【摘要】：目的:目前阿米替林等抗抑郁藥對心肌細胞鈉通道的急性阻滯效應已有報道,但不能解釋臨床上常見的長期用藥引發(fā)Brugada綜合征等室性心律失常的現象,因此該研究通過比較阿米替林的急性效應和慢性效應對心室肌細胞鈉通道分布及門控特性的差異,對藥物誘發(fā)Brugada綜合征的可能機制進行探討。方法:以S.D.大鼠為研究對象,將大鼠隨機分為1d給藥組、7d給藥組和對照組,比較阿米替林給藥1d所致急性效應和給藥7d所致慢性效應對心室肌細胞Nav1.5的影響:在動物水平觀察不同用藥時間對大鼠ECG的影響;在細胞水平,通過全細胞膜片鉗技術觀察峰鈉電流密度、穩(wěn)態(tài)激活曲線、穩(wěn)態(tài)失活曲線、失活后恢復曲線等鈉通道門控特性,通過貼附式膜片鉗技術分別觀察閏盤和側膜部位鈉電流密度、穩(wěn)態(tài)激活曲線、穩(wěn)態(tài)失活曲線、失活后恢復曲線等鈉通道門控特性,比較二者差異;通過蛋白免疫印跡技術分析細胞膜Nav1.5蛋白表達量的差異;通過共聚焦顯微鏡觀察Nav1.5在心室肌細胞的分布情況。結果:(1)阿米替林1d給藥組大鼠ECG的ST段部分升高,比例約占60%,7d給藥組中ST段升高的比例有所增加80%,且升高幅度較1d給藥組明顯(0.3±0.07 m V vs 0.1±0.09 m V,P0.05)。(2)利用全細胞膜片鉗技術可知:阿米替林1d給藥組的峰鈉電流密度較對照組降低(-21.21±0.35 p A/p F vs-30.24±2.62 p A/p F,P0.01),幅度約為23%,7d給藥組的峰鈉電流密度較對照組降低(-14.63±0.75 p A/p F vs-30.24±2.62 p A/p F,P0.01),幅度約為54%;1d給藥組的τ由92.68±34.48 ms延長至135.56±6.87 ms(P0.05),7d給藥組的τ由92.68±34.48 ms延長至137.63±9.32ms(P0.05),但1d給藥方式與7d給藥方式對鈉通道失活后恢復曲線的改變程度無明顯差異。(3)在側膜處,7d給藥組下降幅度(-259.53±7.34 p A vs-128.76±8.52 p A,P0.05)大于1d給藥組(-259.53±7.34 p A vs-166.76±7.24 p A,P0.05),在閏盤處,7d給藥組下降幅度(-666.34±15.85 p A vs-286.35±9.33 p A,P0.05)大于1d給藥組(-666.34±15.85 p A vs-456.13±10.65 p A,P0.05),提示在閏盤和側模處7d給藥組使鈉電流下降更為明顯;在側膜處的鈉通道失活后恢復曲線中,7d給藥組中通道恢復時間常數(τ)(230.43±8.98 ms vs 320.13±38.22 ms,P0.05)延長程度與1d給藥組(230.43±8.98 ms vs 324.47±20.67 ms,P0.05)相似,在閏盤處,7d給藥組中通道恢復時間常數(τ)(210.57±26.58 ms vs 352.50±42.32 ms,P0.05)延長程度與1d給藥組(210.57±26.58 ms vs 357.34±39.69 ms,P0.05)相似,兩種給藥方式使閏盤和側膜處鈉通道失活后恢復時間均延長更顯著。(4)阿米替林兩種給藥方式使膜通道表達量均降低(1d:1.04±0.07 vs.0.73±0.07,P0.05;7d:1.04±0.07 vs0.544±0.08,P0.05),7d給藥組更明顯。(5)與阿米替林1d給藥組相比,7d給藥組細胞側膜和閏盤部位紅色熒光密度下降更明顯,胞質內有顆粒狀或小片狀的熒光顆粒。結論:(1)阿米替林短期用藥(1d)的急性效應和長期用藥(7d)的慢性效應對大鼠心室肌細胞鈉通道的均有阻滯效應,且長期用藥的慢性效應更為顯著。(2)阿米替林的急性效應和慢性效應對Nav1.5門控特性作用相似,主要表現在通道失活后恢復時間延長,但穩(wěn)態(tài)激活和穩(wěn)態(tài)失活曲線沒有顯著變化。(3)與阿米替林的急性效應相比,慢性效應導致細胞膜Nav1.5蛋白表達減少更顯著,但二者對于鈉通道門控特性影響相似,因此考慮阿米替林可能通過影響鈉通道向細胞膜的遷移過程,為解決藥物引發(fā)Br S提供一種新思路。
【學位授予單位】：遵義醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R54
【圖文】：

義醫(yī)學院碩士學位論文 尹元立2 結果2.1 阿米替林對大鼠 ECG 的影響因臨床上可見阿米替林引發(fā) BrS，心電圖有典型“三聯(lián)征”表現：右胸導聯(lián)1~V3 的 ST 段呈下斜型或馬鞍型抬高，伴有或不伴有右束支阻滯、T 波倒置等。部分主要觀察 S.D.大鼠服用阿米替林后的心電圖變化。與對照組相比，1d 給藥組鼠 ECG 的 ST 段部分升高，比例約占 60%（n=10），未檢測到室性心律失常，7藥組中 ST 段升高的比例有所增加 80%（n=10），且升高幅度較 1d 給藥組明顯0.3 ±0.07 mV vs 0.1±0.09 mV，P < 0.05），見圖 1。

圖 2. 不同給藥時間對大鼠心室肌細胞峰鈉電流的影響圖 3 所示，鉗制電壓為-120 mV，當電壓升至-70 mV 時開始出現鈉電明鈉通道開始激活，之后迅速上升并在-40 mV 左右達到峰值，1d 給藥7d 給藥組與對照組之間 I-V 曲線形狀及峰值位置無明顯差異。但 1d 給組的峰鈉電流在（-60 mV~0 mV）電壓范圍內，均較對照組有明顯降替林的作用存在一定的電壓依賴性特征。-15-10-505ak(pA/pF)

圖 7. 不同給藥時間對大鼠心室肌細胞閏盤和側膜峰鈉電流的影響如圖 8 所示，當電壓升至-70 mV 時開始出現鈉電流內流，表明鈉通道開始激活，之后迅速上升并在-40 mV 左右達到峰值，在大鼠心室肌細胞側膜和閏盤處，1d給藥組與對照組、7d 給藥組與對照組之間 I-V 曲線形狀及峰值位置均無明顯差異。但 1d 給藥組、7d 給藥組的峰鈉電流在（-60 mV~0 mV）電壓范圍內，均較對照組有明顯降低，說明阿米替林的作用存在一定的電壓依賴性特征。

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本文編號：2767182