【摘要】：研究背景:高尿酸血癥與多種心血管疾病的風險增加有關(guān),但其對心血管疾病的影響仍然存在爭議。鈣蛋白酶(calpain)是一類鈣激活的半胱氨酸蛋白酶,在心血管疾病中發(fā)揮重要作用,但是calpain在高尿酸血癥中的作用還不明確。目的:研究尿酸對心肌細胞凋亡和心功能的影響,并探討calpain-1和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在尿酸誘導(dǎo)的心肌損傷中的作用及其機制。方法:通過氧嗪酸灌胃構(gòu)建大鼠高尿酸血癥動物模型,16周后使用TUNEL染色法檢測細胞凋亡,使用天狼星紅染色評估心肌間質(zhì)纖維化,通過血流動力學檢測評估心臟功能,采用實時定量PCR分析相關(guān)基因的表達,通過western blot檢測calpain和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白的表達。在體外實驗,給予H9c2心肌細胞不同濃度的尿酸刺激,分別用calpain的抑制劑CI-Ⅲ,calpain-1的si RNA和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑TUDCA預(yù)處理心肌細胞,觀察其對尿酸誘導(dǎo)的H9c2心肌細胞損傷的作用。通過MTT實驗和流式細胞術(shù)來評估細胞活力與凋亡。結(jié)果:高尿酸血癥可誘導(dǎo)大鼠心肌細胞凋亡,間質(zhì)纖維化和舒張功能障礙,同時伴隨calpain-1和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的增加,而別嘌呤醇治療減輕了所有上述變化。體外實驗顯示,尿酸以劑量依賴性的方式增加H9c2心肌細胞凋亡并降低細胞活力,同時也觀察到calpain-1和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的增加。calpain抑制劑CI-III和calpain-1 si RNA能夠緩解尿酸誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和細胞凋亡,而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激抑制劑TUDCA可減輕尿酸誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和細胞凋亡而不影響calpain的表達與活性。結(jié)論:尿酸通過激活calpian-1和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)心肌細胞凋亡和心臟舒張功能障礙。
【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R589.7;R54
【圖文】：

圖 1 各組大鼠心肌細胞凋亡結(jié)果Figure 1Apoptosis of rat cardiac myocytes in each groupControl：對照組； Allopurinol：別嘌呤醇組； OA：氧嗪酸組;OA+Allopurinol：氧嗪酸+別嘌呤醇組；（A）每組 TUNEL 染色代表圖（放大倍數(shù) 400 倍），TUNEL 的陽性細胞核被染成棕色；（B）每組 TUNEL 染色陽性細胞的百分比； *與對照組相比，P<0.05;#與 OA 組相比，P <0.05。

上海交通大學博士學位論文1.3.4 心肌纖維化結(jié)果我們使用天狼腥紅染色法檢測心肌的纖維化。與對照組相比，氧嗪酸組心肌纖維化明顯增加；與氧嗪酸組相比，別嘌呤醇治療組心肌纖維化明顯減少（圖 2A，B）。通過 RT-PCT 檢測纖維化標志物 Collagen-1，CTGFa 和 TGF-β 的 mRNA 水平表達變化，結(jié)果顯示：與對照組相比，氧嗪酸組 Collagen-1，CTGFa 和 TGF-β的 mRNA 表達顯著增加；與氧嗪酸組相比，別嘌呤醇治療組 Collagen-1，CTGFa和 TGF-β 的 mRNA 表達顯著減少（圖 2C）。

上海交通大學博士學位論文1.3.5 Calpain 活性與對照組相比，氧嗪酸組心肌 calpain 活性明顯升高；與氧嗪酸組嘌呤醇治療組心肌 calpain 活性明顯降低（圖 3）。

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1 陳飛;陳s

本文編號：2747353