【摘要】：背景:血管平滑肌細(xì)胞的電壓門控L型鈣通道(L-type calcium channels,LTCC)Ca V1.2的激活引起Ca2+內(nèi)流,對維持血管肌源性張力和血壓起著至關(guān)重要的作用�？勺兗艚幼鳛橐环N轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機(jī)制,它可以調(diào)控Ca V1.2鈣通道產(chǎn)生不同的外顯子拼接來發(fā)揮精細(xì)調(diào)控通道的功能。Rbfox2是一種剪接調(diào)控因子,在神經(jīng)發(fā)育的過程中它可以調(diào)控Ca V1.2前體m RNA的可變剪接事件。但是,Rbfox2在調(diào)控血管Ca V1.2通道的功能以及在高血壓中的作用及機(jī)制尚不清楚。目的:探索高血壓血管中Rbfox2及Ca V1.2的exon 9*和exon 33的表達(dá)是否改變,研究Rbfox2對Ca V1.2的exon 9*和exon 33的調(diào)控作用,及對Ca V1.2鈣通道功能和血管肌源性張力的影響。方法:分別利用克隆RT-PCR和Western blotting技術(shù)檢測大鼠腸系膜動(dòng)脈含exon 9*和exon 33的Ca V1.2鈣通道m(xù) RNA以及Rbfox2蛋白的表達(dá)水平。在細(xì)胞水平,使用si RNA敲降Rbfox2后,檢測對exon 9*和exon 33的調(diào)控作用,并用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)檢測Rbfox2對Ca V1.2鈣通道電生理特性的影響。利用微血管張力檢測系統(tǒng),檢測Rbfox2對腸系膜動(dòng)脈肌源性血管張力的影響。結(jié)果:在高血壓大鼠的腸系膜動(dòng)脈中,含exon 9*的Ca V1.2鈣通道升高10.3%,而含exon 33的Ca V1.2鈣通道降低了10.5%。由于負(fù)性調(diào)控型Rbfox2(dominantnegative isoform,DN Rbfox2)升高,高血壓動(dòng)脈中Rbfox2總蛋白的表達(dá)水平增加約3倍。在血管平滑肌細(xì)胞中,我們發(fā)現(xiàn)敲降Rbfox2可以增加含exon 9*的Ca V1.2鈣通道表達(dá)水平,同時(shí)降低含exon 33的Ca V1.2鈣通道表達(dá)水平。通過全細(xì)胞膜片鉗,發(fā)現(xiàn)減少Rbfox2可以使血管的Ca V1.2鈣通道的穩(wěn)態(tài)激活(steady-state activation,SSA)和穩(wěn)態(tài)失活(steady-state inactivation,SSI)曲線向超極化的方向移動(dòng),這導(dǎo)致鈣窗電流轉(zhuǎn)向更負(fù)的膜電位,使得通道更易打開。此外,敲降大鼠腸系膜動(dòng)脈中Rbfox2后,還會(huì)增加由壓力誘導(dǎo)的血管肌源性張力。結(jié)論:Rbfox2通過動(dòng)態(tài)調(diào)控exon 9*和exon 33的表達(dá)來調(diào)節(jié)血管的Ca V1.2鈣離子通道的功能,從而影響血管肌源性張力。因此我們的研究闡明了在高血壓動(dòng)脈中Ca V1.2鈣離子通道的功能上調(diào)的分子機(jī)制,并為臨床治療高血壓提供一個(gè)潛在的靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R544.1
【圖文】：

32 1：Rbfox2 主要表達(dá)在血管平滑肌細(xì)胞細(xì)胞的細(xì)胞核中。（A）和（B）通過 RT-PCsternblotting 檢測腦（Brain）、主動(dòng)脈（Aorta）和腸系膜動(dòng)脈（MA）中 Rbfox2 的表現(xiàn) Rbfox2 蛋白主要表達(dá)于主動(dòng)脈和腸系膜動(dòng)脈中，GAPDH 為內(nèi)參。（C）MA 和 VS免疫熒光染色，左邊是 Rbfox2（抗體 1:100 稀釋），中間是 -smooth muscle actin（00 稀釋），DAPI 表示細(xì)胞核，最右側(cè)的是合成圖。. 高血壓大鼠腸系膜動(dòng)脈中 Rbfox2 表達(dá)水平升高同aV1.2 的 exon 9*和 exon 33 表達(dá)異常高血壓大鼠的血管平滑肌中，對 CaV1.2 外顯子的可變剪接相比于正常鼠呈現(xiàn)出明顯不一樣的剪接模式，這可能會(huì)影響血管肌源性張力[17]。因們檢測了阻力血管中 Rbfox2 的表達(dá)水平，以及 CaV1.2 外顯子的可變剪接

20顯示了SHR和WKY大鼠的一些基本生理特征，如尾動(dòng)脈血壓和心臟體重比。相比于 WKY 大鼠，SHR 大鼠的尾動(dòng)脈血壓明顯的增高，以及心臟體重比也顯著增加。表 20：大鼠基本生理或病理特征Rats Age(wk) HW(g) LVW(g) BW(g) HW/BW(mg/g) SBP(mmHg) nWKY 14 0.83±0.07 0.56±0.09 283.3±17.0 2.9±0.2 132.0±6.5 6SHR 14 0.86±0.06 0.63±0.04 236.9±21.2 3.6±0.3* 202.5±8.1* 6HW：心臟重量； LVW：左心室重量；BW：體重；SBP：收縮壓。與 WKY 組相比，*P<0.05，非配對檢驗(yàn)。利用克隆 RT-PCR 我們檢測了 CaV1.2 的 exon 9*和 exon 33 的表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)在 SHR 大鼠的腸系膜動(dòng)脈中 exon 9*的表達(dá)量增加約 10.3%（圖 2A），而 exon33 的表達(dá)則降低了約 10.5%（圖 2B）。Western blotting 發(fā)現(xiàn)，相比于 WKY 大鼠，在 SHR 大鼠的腸系膜動(dòng)脈中 Rbfox2 蛋白的表達(dá)量升高大約 3 倍（圖 2C）。

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1 孫雁飛;李斌;潘一龍;李曉東;;T型鈣通道在心血管疾病領(lǐng)域的研究進(jìn)展[J];中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志;2015年35期

2 吳曉羽;周中華;宋偉峰;張京慧;于曉

本文編號：2739025