發(fā)布時間：2020-07-04 12:34

【摘要】：目的本研究的目的是探討CD4~+CD25~(high)CD127~(low)調(diào)節(jié)性T細胞(T-regs)在再生障礙性貧血(AA)病理生理學(xué)中的作用以及雄激素對AA患者T-regs的影響;并進一步探討雄激素對AA患者端粒、端粒酶系統(tǒng)的影響以及端粒酶基因突變、端粒長度、端粒酶活性在AA發(fā)病機制中的作用。方法依據(jù)AA臨床診斷標(biāo)準收集患者,根據(jù)患者個體情況按照診療標(biāo)準予以對癥治療,⑴分為ATG+環(huán)孢素(CsA)、CsA+達那唑(DAN)及達那唑三組,分別采集患者外周血標(biāo)本,采用多色流式細胞術(shù)對外周血標(biāo)本進行T-regs計數(shù),并計算T-regs/CD4~+T淋巴細胞百分率(T-regs%),并與健康對照組進行比較;⑵分為CsA+司坦唑醇及CsA兩組,a.采用核酸提取儀及核酸提取試劑盒提取外周血基因組DNA;b.利用實時熒光定量PCR檢測外周血白細胞端粒相對長度;c.利用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)雙抗體夾心法檢測端粒酶活性;d.利用PCR擴增TERT、TERC基因,產(chǎn)物進行純化、測序、分析,并與健康對照組進行比較。結(jié)果第一部分⑴25例AA患者確診時平均T-regs%值(3.45±1.33%)與對照組(7.90±0.99%)比較差異有顯著性(P0.0001)。治療3個月后,所有患者的平均T-regs%值顯著升高(6.70±1.99%)(P0.0001)。其中,13例患者無反應(yīng),11例部分緩解,1例完全緩解,反應(yīng)組T-regs平均上升率高于無反應(yīng)組(p=0.613)。⑵治療3個月后,三組T-regs%值均升高,三組治療前后差異具有顯著性(p0.0001),但組間比較無顯著性差異(p=0.585)。⑶單因素分析未發(fā)現(xiàn)T-regs%值變化的顯著預(yù)測因子。第二部分⑴30例AA患者有1例發(fā)生TERC1突變,15例正常對照組均未發(fā)現(xiàn)TERT1、TERT2及TERC1基因突變。實驗組及正常健康對照組均發(fā)現(xiàn)TERT及TERC基因的多處單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點。⑵AA患者基線端粒長度相對T/S比率為0.765±0.271,較正常健康對照組0.978±0.344明顯縮短(P=0.028)。治療后12個月,CsA+雄激素組端粒長度相對T/S比率高于CsA組(P=0.017)。⑶實驗組患者基線端粒酶活性(OD值)平均值為0.30±0.16,顯著高于正常健康對照組(0.11±0.06)。CsA+雄激素組端粒酶活性(OD值)在治療后3~6個月逐步降低,9~12個月顯著升高,但與CsA組比較無顯著性差異。⑷CsA組治療后3個月,3例患者(20%)出現(xiàn)血液學(xué)反應(yīng),6個月后6例患者(40%)出現(xiàn)血液學(xué)反應(yīng),此后直至隨訪至12個月均未出現(xiàn)新血液學(xué)反應(yīng);CsA+雄激素組治療后3個月,8例患者(53.3%)出現(xiàn)血液學(xué)反應(yīng),6個月后10例患者(66.7%)出現(xiàn)血液學(xué)反應(yīng),9個月后11例患者(73.3%)出現(xiàn)血液學(xué)反應(yīng),12個月獲得血液學(xué)改善患者為12例(80%)。CsA+雄激素組血液學(xué)改善優(yōu)于CsA組,兩組比較有顯著性差異(P=0.03)。⑸實驗組患者治療期間均未出現(xiàn)3級或4級藥物不良事件,1例患者(3.3%)出現(xiàn)“肝臟良性占位”,1例患者(3.3%)出現(xiàn)輕度腎功能損害,2例患者(6.7%)出現(xiàn)輕度肝功能損害。結(jié)論1、T-regs在AA的病理生理過程中起著重要作用。雄激素可能具有免疫調(diào)節(jié)作用,但其對AA的免疫機制可能主要是它對端粒系統(tǒng)的影響,這正是我們需要進一步深入研究的方向�？偟膩碚f,達那唑作為一種減弱的雄激素可能具有免疫調(diào)節(jié)潛力。2、雄激素可以調(diào)節(jié)AA患者端粒酶活性和端粒長度,且雄激素治療后端粒長度的增加與雄激素對端粒酶活性的調(diào)節(jié)是一致的。雄激素在治療AA伴端粒功能障礙方面是有效的,可以獲得有臨床意義的血液學(xué)改善,且無嚴重毒副作用。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R556.5
【圖文】：

1.2.4 影響 T-regs 值變化預(yù)測因素單因素分析未發(fā)現(xiàn) T-regs 值變化的顯著預(yù)測因子。三組治療均不隨機分組年齡匹配（p=0.725）。與其他兩組相比，“CsA+DAN”組招募的女性人數(shù)相對較多。然而，這不太可能影響 T-regs 的反應(yīng)，因為對性別的獨立分析并不能預(yù)測治療后 T-regs 百分比的增加（p=0.38）。1.3 討論1.3.1 AA 免疫病理生理學(xué)

圖 2 端粒結(jié)構(gòu)圖物細胞中，由于“末端復(fù)制”的原因，體內(nèi)外每次細胞AGGG 重復(fù)序列上 50-200 個堿基對（bp）丟失。因此，端粒長體細胞的復(fù)制壽命，其功能類似于“有絲分裂鐘”。衰老象，端粒長度的縮短是造成細胞復(fù)制性衰老（人正常體細有限）的原因。當(dāng)細胞端粒極短時，復(fù)制性衰老阻止它們或不可逆易位，最終避免染色體不穩(wěn)定、非整倍體和腫瘤性潛能的細胞能夠通過損壞或抑制 DNA 損傷反應(yīng)逃避復(fù)53（p53）的丟失與端粒維持機制的失活。結(jié)果這些細胞繼發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化[104]。大多數(shù)人類腫瘤細胞表現(xiàn)為端�？s短起因于遺傳不穩(wěn)定性細胞。端粒截斷（telomere crisis）及發(fā)揮作用的有力證據(jù)是慢性淋巴細胞白血�。–LL）以及規(guī)�；蛑亟M（CLL）和 DNA 損傷（MDS）的存在有關(guān)并不存在[105]。一種核糖蛋白，嵌于端粒蛋白復(fù)合體內(nèi)維持端粒的長度

【參考文獻】

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本文編號：2741134