【摘要】：【目的】探討胰高血糖素樣肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)對主動脈瓣間質(zhì)細胞(valvular interstitial cells,VICs)表型轉(zhuǎn)化的影響,提示GLP-1在鈣化性主動脈瓣疾病(Calcific Aortic Valve Disease,CAVD)所起的保護性作用。【方法】膠原酶消化法分離并培養(yǎng)豬主動脈瓣膜間質(zhì)細胞,用高鈣(2.8mmol/L),高磷(2.0mmol/L)法刺激建立主動脈瓣間質(zhì)細胞鈣化模型。采用不同濃度的GLP-1分別刺激24h(GLP-1含量分別為0ng/ml、25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、400ng/ml),通過檢測細胞裂解液中鈣離子濃度確定最佳濃度。用最佳刺激濃度刺激細胞12h、24h、48h、72h,同樣通過檢測細胞裂解液中鈣離子濃度確定最佳干預(yù)時間。我們采取最佳的刺激濃度刺激細胞達到最佳干預(yù)時間,提取RNA及蛋白,通過RT-PCR以及Western blot分別測定骨化相關(guān)指標骨橋蛋白(OPN),Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2(Runx-2)的表達情況以及相關(guān)信號通路蛋白p65,p38,ERK,JNK的表達情況。【結(jié)果】GLP-1作用導(dǎo)致細胞裂解液鈣離子濃度降低且最適刺激濃度為200ng/ml,最佳刺激時間為24h。相比于對照組,GLP-1干預(yù)組OPN,Runx-2m RNA和蛋白表達都降低。GLP-1通過抑制p65,p38兩條信號傳導(dǎo)通路從而抑制鈣化�！窘Y(jié)論】我們的研究顯示GLP-1可通過抑制p65,p38活化從而抑制主動脈瓣膜間質(zhì)細胞的鈣化,為臨床上抑制主動脈瓣鈣化提供了新的理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R54
【圖文】：

不同時間VICs鈣離子表達濃度的影響

各組OPN和RUNX-2mRNA的表達

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本文編號：2761408