發(fā)布時(shí)間：2020-07-07 16:56

【摘要】：目的:探討急性心肌梗死(Acute myocardial infarction,AMI)的發(fā)生發(fā)展與SIRT4基因的關(guān)系。通過測(cè)序發(fā)現(xiàn)AMI人群和健康對(duì)照人群中SIRT4基因啟動(dòng)子的序列變異情況,比較DNA序列變異所調(diào)控的SIRT4基因表達(dá)水平的變化,進(jìn)而探討AMI與SIRT4基因的關(guān)系。從基因遺傳學(xué)角度揭示AMI的發(fā)病機(jī)制,為AMI的預(yù)防和診治提供新的思路。方法:實(shí)驗(yàn)組選取2014.06-2016.09就診于濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院診斷為AMI的病人466例,隨機(jī)抽取同期體檢中心查體的健康者460例為對(duì)照組。提取受試者全基因組DNA,同時(shí)收集相關(guān)臨床資料。檢索NCBI數(shù)據(jù)庫中的人類SIRT4基因啟動(dòng)子序列,根據(jù)其設(shè)計(jì)引物,采用PCR技術(shù)擴(kuò)增兩組人群中SIRT4基因啟動(dòng)子DNA序列,直接測(cè)序,根據(jù)測(cè)序結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析SIRT4基因啟動(dòng)子的DNA序列變異情況。分別將野生型(WT)及含有DNA序列變異位點(diǎn)的基因啟動(dòng)子片段構(gòu)建到PGL3-basic載體上,然后與內(nèi)參質(zhì)粒PRL-TK一起瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞和H9c2細(xì)胞。通過檢測(cè)細(xì)胞中兩種熒光素酶的相對(duì)活性,統(tǒng)計(jì)分析SIRT4基因啟動(dòng)子遺傳變異對(duì)其轉(zhuǎn)錄活性的影響,進(jìn)而探究SIRT4基因與AMI之間的關(guān)系。結(jié)果:本研究共發(fā)現(xiàn)了13個(gè)DNA序列變異位點(diǎn)(DSVs),其中包括8個(gè)單核苷酸多態(tài)性(SNPs)。有6個(gè)DSVs只在AMI病人中發(fā)現(xiàn),分別為g.120301113TC(rs117917450)、g.120301158TC、g.120301223AG(rs377133726)、g.120301432GT、g.120301646CT、g.120301881CG(rs140691657),在對(duì)照組中沒有發(fā)現(xiàn);在對(duì)照組人群中發(fā)現(xiàn)了5個(gè)雜合DSVs,分別為g.120301295GA(rs746724456)、g.120301563GC、g.120301575CT(rs375039725)、g.120302349GC、g.120302370GT(rs765200215),而這些DSVs在AMI病人中沒有發(fā)現(xiàn);另外2個(gè)DSVs均是SNPs,分別為g.120301100TC(rs138194145)、g.120301832TG(rs146884386)在AMI組及對(duì)照組中均有發(fā)現(xiàn),但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。構(gòu)建PGL3-basic報(bào)告基因載體,與內(nèi)參質(zhì)粒PRL-TK共同轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞和H9c2細(xì)胞。分別檢測(cè)WT及攜帶不同DSVs的SIRT4基因啟動(dòng)子在上述細(xì)胞中兩種熒光素酶的相對(duì)表達(dá)活性,統(tǒng)計(jì)分析SIRT4基因啟動(dòng)子遺傳變異對(duì)其轉(zhuǎn)錄活性的影響。我們發(fā)現(xiàn)僅在AMI組發(fā)現(xiàn)的DSVs,即g.120301113TC(rs117917450)、g.120301158TC、g.120301223AG(rs377133726)、g.120301432GT、g.120301646CT、g.120301881CG(rs140691657)可顯著降低SITR4基因啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性(P0.05),其它的DSVs均未能改變SITR4基因啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性(P0.05)。結(jié)論:通過對(duì)SIRT4基因啟動(dòng)子的遺傳學(xué)及功能學(xué)分析,我們發(fā)現(xiàn)SIRT4基因啟動(dòng)子的遺傳變異可能改變了其轉(zhuǎn)錄活性,進(jìn)而影響了SIRT4基因的表達(dá),促進(jìn)了AMI的發(fā)生發(fā)展。
【學(xué)位授予單位】：濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R542.22
【圖文】：

圖 1：SIRT4 基因啟動(dòng)子 PCR 擴(kuò)增小片段 1（747bp）電泳圖，泳道 10 為D2000 marker 條帶，泳道 1-9 為其部分?jǐn)U增產(chǎn)物條帶。

圖 1：SIRT4 基因啟動(dòng)子 PCR 擴(kuò)增小片段 1（747bp）電泳圖，泳道 10 為D2000 marker 條帶，泳道 1-9 為其部分?jǐn)U增產(chǎn)物條帶。

圖 3：兩組人群中發(fā)現(xiàn)的 SIRT4 基因（Genebank 收錄號(hào)：NC_000012.12）啟動(dòng)子 DSVs 的大致位置。轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)位于g.120302322（+1）。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前4條

1 陳靜;GATA4基因啟動(dòng)子在心肌梗死病人中遺傳和功能變異研究[D];山東大學(xué);2018年

2 楊文濤;SIRT2基因啟動(dòng)子在心肌梗死病人中遺傳和功能變異研究[D];山東大學(xué);2017年

3 高風(fēng);LC3B基因啟動(dòng)子在心肌梗死病人中的遺傳和功能變異研究[D];山東大學(xué);2017年

4 尹曉云;心肌梗死病人中SIRT3基因啟動(dòng)子遺傳和功能變異研究[D];山東大學(xué);2016年

本文編號(hào)：2745363