉電流密度較對照組降低(-21.21±0.35 p A/p F vs-30.24±2.62 p A/p F,P0.01),幅度約為23%,7d給藥組的峰鈉電流密度較對照組降低(-14.63±0.75 p A/p F vs-30.24±2.62 p A/p F,P0.01),幅度約為54%;1d給藥組的τ由92.68±34.48 ms延長至135.56±6.87 ms(P0.05),7d給藥組的τ由92.68±34.48 ms延長至137.63±9.32ms(P0.05),但1d給藥方式與7d給藥方式對鈉通道失活后恢復(fù)曲線的改變程度無明顯差異。(3)在側(cè)膜處,7d給藥組下降幅度(-259.53±7.34 p A vs-128.76±8.52 p A,P0.05)大于1d給藥組(-259.53±7.34 p A vs-166.76±7.24 p A,P0.05),在閏盤處,7d給藥組下降幅度(-666.34±15.85 p A vs-286.35±9.33 p A,P0.05)大于1d給藥組(-666.34±15.85 p A vs-456.13±10.65 p A,P0.05),提示在閏盤和側(cè)模處7d給藥組使鈉電流下降更為明顯;在側(cè)膜處的鈉通道失活后恢復(fù)曲線中,7d給藥組中通道恢復(fù)時(shí)間常數(shù)(τ)(230.43±8.98 ms vs 320.13±38.22 ms,P0.05)延長程度與1d給藥組(230.43±8.98 ms vs 324.47±20.67 ms,P0.05)相似,在閏盤處,7d給藥組中通道恢復(fù)時(shí)間常數(shù)(τ)(210.57±26.58 ms vs 352.50±42.32 ms,P0.05)延長程度與1d給藥組(210.57±26.58 ms vs 357.34±39.69 ms,P0.05)相似,兩種給藥方式使閏盤和側(cè)膜處鈉通道失活后恢復(fù)時(shí)間均延長更顯著。(4)阿米替林兩種給藥方式使膜通道表達(dá)量均降低(1d:1.04±0.07 vs.0.73±0.07,P0.05;7d:1.04±0.07 vs0.544±0.08,P0.05),7d給藥組更明顯。(5)與阿米替林1d給藥組相比,7d給藥組細(xì)胞側(cè)膜和閏盤部位紅色熒光密度下降更明顯,胞質(zhì)內(nèi)有顆粒狀或小片狀的熒光顆粒。結(jié)論:(1)阿米替林短期用藥(1d)的急性效應(yīng)和長期用藥(7d)的慢性效應(yīng)對大鼠心室肌細(xì)胞鈉通道的均有阻滯效應(yīng),且長期用藥的慢性效應(yīng)更為顯著。(2)阿米替林的急性效應(yīng)和慢性效應(yīng)對Nav1.5門控特性作用相似,主要表現(xiàn)在通道失活后恢復(fù)時(shí)間延長,但穩(wěn)態(tài)激活和穩(wěn)態(tài)失活曲線沒有顯著變化。(3)與阿米替林的急性效應(yīng)相比,慢性效應(yīng)導(dǎo)致細(xì)胞膜Nav1.5蛋白表達(dá)減少更顯著,但二者對于鈉通道門控特性影響相似,因此考慮阿米替林可能通過影響鈉通道向細(xì)胞膜的遷移過程,為解決藥物引發(fā)Br S提供一種新思路。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R54
【圖文】：

義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文 尹元立2 結(jié)果2.1 阿米替林對大鼠 ECG 的影響因臨床上可見阿米替林引發(fā) BrS，心電圖有典型“三聯(lián)征”表現(xiàn)：右胸導(dǎo)聯(lián)1~V3 的 ST 段呈下斜型或馬鞍型抬高，伴有或不伴有右束支阻滯、T 波倒置等。部分主要觀察 S.D.大鼠服用阿米替林后的心電圖變化。與對照組相比，1d 給藥組鼠 ECG 的 ST 段部分升高，比例約占 60%（n=10），未檢測到室性心律失常，7藥組中 ST 段升高的比例有所增加 80%（n=10），且升高幅度較 1d 給藥組明顯0.3 ±0.07 mV vs 0.1±0.09 mV，P < 0.05），見圖 1。

圖 2. 不同給藥時(shí)間對大鼠心室肌細(xì)胞峰鈉電流的影響圖 3 所示，鉗制電壓為-120 mV，當(dāng)電壓升至-70 mV 時(shí)開始出現(xiàn)鈉電明鈉通道開始激活，之后迅速上升并在-40 mV 左右達(dá)到峰值，1d 給藥7d 給藥組與對照組之間 I-V 曲線形狀及峰值位置無明顯差異。但 1d 給組的峰鈉電流在（-60 mV~0 mV）電壓范圍內(nèi)，均較對照組有明顯降替林的作用存在一定的電壓依賴性特征。-15-10-505ak(pA/pF)

圖 7. 不同給藥時(shí)間對大鼠心室肌細(xì)胞閏盤和側(cè)膜峰鈉電流的影響如圖 8 所示，當(dāng)電壓升至-70 mV 時(shí)開始出現(xiàn)鈉電流內(nèi)流，表明鈉通道開始激活，之后迅速上升并在-40 mV 左右達(dá)到峰值，在大鼠心室肌細(xì)胞側(cè)膜和閏盤處，1d給藥組與對照組、7d 給藥組與對照組之間 I-V 曲線形狀及峰值位置均無明顯差異。但 1d 給藥組、7d 給藥組的峰鈉電流在（-60 mV~0 mV）電壓范圍內(nèi)，均較對照組有明顯降低，說明阿米替林的作用存在一定的電壓依賴性特征。

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本文編號：2767182