【摘要】：第一部分miR-21對心肌成纖維細胞的調(diào)控作用和機制研究【目的】心肌成纖維細胞(cardiac fibroblasts,CFs)是心肌纖維化(myocardial fibrosis,MF)的效應(yīng)細胞。CFs的功能狀態(tài)在MF的病理進程中有核心作用。研究發(fā)現(xiàn)miR-21參與纖維化疾病的調(diào)控。此部分研究將對miR-21調(diào)控CFs功能和狀態(tài)的作用和機制進行探討�！痉椒ā糠蛛x培養(yǎng)原代小鼠心肌成纖維細胞,構(gòu)建促細胞纖維化模型(TGF-β1),轉(zhuǎn)染miR-21類似物(miR-21 mimic)、miR-21抑制物(miR-21 inhibiter),抑制或過表達細胞miR-21。隨機分為正常對照組、TGF-β1組、miR-21-mimic組、TGF-β1+miR-21inhibiter組。real-time PCR方法檢測miR-21的表達,免疫印跡法法檢測α-SMA、p ERK/ERK的表達,MTT法檢測細胞增殖水平,El ASA法檢測Ⅰ型膠原,Ⅲ型膠原的表達�！窘Y(jié)果】與正常對照組比較,TGF-β1組CFs的增殖能力明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),TGF-β1組較正常對照組CFs膠原合成和α-SMA的表達明顯增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);TGF-β1能夠上調(diào)CFs的miR-21的水平;與正常對照組進行比較,miR-21 mimic組CFs的增殖能力明顯增加(P0.05),CFs膠原合成和α-SMA表達增加,TGF-β1+miR-21-inhibiter組較TGF-β1組,膠原表達降低(P0.05),α-SMA的表達水平也有所降低(P0.05);miR-21 mimic組較正常對照組細胞p ERK/ERK的水平增加,差異具有顯著性(P0.05),而TGF-β1+miR-21-inhibiter組較TGF-β1組,p ERK/ERK表達顯著降低(P0.05)【結(jié)論】本部分研究表明miR-21可能是TGF-β1的下游調(diào)節(jié)因子,對CFs具有促纖維化效應(yīng),促進CFs增殖與活化,增加膠原合成和α-SMA的表達;miR-21可能通過調(diào)控p ERK/ERK介導(dǎo)TGF-β1的效應(yīng)。第二部分miR-21對內(nèi)皮細胞發(fā)生內(nèi)皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用和機制研究【目的】內(nèi)皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(endothelial-mesenchymal transition,End MT)是肌成纖維細胞的來源之一。End MT通過內(nèi)皮細胞失去固有特征性和獲得的間充質(zhì)細胞表型而來。本部分建立離體培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)模型,探討miR-21對End MT的影響和機制�！痉椒ā糠蛛x和培養(yǎng)HUVECs,建立TGF-β1誘導(dǎo)HUVECs發(fā)生End MT模型,轉(zhuǎn)染miR-21 mimic,miR-21 inhibite以抑制或過表達miR-21。實驗分為4組:正常對照組、TGF-β1組、miR-21-mimic組、TGF-β1+miR-21 inhibiter組。real-time PCR方法檢測miR-21的表達。免疫熒光、免疫印跡檢測內(nèi)皮細胞標(biāo)記物CD-31和間質(zhì)細胞的標(biāo)記物FSP-1的表達。【結(jié)果】TGF-β1上調(diào)HUVECs的miR-21的水平,與正常對照組相比有顯著性差異(P0.05);TGF-β1/miR-21能夠誘導(dǎo)HUVECs發(fā)生End MT,表現(xiàn)為內(nèi)皮細胞的標(biāo)記物CD31表達降低(P0.05),而間質(zhì)細胞的標(biāo)記物FSP-1表達增加(P0.05);抑制miR-21能夠部分抑制TGF-β1誘導(dǎo)的End MT�！窘Y(jié)論】TGF-β1能夠通過調(diào)控miR-21誘導(dǎo)HUVECs發(fā)生End MT;抑制miR-21能夠部分抑制TGF-β1誘導(dǎo)的End MT。第三部分雷公藤紅素對心肌成纖維細胞的調(diào)節(jié)作用和機制研究【目的】雷公藤紅素是從雷公藤根部提取的一種有效的天然生物活性化合物。它已被證明在抗炎,抗癌,抗風(fēng)濕和自身免疫性疾病方面非常有價值。研究發(fā)現(xiàn)雷公藤紅素有心臟保護作用。miR-21參與調(diào)控CFs的增殖與活化。本部分研究旨在探討雷公藤紅素對CFs功能狀態(tài)以及是否能夠調(diào)控miR-21并且進行機制探討�！痉椒ā糠蛛x培養(yǎng)原代小鼠CFs,構(gòu)建TGF-β1促細胞模型,雷公藤紅素進行干預(yù)。隨機分為正常對照組、TGF-β1組、TGF-β1+雷公藤紅素組。real-time PCR方法檢測miR-21的表達,免疫印跡法檢測α-SMA、p ERK/ERK的表達;MTT法檢測細胞增殖水平;El ASA法檢測Ⅰ型膠原,Ⅲ型膠原的表達�！窘Y(jié)果】MTT法檢測CFs的增殖,分析數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)雷公藤紅素對CFs的抑制作用有濃度依賴性。用不同濃度的雷公藤紅素(0.2,1,5μM)進行干預(yù),能夠抑制TGF-β1誘導(dǎo)的成纖維細胞的X椫乘皆黽

本文編號：2760285