發(fā)布時(shí)間：2020-06-27 10:56

【摘要】：目的:本研究擬建立Rac1b基因敲除的大鼠模型(以Rac1b~(-/-)表示),探討Rac1b表達(dá)缺失對(duì)AngⅡ誘導(dǎo)的心房纖維化發(fā)生的影響,為房顫的臨床治療提供新思路。方法:此研究分成在體的體內(nèi)部分和離體的體外部分一、體外部分體外分離培養(yǎng)原代野生型(Rac1b~(+/+))和純合子(Rac1b~(-/-))SD乳鼠心肌成纖維細(xì)胞,進(jìn)一步用AngⅡ干預(yù)成纖維細(xì)胞。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)評(píng)價(jià)AngⅡ?qū)π募〕衫w維細(xì)胞凋亡的影響及Rac1b基因無(wú)表達(dá)對(duì)心肌成纖維細(xì)胞凋亡的影響。二、體內(nèi)部分將AngⅡ泵埋植于8周齡雄性Rac1b~(+/+)和Rac1b~(-/-)SD大鼠背部皮下,從而構(gòu)建AngⅡ誘導(dǎo)的大鼠心房纖維化模型,并設(shè)立相應(yīng)的對(duì)照組。應(yīng)用半定量RT-PCR方法評(píng)價(jià)各組大鼠左心房組織中Rac1b基因的表達(dá),應(yīng)用免疫印跡技術(shù)評(píng)價(jià)大鼠左心房中Rac1b及ⅡI型膠原纖維、TGF-β1蛋白的表達(dá),大鼠左心房組織Masson染色評(píng)價(jià)左心房組織的膠原纖維含量,超聲心動(dòng)圖檢查評(píng)價(jià)大鼠左心房?jī)?nèi)徑大小變化。結(jié)果:1)Rac1b~(+/+)AngⅡ組(3.83±0.17)大鼠左心房?jī)?nèi)徑大于Rac1b~(+/+)對(duì)照組和Rac1b~(-/-)AngⅡ組(均P0.05),Rac1b~(+/+)對(duì)照組(3.03±0.24)和Rac1b~(-/-)AngⅡ組(3.05±0.24)兩組之間大鼠左心房?jī)?nèi)徑并無(wú)差異(P0.05)。2)Rac1b~(+/+)AngⅡ組大鼠左心房的膠原纖維含量(38.03±7.17)顯著高于Rac1b~(+/+)對(duì)照組和Rac1b~(-/-)AngⅡ組(均p0.01),而Rac1b~(-/-)AngⅡ組膠原含量(26.91±7.07)高于Rac1b~(+/+)對(duì)照組(15.61±3.46)(p0.05)。3)Rac1b~(+/+)AngⅡ組(0.55±0.09)Rac1b基因表達(dá)水平顯著高于Rac1b~(+/+)對(duì)照組(0.31±0.08)。4)Rac1b~(+/+)AngⅡ組表達(dá)顯著高于對(duì)照組和Rac1b~(-/-)AngⅡ組(均P0.01)。Rac1b~(-/-)AngⅡ組高于對(duì)照組表達(dá)(P0.05)。同時(shí)Rac1b~(+/+)AngⅡ組表達(dá)顯著高于對(duì)照組和Rac1b~(-/-)AngⅡ組(均P0.05)。Rac1b~(-/-)AngⅡ組高于對(duì)照組表達(dá)(P0.05)。Rac1b~(+/+)AngⅡ組中Rac1b蛋白的表達(dá)顯著高于Rac1b~(+/+)對(duì)照組(P0.01)。5)Rac1b~(+/+)對(duì)照組和Rac1b~(-/-)對(duì)照組兩組成纖維細(xì)胞凋亡比率無(wú)顯著性差(P0.05)。與對(duì)照組相比,Rac1b~(+/+)AngⅡ組成纖維細(xì)胞的凋亡比率顯著增加P0.01)。Rac1b~(-/-)AngⅡ組成纖維細(xì)胞的凋亡率高于Rac1b~(+/+)AngⅡ組(P0.01)。結(jié)論:Rac1b有可能作為AngⅡ的下游效應(yīng)因子參與AngⅡ誘導(dǎo)的心房纖維化的分子機(jī)制中。
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R541.75
【圖文】：

像、拍照并分析3.Western blot 檢測(cè) 取 Rac1b-/-和 Rac1b+/+SD 大鼠的左心房組織，放入研磨中后置于組織勻漿機(jī)器中，將組織磨碎。向管中加適量的 RIPA 蛋白裂解液，上裂解 30min，離心后取總蛋白上清液。而后經(jīng)蛋白定量、變性后進(jìn)行凝膠電、電轉(zhuǎn)膜，5％脫脂奶粉中封閉，抗體孵育，經(jīng) ECL 發(fā)光液曝光后成像，檢測(cè)c1b 蛋白的表達(dá)。以 GAPDH 作為內(nèi)參成立的情況下，SD 大鼠左心房表達(dá) Rac1白，Rac1b 敲除大鼠不表達(dá) Rac1b 蛋白。1.3 Rac1b 基因敲除純合子大鼠外觀表型觀察對(duì)純合子大鼠與同窩野生型大鼠頭部、尾部、四肢、軀干等進(jìn)行體表外觀的查，觀察到純合子大鼠正常存活，無(wú)身體畸形發(fā)生。acRacR

圖 4 Rac1b+/+對(duì)照組 圖 5 Rac1b+/+AngⅡ組圖 6 Rac1b-/-AngⅡ組 圖 7 大鼠左心房?jī)?nèi)徑統(tǒng)計(jì)比較 Rac1b+/+對(duì)照組、Rac1b+/+AngⅡ組、Rac1b-/-AngⅡ組三組大鼠 M 型超動(dòng)圖測(cè)量出的左心房?jī)?nèi)徑大小，可以發(fā)現(xiàn)：Rac1b+/+AngⅡ組（3.83 0.17 ）左心房?jī)?nèi)徑大于對(duì)照組和 Rac1b-/-AngⅡ組（均 P<0.05）, Rac1b+/+對(duì)照組（3Rac1b+/+對(duì)照組 Rac1b+Rac1b-/-AngIICA(Lm)

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 張如森;林金秀;;血清尿酸與高血壓病患者心房顫動(dòng)的關(guān)系[J];中國(guó)循環(huán)雜志;2013年06期

2 顧磊;王聯(lián)發(fā);;心房重構(gòu)機(jī)制的研究進(jìn)展[J];嶺南心血管病雜志;2010年06期

3 王維中,尤華,呂榮;心房纖維顫動(dòng)致雙心房擴(kuò)大8例分析[J];中國(guó)實(shí)用內(nèi)科雜志;2002年04期

本文編號(hào)：2731735