【摘要】：目的:利用聚乙烯亞胺(PEI)對二氧化硅(Silica)表面功能化修飾,形成功能化二氧化硅納米材料載體(F-Silica),再通過靜電吸附作用與miR-24結(jié)合形成基因載體復合物F-Silica-miR-24。在體外實驗研究中評估其對新生大鼠心室肌細胞(NRVM)的毒性及轉(zhuǎn)染效率,并篩選出最適配置比例。進一步研究其對促凋亡蛋白Bim的表達及氧化應激損傷后心肌細胞凋亡的影響。方法:1)構(gòu)建F-Silica,利用透射電鏡、納米粒度及Zeta電位分析儀表征材料的微觀結(jié)構(gòu)、粒徑大小及攜帶電荷。2)通過CCK-8/live-dead染色等評估F-Silica的生物相容性,瓊脂糖凝膠電泳篩選出基因復合載體F-Silica-miR-24最適配置比例。3)細胞攝取研究評估F-Silica-miR-24基因轉(zhuǎn)染效率。4)實驗分為6組:空白對照組(NC組)單純加入100?l PBS;H_2O_2組單純加入終濃度為100?mol/L H_2O_2處理24 h;miR-24類似物(miR-24-mimics)組;miR-24類似物對照(miR-24-mimics NC)組;miR-24抑制劑(miR-24-inhibitor)組;miR-24抑制劑對照(miR-24-inhibitor NC)組在H_2O_2處理前預先加入F-Silica搭載的200 nM寡核苷酸預轉(zhuǎn)染24 h。體外轉(zhuǎn)染后通過熒光定量PCR、Western blotting等評估其對新生大鼠心室肌細胞目的基因及促凋亡蛋白Bim的作用,TUNEL染色進一步評估其對心肌細胞凋亡的影響。結(jié)果:1)合成的Silica尺寸集中分布在40-60nm之間;當Silica與DSP-PEI按照質(zhì)量比為1:1來構(gòu)建基因載體F-Silica時攜帶+21mv左右電位。2)F-Silica濃度為0.25mg/ml時可完全荷載200nM的miR-24,作為后續(xù)實驗F-Silica-miRNA組中F-Silica的終濃度;且當以荷載miRNA所需濃度2倍劑量與心肌細胞共培養(yǎng)1d/3d時對心肌細胞的活力均無明顯影響。3)細胞攝取研究清楚地證明F-Silica-miRNA復合納米載體可以有效地將miRNA分子遞送到心肌細胞中,經(jīng)計數(shù)轉(zhuǎn)染效率可達80%以上。4)以100uM H_2O_2作用24h后心肌細胞存活率在50%左右,心肌細胞凋亡模型建模成功;熒光定量PCR結(jié)果示:與NC組相比,H_2O_2組、miR-24 mimics NC組、miR-24 inhibitor NC組中心肌細胞內(nèi)miR-24表達量均降低,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05);miR-24 mimics組中miR-24的表達量顯著提高,miR-24 inhibitor組中miR-24的表達量顯著降低,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。Western blotting結(jié)果示:與NC組相比,H_2O_2組、miR-24 inhibitor組中蛋白Bim的表達量明顯提高,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05),而NC組與miR-24 mimics組中蛋白Bim的表達量無統(tǒng)計學差異(P0.05)。TUNEL染色結(jié)果表明通過體外過表達miR-24可以抑制心肌細胞凋亡,促進心肌細胞存活;抑制miR-24的表達,則心肌細胞凋亡發(fā)生率顯著提升。結(jié)論:1)選用PEI800作為二氧化硅表面修飾物,合成的Silica經(jīng)DSP-PEI功能化后(W/W為1:1)生成的納米基因載體F-Silica不僅生物相容性較好且基因轉(zhuǎn)染能力更強。2)相比于H_2O_2組,miR-24 mimics組中miR-24的表達量顯著提高,并可顯著抑制促凋亡蛋白Bim的表達。3)F-Silica介導的miR-24轉(zhuǎn)染可以顯著抑制氧化應激損傷導致的心肌細胞凋亡,促進心肌細胞存活。
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R54

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 張娟娟;;運動與心肌細胞凋亡[J];山西體育科技;2011年03期

2 房佳惠;楊巍;;Bcl-2家族蛋白對心肌細胞凋亡作用的研究進展[J];現(xiàn)代醫(yī)學;2017年07期

3 張星;麻春杰;;中醫(yī)藥抗心肌缺血再灌注損傷心肌細胞凋亡的研究進展[J];中醫(yī)藥導報;2017年14期

4 朱莉拉;張安琪;卓小煌;酈娜;;乙醇誘導心肌細胞凋亡的發(fā)生機制的研究進展[J];人人健康;2016年20期

5 邢維新;;運動訓練與心肌細胞凋亡研究的新進展[J];綿陽師范學院學報;2011年02期

6 蔣曉明;屈紅林;;骨髓間充質(zhì)干細胞防治心肌細胞凋亡的基因及蛋白研究[J];中國組織工程研究與臨床康復;2011年36期

7 方禮欽;屈紅林;;骨髓間充質(zhì)干細胞與運動性心肌細胞凋亡[J];中國組織工程研究與臨床康復;2010年01期

8 郝言杰;王元書;解硯英;牟艷玲;;心肌細胞凋亡與梗死的研究進展[J];食品與藥品;2009年01期

9 朱漢華;李浪;汪熠;李佳荃;文偉明;陸永光;趙獻明;;TUNEL檢測心肌細胞凋亡的影響因素探討[J];廣西醫(yī)科大學學報;2009年01期

10 申小寶;孟雋卿;;運動與心肌細胞凋亡[J];吉林體育學院學報;2009年04期

相關會議論文 前10條

1 裴兆輝;馬虹;朱妙章;;血管緊張素Ⅱ誘導心肌細胞凋亡機制的研究進展[A];全國第九屆心臟學會第十二屆心功能學會《心臟雜志》編委會聯(lián)合學術會議論文集[C];2005年

2 盧紅;林麗;嚴曉紅;王媛;任安經(jīng);;內(nèi)皮素-1參與心肌細胞凋亡的研究[A];提高全民科學素質(zhì)、建設創(chuàng)新型國家——2006中國科協(xié)年會論文集[C];2006年

3 趙宇光;李薇;;基質(zhì)細胞衍生因子-1β對高脂誘導心肌細胞凋亡的預防作用及機制[A];第13屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2011年

4 蔡久英;張博;;紅景天苷對乳鼠心肌細胞凋亡的影響[A];第八次全國中西醫(yī)結(jié)合心血管病學術會議論文集[C];2007年

5 陳少賢;劉曉穎;林秋雄;單志新;余細勇;朱杰寧;楊敏;;三七總皂苷抑制心肌細胞凋亡的作用機制研究[A];2010年廣東省藥師周大會論文集[C];2011年

6 呂秀秀;王華東;余小慧;;小檗堿抑制去甲腎上腺素誘導心肌細胞凋亡的機制研究[A];中國病理生理學會第九屆全國代表大會及學術會議論文摘要[C];2010年

7 王筠;劉暢;;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激在高糖誘導乳鼠心肌細胞凋亡中的作用[A];中華醫(yī)學會第十次全國內(nèi)分泌學學術會議論文匯編[C];2011年

8 張璐潔;呂進泉;;心梗局部高表達整合素連接激酶抑制心肌細胞凋亡改善心臟收縮功能[A];2012年江浙滬兒科學術年會暨浙江省醫(yī)學會兒科學分會學術年會、兒內(nèi)科疾病診治新進展國家級學習班論文匯編[C];2012年

9 蔣東;鄭世營;葛錦峰;趙軍;;缺血預處理減輕在體家兔心肌細胞凋亡[A];中華醫(yī)學會第七次全國胸心血管外科學術會議暨2007中華醫(yī)學會胸心血管外科青年醫(yī)師論壇論文集心血管外科分冊[C];2007年

10 張峰;梁宏;祁章年;黃增明;張曉春;張恒太;王根良;;γ射線全身照射對小鼠血液和心肌細胞凋亡的影響[A];中國空間科學學會空間生命專業(yè)委員會2003年中國空間生命科學與航天醫(yī)學會議論文摘要集[C];2003年

相關重要報紙文章 前2條

1 本報記者 慕欣;PNS可否抑制心肌細胞凋亡？[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2010年

2 記者 鄭福漢 見習記者 甘青;執(zhí)著的追求[N];咸寧日報;2006年

相關博士學位論文 前10條

1 黃偉;miR-21/miR-146a抗心肌細胞凋亡作用及機制[D];哈爾濱醫(yī)科大學;2016年

2 李靜;長鏈非編碼RNA LINC00339在阿霉素誘導心肌細胞凋亡中的作用及其機制[D];南方醫(yī)科大學;2019年

3 易敏;CS離子浸提液修復小鼠心肌梗死的實驗研究[D];南方醫(yī)科大學;2019年

4 李若天;miR-145調(diào)控心肌細胞凋亡、肥大的機制研究[D];南京大學;2013年

5 張蓓;絲裂原活化蛋白激酶、鈣蛋白酶和膜聯(lián)蛋白A5在醛固酮誘導原代心肌細胞凋亡中的分子機制及相關臨床研究[D];貴州醫(yī)科大學;2017年

6 孫羽涵;miR-486調(diào)控p53/Bbc3/BCL-2凋亡通路減輕冠狀動脈微栓塞致心肌損傷的機制研究[D];廣西醫(yī)科大學;2017年

7 張曉卉;H2和H3 relaxin抑制高糖誘導的心肌細胞凋亡的作用及機制[D];哈爾濱醫(yī)科大學;2014年

8 劉丹;白介素-33對高糖誘導心肌細胞凋亡的保護作用及機制研究[D];武漢大學;2016年

9 李鵬飛;血清外泌體通過ERK1/2發(fā)揮抵抗H_2O_2誘導的大鼠心肌細胞凋亡的作用[D];南京醫(yī)科大學;2018年

10 閆夢捷;MiR-199a-5p/miR-31a-5p對心肌細胞凋亡的影響及其分子機制[D];吉林大學;2018年

相關碩士學位論文 前10條

1 姚玉娟;轉(zhuǎn)錄因子EPAS1和EGR-1在心肌細胞凋亡中的功能研究[D];山東大學;2019年

2 寧娜;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激與自噬交互作用參與β_1-腎上腺素受體自身抗體誘導的心肌細胞凋亡[D];山西醫(yī)科大學;2019年

3 俞泓;二氧化硅納米顆粒介導的microRNA-24轉(zhuǎn)染對心肌細胞凋亡的影響[D];安徽醫(yī)科大學;2019年

4 高英杰;靖宇縣精準扶貧研究[D];吉林大學;2019年

5 馬平;膽固醇水平變化對心肌炎心肌細胞凋亡的影響及其機制研究[D];廈門大學;2018年

6 王景;芪參顆粒抑制AMI后炎癥損傷介導心肌細胞凋亡的機制研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2016年

7 吳雨婷;淫羊藿次苷Ⅱ?qū)ψ园l(fā)性高血壓大鼠心肌細胞凋亡的干預作用及機制研究[D];遵義醫(yī)學院;2018年

8 吳麗夢;miR-499-5p通過靶調(diào)節(jié)Sox6抑制大鼠心梗后心肌細胞凋亡[D];鄭州大學;2018年

9 王廣能;外源性H_2S通過激活KATP通道抑制心肌細胞凋亡[D];南華大學;2018年

10 賀滟;CaMKⅡ?qū)?0-HETE誘導的心肌細胞凋亡和肥大的作用及機制研究[D];遵義醫(yī)學院;2018年

本文編號：2760088