【摘要】：肺高壓(pulmonary hypertension,PH)是以肺血管持續(xù)性收縮增強(qiáng)繼而導(dǎo)致肺血管重塑和肺動脈平滑肌細(xì)胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)中游離鈣離子濃度([Ca~(2+)]_i)持續(xù)性增高為特點(diǎn)。在體循環(huán)動脈和血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)上已經(jīng)證實,5-羥色胺(5-Hydroxytryptamine,5-HT)可通過激活Nox產(chǎn)生H_2O_2,引起血管收縮力的增高。本實驗室之前的研究也表明了PH大鼠肺內(nèi)動脈主干對5-HT引起的收縮反應(yīng)明顯增強(qiáng)。TRPM2是一種氧化應(yīng)激敏感型陽離子通道,可以介導(dǎo)Ca~(2+)、Mg~(2+)等陽離子進(jìn)入細(xì)胞,可以被ADP-ribose(ADPR),Ca~(2+),H_2O_2和其他的一些ROS產(chǎn)物所激活,從而增加細(xì)胞內(nèi)[Ca~(2+)]_i。而PH過程中血管收縮增強(qiáng)與胞內(nèi)[Ca~(2+)]_i是密不可分的,在PH發(fā)病機(jī)制的眾多研究中,對于TRPM2通道的作用研究目前還很少。此外,大的近端肺內(nèi)動脈(larger,proximal pulmonary arterys,PAs)和小的遠(yuǎn)端肺內(nèi)動脈(smaller,distal pulmonary arterys,sPAs)的血管反應(yīng)性和增殖能力明顯不同,它們對許多血管活性物質(zhì)的反應(yīng)性存在顯著差異。本研究通過建立慢性低氧(chronic hypoxemia,CH)、野百合堿(monocrotaline,MCT)PH模型,觀察PH過程中PA和sPAs對5-HT的反應(yīng)性變化以及PAs和sPAs對5-HT反應(yīng)性的差異;在PAs上運(yùn)用TRPM2抑制劑處理后觀察5-HT反應(yīng)性的變化,證實TRPM2通道在PH大鼠PAs對5-HT高反應(yīng)性中的作用;在sPAs上,觀察TRPM2抑制劑預(yù)處理后由5-HT引起的收縮變化的同時觀察平滑肌細(xì)胞內(nèi)Ca~(2+)信號的同步變化,證實TRPM2通道在PH大鼠sPAs對5-HT高反應(yīng)性中的作用;用ADPR聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)抑制劑PJ34預(yù)處理后觀察PAs和sPAs對5-HT反應(yīng)性的變化,探討TRPM2可能的激活機(jī)制。目的:觀察PH過程中PAs和sPAs對5-HT反應(yīng)性的差異,證實TRPM2介導(dǎo)PH大鼠PAs和sPAs 5-HT高反應(yīng)性,并探討在此過程中,TRPM2可能的激活途徑。方法:(1)通過檢測大鼠右心室收縮壓(right ventricular systolic pressure,RVSP)、右心室重量指數(shù)(right ventricular mass index,RVMI)來鑒定兩種PH模型是否制備成功;(2)運(yùn)用傳統(tǒng)8通道血管環(huán)張力檢測技術(shù)測定三組大鼠PAs收縮效應(yīng);(3)運(yùn)用DMT620M微血管張力檢測技術(shù)測定三組大鼠sPAs收縮效應(yīng);(4)運(yùn)用360CW激光共聚焦張力檢測系統(tǒng)記錄sPAs張力變化同時運(yùn)用尼康C2激光共聚焦顯微鏡同步記錄平滑肌細(xì)胞內(nèi)Ca~(2+)信號的改變。結(jié)果:(1)CH組和MCT組RVSP和RVMI明顯高于CON組,提示PH模型制備成功。(2)PH模型大鼠PAs和sPAs對5-HT反應(yīng)性較CON組均明顯增高,且PH過程中sPAs對5-HT反應(yīng)性高于PAs:PH大鼠PAs和sPAs 5-HT引起的最大收縮率均明顯高于CON組,EC_(50)減小;在PAs上,CH組和MCT組5-HT最大收縮率與CON組5-HT最大收縮率相比的倍數(shù)明顯低于sPAs,且CH組和MCT組大鼠sPAs上5-HT的EC_(50)較PAs均有下降趨勢。(3)TRPM2抑制劑ACA對5-HT誘發(fā)PAs收縮效應(yīng)的作用:ACA(0.1μmol/L)對CON及PH模型大鼠5-HT反應(yīng)均無抑制作用;ACA(1μmol/L)對CON組、CH組、MCT組均有抑制作用,抑制率CON組CH組MCT組。(4)ACA(1μM)對5-HT引起的sPAs收縮反應(yīng)和Ca~(2+)信號變化的影響:a.由5-HT(10~(-4)M)引起的CH組和MCT組sPAs收縮最大幅度明顯高于CON組,且同步檢測出來的CH組和MCT組sPAs平滑肌細(xì)胞內(nèi)Ca~(2+)增加幅度(△F/F_0)也明顯大于CON組;b.ACA(1μM)對5-HT(10~(-4)M)引起的CON、CH和MCT大鼠sPAs的收縮反應(yīng)的增強(qiáng)和胞內(nèi)Ca~(2+)信號的增加均有明顯抑制趨勢。(5)ACA(10μM)對5-HT引起兩種PH模型的PAs和sPAs收縮張力及sPAs平滑肌細(xì)胞胞漿Ca~(2+)信號的增強(qiáng)幾乎完全抑制,但是其對KCl引起的CON組大鼠PAs和sPAs收縮也有明顯抑制作用,提示大劑量ACA可能存在非特異性的抑制作用。(6)TRPM2抑制劑2-APB(10μM)對5-HT誘發(fā)肺動脈血管環(huán)收縮效應(yīng)的作用:a.在PAs上:2-APB對CON組、CH組PAs有抑制作用,兩者抑制率無差異,但對MCT組幾乎沒有抑制作用。b.在sPAs上:2-APB對三組大鼠5-HT引起的收縮反應(yīng)均有抑制作用,CON組和CH組抑制率無明顯差異,明顯大于MCT組抑制率。(7)PARP抑制劑PJ34對5-HT誘發(fā)肺動脈血管環(huán)收縮效應(yīng)的作用:a.在PAs上:PJ-34(3μM)對5-HT引起三組PAs收縮效應(yīng)均有抑制作用;PJ-34(10μM)對5-HT誘發(fā)PAs收縮效應(yīng)的抑制作用與PJ-34(3μM)相比較并沒有進(jìn)一步增加。b.在sPAs上:PJ-34(10μM)對5-HT引起三組sPAs收縮效應(yīng)均有部分抑制作用。結(jié)論:(1)PH模型大鼠PAs和sPAs對5-HT均較CON組均明顯增高,且PH過程中sPAs對5-HT反應(yīng)性高于PAs。(2)TRPM2介導(dǎo)PH大鼠PAs和sPAs 5-HT高反應(yīng)性和sPAs平滑肌細(xì)胞內(nèi)Ca~(2+)內(nèi)流,其中TRPM2的作用在CH模型大鼠中更顯著,但在PAs和sPAs上表現(xiàn)一致。(3)TRPM2介導(dǎo)PH大鼠PAs和sPAs 5-HT高反應(yīng)性過程部分通過影響ADPR聚合酶發(fā)揮作用,CH大鼠5-HT高反應(yīng)性可能更多地依賴于H_2O_2介導(dǎo)的TRPM2活化。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R544.1
【圖文】：

1.1 CH 模型的鑒定CH 組右心室收縮壓（RVSP）為（61.99±8.86）mmHg（n=12），明顯高于CON 組的 RVSP（25.37±4.74）mmHg（n=13，P＜0.01，F(xiàn)ig1，A）；CH 組右心室重量指數(shù)比（RVMI）為（40.36±3.66）%（n=12），明顯高于 CON 組的 RVMI（25.42±5.04）%（n=15，P＜0.01，F(xiàn)ig1，B）。結(jié)果提示 CH 組大鼠右心室內(nèi)壓力增大，右心室肥厚，說明 CH 模型制備成功。1.2 MCT 模型的鑒定MCT 組 RVSP 為（85.41±13.12）mmHg（n=14），明顯高于 CON 組的 RVSP（25.37±4.74）mmHg（n=13，P＜0.01，F(xiàn)ig1，A）；MCT 組 RVMI 為（59.19±6.51）%（n=12），明顯高于 CON 組 RVMI（25.42±5.04）%（n=15，P＜0.01，F(xiàn)ig1，B）。結(jié)果提示 MCT 組大鼠右心室內(nèi)壓力增大，右心室肥厚，說明 MCT模型制備成功。

23圖 2.1. PH 大鼠 PAs 和 sPAs 對 5-HT 高反應(yīng)性Fig2.1. Dose-dependent contraction of 5-HT(10-7~10-3.5M)in control rats（n=35）,CH-inducedrats(n=31) and MCT-treated rats(n=34) PAs(A);Dose-dependent contraction of 5-HT(10-7~10-3.5M)in control rats(n=27),CH-induced rats(n=23)and MCT-treated rats(n=33) sPAs(B); Maximumcontraction percentage of 5-HT in control rats,CH-induced rats and MCT-treated rats PAs(C)andsPAs(D);Contraction induced by 60mM KCl in control rats ,CH-induced rats and MCT-treatedratsPAs(E)and sPAs(F). *P＜0.05，**P＜0.01.

【參考文獻(xiàn)】

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1 江嬌;NADPH氧化酶在激動劑誘發(fā)肺動脈收縮中的作用及其在肺高壓中變化[D];福建醫(yī)科大學(xué);2016年

本文編號：2734696