【摘要】：目的《2018中國心血管病報告》指出心血管病占居民疾病死亡構成的40%以上,成為我國居民的首位死因。心血管疾病已經成為重大的公共衛(wèi)生問題,防治心血管病刻不容緩。冠心病(coronary artery disease,CAD)是一種十分常見的心血管疾病,目前,臨床上以脂蛋白-膽固醇含量作為CAD的預測因子。然而最近研究發(fā)現(xiàn),血清中脂蛋白-膽固醇含量處于正常值時,仍然具有發(fā)生CAD的風險,因此單純從血清脂蛋白-膽固醇含量的角度評價CAD及事件發(fā)生概率具有一定局限性。深入研究后發(fā)現(xiàn),載脂蛋白與CAD的發(fā)生發(fā)展緊密相關,尤其是高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)攜帶的載脂蛋白A1和低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)攜帶的載脂蛋白B。本實驗通過對CAD患者血清中的脂蛋白進行分離表征,探究CAD患者血清中HDL和LDL含量值的變化,嘗試尋找新型的CAD預測因子。方法1.本實驗采用非對稱場流分離技術(asymmetrical field flow-field fractionation,AF4)聯(lián)用紫外可見光檢測器(UV/Vis)對CAD患者血清中的脂蛋白進行分離表征。樣品的分析結果受系統(tǒng)分離條件影響,本課題從進樣量、交叉流流速、載液離子強度、膜類型、墊片厚度等幾個方面考察了AF4系統(tǒng)條件對樣品分析結果的影響,并驗證實驗結果的重復性,保證系統(tǒng)的適用性。2.為了消除AF4分離過程中,血清樣品中游離蛋白質對脂蛋白分析結果的干擾,本課題選擇使用蘇丹黑B(Sudan Black B,SBB)對血清中脂蛋白進行特異性染色,在特定檢測波長范圍下,探究SBB與脂蛋白的染色程度對分析表征結果的影響。同時,為了減小樣品在過濾膜上的吸附,提高回收率分離度,本課題從交叉流流速、載液離子強度兩個方面展開研究,以確定樣品的最佳分離條件。并在最優(yōu)分離條件下,對CAD患者與健康人的血清樣品進行了AF4-UV/Vis分析。結果通過考察系統(tǒng)分析條件,確定最佳分離條件為交叉流流速V_c=2 mL/min,載液離子強度I為100 mM NaCl。在此條件下進行實驗結果的重復性考察(n=5),實驗結果證明AF4分析血清脂蛋白的重復性良好,證明此方法的穩(wěn)定性較好;通過AF4-UV/Vis對SBB染色的血清脂蛋白進行分離表征,結果發(fā)現(xiàn),健康人血清中LDL和HDL含量與CAD患者存在一定差異。結論本課題證明AF4可以實現(xiàn)血清中高、低密度脂蛋白的基線分離。此外,實驗結果證明,相比于LDL,HDL的含量變化更易受到冠心病的影響。
【學位授予單位】：河北大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R541.4
【圖文】：

如圖 1-1所示，AF4 通道呈現(xiàn)窄帶狀梯形，由聚碳酸酯上殼、聚酯梯形墊片、超（積累壁）和不銹鋼滲透熔塊下板組成。聚碳酸酯上殼表面光滑平坦，非常適合載液入口和出口孔。不銹鋼滲透熔塊下板與上板對立夾緊，和多孔過濾膜一起作累壁。兩板之間夾有聚酯梯形墊片，梯形墊片相對于矩形墊片的優(yōu)勢在于能夠保品出入口的流速恒定，同時減小樣品在通道內的稀釋。

即正常模式、空間模式和超層模式）。如圖 1-2 所示，正常模式下（顆粒被外力推向積累壁的同時受到布朗運動的作用，向通道中心擴形成平衡層，由于粒徑小的顆粒擴散系數(shù)大，形成的樣品層的中心中心，此位置的橫流流速較快，故粒徑小的粒子先被洗脫出來[40]（圖(a)

離通道長度為 17.4 cm，入口和出口的寬度分別為 2.20 cm 和 0.15 cm。通過 LS 微流量注射泵（申晨泵業(yè)有限公司，保定，中國）和手動進樣器以 0.2 mL/min 將制備好的血清樣品溶液注入通道中（如圖 2-1），使用 Peakfit、Sigmaplot 等理 UV/Vis 獲得的數(shù)據。

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