【摘要】：目的:探討鋅指蛋白580(ZFP580)及內皮型一氧化氮合酶(e NOS)在異丙腎上腺素(ISO)致小鼠心肌缺血模型中的表達情況,為闡明心肌缺血疾病的發(fā)病機制提供新的實驗依據。方法:1將50只雄性成年昆明小鼠隨機分為5組,(1)對照組;(2)ISO,0.25mg/kg組,(3)ISO,1mg/kg組,(4)ISO,2.5mg/kg組,(5)ISO,5mg/kg組,每組10只。行ISO小鼠腹腔注射,在小鼠腹腔注射ISO后5分鐘,采用BL-420生物功能實驗系統,對參與試驗的小鼠Ⅱ導聯心電圖進行記錄,當發(fā)現波形于ST段抬高,T波高聳,表現為典型心肌缺血心電圖波形,證明造模成功,繼而進行后續(xù)實驗;處死小鼠前行摘眼球放血并收集血液,對照組小鼠腹腔注射等量生理鹽水后同法處死。2收集小鼠血清行生化指標監(jiān)測:主要生化指標包括LDH及和CK活性數據。采用3000r/min對血清進行離心處理,并利用分光光度計對上述兩項指標進行檢測。3心肌組織形態(tài)學指標檢查:對采集到的心尖部位組織進行固定、脫水、包埋處理,利用對所制組織切片進行觀察,獲取缺血心肌在形態(tài)上的變化情況。4定量RT-PCR檢測ZFP580m RNA及e NOS的表達:通過對Trizol試劑的有效利用,完成對心肌中總RNA的提取工作。取所獲取的定量總RNA(400μg)10μl體系,經過逆轉錄形成c DNA第一鏈。對c DNA模板(10μl)進行簡單處理后,再與靶基因ZFP580上下游引物融合,采用PCR對50μl體系進行反應。以GAPDH為內參照,監(jiān)測ZFP580及e NOS基因的相對表達量。5心肌組織的染色觀察:對心肌組織進行HE和免疫組織化學染色操作,并于顯微鏡下對著色情況進行觀察。對其中陽性細胞進行計數,最低計數200個心肌細胞,以陽性細胞占視野內心肌細胞總數的百分比表示陽性率。載玻片陽性率取平均值。陰性對照:用0.01mol/L PBS代替一抗,其余步驟基本相同。6統計學分析:全部試驗數據均采用均數±標準差表示,應用SPSS11.5軟件進行統計學分析(初步數據分析采用excel分析)。采用單因素方差表示組間差異,其中顯著性差異者用Student-Newmen-Kuels q檢驗,并進行兩兩比較。結果:1 ISO對小鼠ECG中ST段、T波及血清LDH、CK活性的影響完成對小鼠的ISO腹腔注入后,小鼠表現為ST、T段抬升,表明小鼠出現典型的心肌缺血ECG改變,即模型制備成功。模型組小鼠LDH、CK活性兩項指標,較對照組有明顯提升(P0.5)2 ISO對小鼠心肌形態(tài)學的影響對心肌的形態(tài)學觀察,Masson染色顯示對照組心肌細胞排列整齊,心肌免疫反應著色為黃色。完成ISO注入后的實驗組小鼠心肌細胞排列相對紊亂,心肌多處呈現不規(guī)則壞死灶,并有明顯的炎癥細胞侵潤表現。缺血心肌染色為紅色。HE染色可見缺血心肌細胞核皺縮不規(guī)則,發(fā)生空泡樣變性。3小鼠缺血心肌細胞ZFP580m RNA及e NOS的表達鋅指基因ZFP580及e NOS在心肌缺血損傷中表達均降低,提示ZFP580及e NOS在心肌缺血發(fā)揮了某種調控功能,對心肌起保護作用。同時,研究結果顯示ISO可能影響心肌細胞中ZFP580的轉錄及其翻譯,其具體機制尚不完全明確。4小鼠缺血心肌細胞ZFP580蛋白及e NOS蛋白的表達ZFP580定位于細胞核及細胞質中,黃色染色細胞代表陽性反應細胞,在實驗組小鼠心肌的ZFP580陽性細胞比例較對照組明顯偏低。e NOS蛋白均以細胞質出現棕黃色顆粒為陽性細胞,與對照組相比也明顯偏低。結論:ZFP580及e NOS在異丙腎上腺素致小鼠心肌缺血模型中的表達,隨心肌缺血性損傷而降低。
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R542.2;R-332

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 王繼春;胡笑容;謝菁;周曉亞;江洪;;異丙腎上腺素對大鼠心肌缺血再灌注損傷中高遷移率族蛋白1表達的影響及機制[J];中華老年心腦血管病雜志;2014年03期

2 劉亞杰;佘強;;心外膜細胞在心臟發(fā)育及再生的研究進展[J];心血管病學進展;2012年03期

3 尉新華;范慧敏;李鐵巖;曹浩;周曉慧;劉中民;;小鼠心肌梗死模型的建立和無創(chuàng)評價方法[J];同濟大學學報(醫(yī)學版);2011年05期

4 彭亮;張家明;劉敏;劉善紅;李超;李景東;;心肌缺血后適應對大鼠細胞因子的影響及內皮型一氧化氮合酶的作用[J];臨床心血管病雜志;2011年05期

5 楊勇;容蓉;陳明強;李磊;柳少華;孫鵬飛;;異丙腎上腺素誘導小鼠急性心肌缺血模型的方法比較[J];中藥藥理與臨床;2010年05期

6 孟祥艷;張文成;;鋅指基因ZFP580參與大鼠心肌缺血-再灌注損傷及修復的研究[J];中國病理生理雜志;2010年10期

7 張文成;孫慧燕;羅玉玉;崔明亮;;ZNF580與EGFP融合蛋白表達載體的構建及其在HEK293細胞的表達和定位[J];武警醫(yī)學院學報;2008年03期

8 陳業(yè)農;周逸平;汪克明;蔡榮林;王月蘭;李曉民;;急性心肌缺血再灌注損傷大鼠模型制備方法的改進與評價[J];中國中醫(yī)急癥;2008年03期

9 張文成,陳保生,曾武威,吳剛,薛紅;低密度脂蛋白誘導下調的新基因cDNA的克隆及組織表達[J];基礎醫(yī)學與臨床;2003年03期

10 孫立軍,劉瑩,趙海濤,宦怡,葛亞麗,郜發(fā)寶;急性心肌梗塞后缺血心肌血管生成的實驗研究[J];中國CT和MRI雜志;2003年01期

本文編號：2757234