【摘要】：第一部分:TWS119促進ITP巨核細胞凋亡和血小板生成的作用研究研究背景:免疫性血小板減少癥(immune thrombocytopenia,ITP)是一種臨床比較常見的獲得性出血性疾病,以血小板減少為主要特點,自身免疫紊亂是其發(fā)病的始動因素。輕者可無明顯出血癥狀,嚴重者可出現皮膚黏膜出血、月經過多、甚至內臟及顱內出血,危及生命。血小板破壞增多和/或血小板生成減少是ITP的突出特點。目前研究普遍認為,血小板生成與巨核細胞的生理性凋亡關系密切,巨核細胞通過啟動局部Caspase依賴的細胞凋亡程序進而調控血小板前體的形成。研究表明,抑制Caspase的活性能明顯降低巨核細胞成熟和功能性血小板的生成及釋放。而且高分辨率投射電子顯微鏡對巨核細胞超微結構觀察結果顯示在血小板前體突起形成的早期階段,巨核細胞在形態(tài)學上就已發(fā)生了異染色質濃集等早期凋亡的變化。Ucar等研究指出慢性ITP患者的骨髓巨核細胞的凋亡率較急性ITP患者明顯降低。另有研究報道發(fā)現ITP患者的成熟巨核細胞中有75%以上呈現出副凋亡(paraptosis)的形態(tài)學特點,應用激素后改善;然而,將患者血漿加入體外培養(yǎng)的巨核細胞,同樣觀察到副凋亡的形態(tài)學特點。由此推測,巨核細胞的凋亡受到抑制或者不能發(fā)生正常形式的生理性凋亡,同樣會影響血小板的生成。糖原合成酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3,GSK-3)是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,其功能具有多樣性。最早研究發(fā)現GSK-3可促進糖原合成酶磷酸化從而抑制糖原合成,是參與糖代謝的主要限速酶之一。近年來研究表明,GSK-3還同時參與許多其他的細胞內的重要生理過程,如細胞分化、增殖和凋亡等。GSK-3β抑制劑TWS119是一類4,6-二取代吡咯并嘧啶,體外實驗證實,TWS119能夠增強骨髓細胞中巨核細胞的生成和血小板的釋放。最新研究發(fā)現,GSK-3β抑制劑可能是通過促進巨核細胞生成和成熟,從而能夠有效的促進血小板釋放。在本研究中,我們觀察到在低劑量的TWS119作用下,加入ITP患者血漿的體外培養(yǎng)體系中巨核細胞和血小板生成以及巨核細胞凋亡比例顯著增加。我們還進一步研究了ITP小鼠模型中TWS119對巨核細胞和血小板生成的影響,結果顯示TWS119對巨核細胞凋亡和血小板釋放具有明顯的促進作用,提示其對ITP的潛在治療作用。目的:通過觀察低劑量TWS119對ITP患者血漿作用下巨核細胞的成熟、凋亡障礙和血小板生成不足的影響,探討其用于促進ITP患者血小板生成的可能性和作用機制。方法:(1)ITP患者和健康對照:收集62例ITP患者和23例健康對照的外周血,分離制備血漿。(2)采集足月妊娠臍血80-100 mL,分離臍血來源的CD34+細胞,在1 mL無血清培養(yǎng)基(serum-free expansion medium,SFEM)中加入重組人血小板生成素(recombinant human thrombopoietin,rhTPO),重組人IL-3(recombinant human interleukin,rhIL-3)和干細胞因子(stem cell factor,SCF)共培養(yǎng),于第4天加入不同濃度(0-100 μM)的GSK-3β抑制劑TWS119繼續(xù)培養(yǎng),在培養(yǎng)的第14天通過流式細胞術檢測培養(yǎng)體系中巨核細胞生成數量和凋亡率、血小板釋放數量及多倍體巨核細胞比例等,確定TWS119的最佳作用劑量。(3)于上述培養(yǎng)體系中分別加入100μITP患者或者健康對照的血漿,第4天加入最佳作用劑量的TWS119繼續(xù)培養(yǎng),在培養(yǎng)的第14天進行檢測,應用流式細胞術檢測培養(yǎng)體系中生成的巨核細胞數量和其釋放的血小板數量及巨核細胞凋亡比例及多倍體巨核細胞的比例。(4)實時定量聚合酶鏈式反應(RT-qPCR)檢測巨核細胞凋亡相關分子TRAIL、TRAIL-R2、Bcl-2、Bcl-xL、TNF-α Fas、Fas-L mRNA的表達量。(5)流式細胞術檢測TRAIL、TRAIL-R2、Bcl-2、Bcl-xL、TNF-α、Fas、Fas-L、活化Caspase-3、活化Caspase-8的表達量。Western blot檢測TRAIL、Caspase-3、Caspase-8的表達量。(6)動物實驗:將野生型C57BL/6小鼠血小板輸入同種CD61基因敲除小鼠體內,然后將后者的脾臟細胞輸給聯(lián)合免疫缺陷(severe combined immuoderficient,SCID)小鼠,導致SCID小鼠出現嚴重的血小板減少,構建主動型ITP小鼠模型。(7)將SCID小鼠分為4組,a組僅接受射線輻照,無任何細胞轉輸;b組接受射線輻照,并于輻照當日開始腹腔注射lmg/kg TWS119,之后隔天注射1次,注射兩周;c組接受腹腔注射野生型小鼠血小板免疫的CD61基因敲除小鼠脾細胞和射線輻照;d組接受同等劑量脾細胞、TWS119治療以及射線輻照。每周進行血小板采集監(jiān)測血小板計數并進行結果分析。借助體內實驗評估TWS119治療對主動型1TP小鼠模型的治療效應。結果:(1)TWS119在體外能夠促進巨核細胞成熟和血小板生成,并呈劑量依賴性。在體外培養(yǎng)體系中加入不同濃度的TWS119(0-100 μM),培養(yǎng)后進行檢測。TWS119在體外可以促進巨核細胞生成、成熟和血小板釋放,并且TWS119對巨核細胞的作用呈劑量依賴性。其最佳作用濃度是1 μM,在該濃度下體外培養(yǎng)體系中巨核細胞和血小板生成數量、多倍體(≥ 4N)巨核細胞的比例最高。當TWS119的濃度大于10 μM時抑制巨核細胞和血小板的產生,當濃度大于100 μM時,TWS119對巨核細胞表現出細胞毒性,其現象為巨核細胞凋亡比例明顯升高,但生成數量和多倍體巨核細胞比例下降,血小板釋放減少,即巨核細胞發(fā)生了未成熟的無效凋亡。(2)ITP患者血漿對巨核細胞產生、成熟、凋亡和血小板釋放有不同影響。將23例健康對照組血漿孵育體系中生成的巨核細胞數量(均數±標準差,5.35±0.79 ×105)定義為正常范圍。由此,根據62例ITP患者血漿孵育體系中生成的巨核細胞數量分為三組,ITP患者血漿孵育下的巨核細胞生成數量比正常范圍的健康對照組升高,且高于正常范圍上限的,定義為A組(33例);ITP患者血漿孵育下的巨核細胞生成數量比正常范圍的健康對照組低,且低于正常范圍下限的,定義為B組(18例);ITP患者血漿孵育下的巨核生成細胞數量與健康對照組無明顯差異,處于正常范圍內的,定義為C組(11例)。同時,A組和B組的血小板釋放水平與健康對照組相比顯著降低,C組與健康對照組之間沒有顯著差異。A組的巨核細胞凋亡率低于健康對照組,B組和C組與健康對照組之間未觀察到顯著差異。(3)TWS119對正常對照和部分ITP血漿培養(yǎng)巨核細胞成熟和血小板釋放有促進作用。在A組培養(yǎng)體系中加入TWS119后,其巨核細胞生成數量,血小板數量,巨核細胞凋亡比例和多倍體比例(≥ 4N)顯著升高。健康對照組加入TWS119也觀察到巨核細胞生成數量,血小板數量,巨核細胞凋亡比例和多倍體比例(≥ 4N)顯著升高。然而,B組和C組加入TWS119前后并沒有觀察到明顯變化。(4)TWS119抑制巨核細胞Bcl-xL和Bcl-2表達,并且增加TRAIL表達。流式細胞分析結果顯示Bcl-xL和Bcl-2在A組巨核細胞的表達量顯著高于健康對照組的表達;加入1μM TWS119處理后,A組Bcl-xL、Bcl-2表達顯著下降;并且A組TRAIL、活化Caspase-3和活化Caspase-8的表達明顯低于對照組;當加入TWS119處理后,A組中TRAIL、活化Caspase-8和活化Caspase-3的表達顯著升高。健康對照組經TWS119處理后巨核細胞中TRAIL和活化Caspase-3表達也升高,而活化Caspase-8的表達升高但不具有統(tǒng)計學意義。A組Bcl-xL mRNA表達水平高于健康對照組,但不具有統(tǒng)計學差異,A組Bcl-2 mRNA顯著高于對照組;加入TWS119處理后,Bcl-xL mRNA和Bcl-2 mRNA在A組和健康對照組的表達水平均明顯降低。TRAIL mRNA在A組的表達均顯著低于對照組;加入lμM TWS119后,A組和健康對照組中TRAIL的表達均明顯升高。Western blot結果顯示,蛋白水平上TRAIL、活化Caspase-8和活化Caspase-3在A組中的表達均低于健康對照組,加入lμM TWS119后,A組和對照組中TRAIL、活化Caspase-8和活化Caspase-3表達均有不同程度升高,Caspase-8和Caspase-3蛋白總量表達未見明顯變化。(5)TWS119治療有效減輕ITP模型小鼠血小板減少的相關癥狀。將SCID小鼠分為4組,a組僅接受射線輻照,無任何細胞轉輸;b組接受射線輻照,并于輻照當日開始腹腔注射1mg/kg TWS119,之后隔天注射1次,注射兩周;c組接受腹腔注射CD61基因敲除小鼠脾細胞和射線輻照;d組接受同等劑量脾細胞、TWS119以及射線輻照。a組和b組小鼠血小板數目于第二周回升,提示射線輻照所致的一過性血小板減少恢復,而接受脾細胞注射的c組和d組小鼠血小板計數在監(jiān)測期間維持在較低水平,則證明主動型ITP小鼠模型造模成功。d組小鼠血小板數目從第7天開始升高,從第14天開始明顯高于c組小鼠,提示腹腔注射TWS119能夠有效升高小鼠外周血小板數量,進而提高小鼠的生存率。結論:(1)TWS119在體外能夠促進巨核細胞的生成、成熟和血小板的釋放,并且TWS119對巨核細胞的作用呈劑量依賴性。(2)部分ITP患者血漿導致的巨核細胞成熟障礙及血小板生成不足與凋亡相關因子TRAIL的表達異常相關,TWS119對其具有改善作用。低劑量TWS119可增加TRAIL表達水平,同時增加TRAIL的敏感性,促進巨核細胞的生成、成熟和血小板的釋放。(3)TWS119改善了主動型ITP小鼠的血小板減少癥狀,提示TWS119有望成為ITP治療的新方法,同時對一些血小板減少相關疾病的治療提供了新思路。第二部分:抗c-Mpl抗體在ITP患者中抑制血小板生成和影響rhTPO療效的作用研究研究背景:原發(fā)免疫性血小板減少癥(primary immune thrombocytopenia,ITP)是臨床最常見的自身免疫性出血性疾病(外周血小板計數100 ×l09/L),約占所有出血性疾病的30%。主要臨床特點包括外周血小板減少、體內產生血小板自身抗體、伴骨髓巨核細胞數正�；蛟龆�。目前,ITP的發(fā)病機制的研究熱點主要集中在血小板生成不足和血小板破壞增多兩部分。血小板破壞過多主要歸因于細胞毒性T細胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)對血小板的直接溶解和/或自身抗體介導的血小板過度清除;而血小板生成不足則是由免疫系統(tǒng)介導的巨核細胞成熟障礙和凋亡異常引起的。隨著對ITP發(fā)病機制的深入研究,由自身反應性B細胞產生的自身抗體(例如白身血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa和Ib/IX抗原的自身抗體抗GP Ⅱb/IⅢa和抗GP Ib/IX),尤其是IgG型抗體與血小板膜表面的糖蛋白結合,致敏的血小板進一步通過Fc受體被巨噬細胞吞噬或激活補體途徑而被破壞。血小板的大量破壞在正常生理情況下應該會引起血小板代償性升高,但研究發(fā)現ITP患者的血小板生成中43%正常,30%甚至減少,而僅有27%表現出生成增多,此結果提示了血小板生成減少也參與了 ITP的發(fā)病進程。Chang和McMillan等研究發(fā)現,ITP患者血漿中的血小板特異性自身抗體能夠明顯抑制巨核細胞的生成,說明自身抗體不僅能夠介導外周血小板的過度破壞,還會影響骨髓中巨核細胞的生長發(fā)育。然而,大部分ITP患者骨髓中巨核細胞的數量正�；蛟龆�,所以抗血小板自身抗體導致的巨核細胞數量降低不能完全闡明外周血小板生成減少的原因。目前普遍認為血小板的生成與巨核細胞成熟、凋亡密切相關。因此,巨核細胞凋亡異常也可能是導致ITP患者血小板持續(xù)減少的重要原因。此外,有研究發(fā)現系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)患者和ITP患者血清中檢測出抗c-Mpl抗體(anti-thrombopoietin receptor antibody,anti-TPO-R antibody)的存在,而健康者未被檢出,且抗c-Mp丨抗體的存在與外周血小板減少有一定相關性。我們推測抗c-Mpl抗體的存在可能是ITP患者血小板減少的原因之一。ITP經典的一線治療包括糖皮質激素和靜脈注射免疫球蛋白。近年來,盡管有新的治療方法出現,如利妥昔單抗、促血小板生成素(thrombopoietin,TPO)和TPO受體激動劑等,但僅對2/3的患者有效,甚至更少數患者能夠達到長期緩解,其余患者治療無效或短期內復發(fā),發(fā)展成為難治性ITP。TPO的作用機制是通過與巨核細胞表面TPO受體c-Mpl結合形成TPO/c-Mpl復合體,從而促進巨核細胞分化、成熟和血小板生成。有研究報道,抗c-Mpl抗體陽性的患者血清TPO水平升高,因此推測可能抗c-Mpl抗體通過與TPO競爭性結合巨核細胞表面的c-Mpl,空間抑制作用導致TPO與c-Mpl無法結合,阻斷了 TPO/c-Mpl通路,使巨核細胞出現分化、發(fā)育、成熟障礙,從而導致血小板生成減少;同時,抗c-Mpl抗體也可能通過抗原抗體反應消耗血小板,具體機制仍需進一步探討。目前,ITP在診斷上仍然缺乏特異性指標,往往以排除性診斷為主。本研究將通過探索抗c-Mpl抗體在rhTPO治療ITP中的效果,評估抗c-Mpl抗體的意義和價值,為ITP的診斷和rhTPO的臨床應用提供一種有效的補充性的實驗室檢查手段。目的:(1)檢測ITP患者血清中抗c-Mpl抗體水平,通過比較ITP患者與其他血小板減少疾病患者的抗c-Mpl抗體的差異,分析抗c-Mpl抗體作為ITP患者鑒別診斷的參考意義。(2)通過對比抗c-Mpl抗體陽性及陰性的ITP患者中抗血小板抗體、TPO水平及相關臨床指標的差異,評價抗c-Mpl抗體在ITP診斷中的可行性及價值。(3)通過比較rhTPO、地塞米松、美羅華和艾曲波帕治療抗c-Mpl抗體陽性及陰性的慢性1TP患者的療效,評價抗c-Mpl抗體在預后中的價值。方法:(1)標本收集:收集1 87例ITP患者(31例新診斷和156例慢性ITP),31例再生障礙性貧血(aplastic anemia,AA)患者,17例骨髓增生異常綜合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者,22例風濕類疾病(rheumatic disease,RD)患者,25例急性髓性白血病(acute myeloid leukemia,AML)和59例正常對照(healthy donor,HD)的外周血,分離血清備用。(2)采血時對ITP患者進行人口學和臨床癥狀體征進行統(tǒng)計。記錄患者年齡、性別、血小板計數和實驗室檢查結果。并對患者的治療方式、治療反應、治療后血液學檢查及預后進行調查統(tǒng)計。(3)樣本檢測:酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme-linked immunoabsorbent assay,ELISA)檢測血清中抗c-Mpl抗體的表達量。(4)骨髓細胞學涂片檢測ITP患者骨髓中巨核細胞數量。(5)酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測血清TPO水平。(6)改良單克隆抗體俘獲血小板抗原技術(Modified monoclonal antibody-specific immobilization of platelet antigens,MAIPA)檢測ITP患者血團中血小板自身抗體。(7)CD34+細胞獲取:采集足月妊娠臍血80-100 mL,分離單個核細胞并從中分選出CD34+細胞,加入rhIL-3和SCF,體外培養(yǎng)于24孔板中,每孔加入100 ng rhTPO或10 ptM艾曲波帕,再加入ITP患者或健康對照的純化IgG。(8)流式細胞術檢測培養(yǎng)體系中巨核細胞的數量及凋亡比例、血小板生成數量以及多倍體巨核細胞比例。結果:(1)在不同的血小板減少性疾病中可以檢測到抗c-Mpl抗體。通過檢測59例正常對照的血清抗c-Mpl抗體水平,將抗體濃度高于2187.93 ng/mL的患者定義為抗c-Mpl抗體陽性的患者。在54例ITP(28.9%)、1例MDS(5.9%)、7例RD(31.8%)和2例AML(8%)患者的血清中檢測到抗c-Mpl抗體。然而,無論是正常對照組還是AA組,均未檢測到抗c-Mpl抗體。其中,ITP組抗c-Mpl抗體陽性患者的比例明顯高于MDS、AA組和AML組(尸0.05)。(2)ITP中,抗c-Mpl抗體陽性患者的骨髓巨核細胞數量和外周血小板計數較抗c-Mpl抗體陰性患者降低。結果顯示,在ITP患者中,抗c-Mpl抗體陽性組的外周血小板計數明顯低于抗c-Mpl抗體陰性組(P=0.01)。抗c-Mpl抗體陽性組的骨髓巨核細胞數量較抗c-Mpl抗體陰性組顯著減少(尸=0.004)�？筩-Mpl抗體陽性組中,其抗GP Ib/IX抗體和抗GP Ilb/IIla抗體雙陽性的比例高于抗c-Mpl抗體陰性患者(P=0.001)。ITP患者中,31例為新診斷的ITP,其中14例為抗c-Mpl抗體陽性。156例為慢性ITP患者,其中40例為抗c-Mpl抗體陽性。新診斷組的抗c-Mpl抗體陽性患者的比例高于慢性ITP組(尸=0.049)。(3)ITP中,抗c-Mpl抗體陽性患者血清TPO水平升高。AA組的血清TPO水平高于ITP,MDS,AML和RD組,而健康對照組的血清TPO水平表達最低(P均0.05)。此外,抗c-Mpl抗體陽性患者的TPO 水平高于抗c-Mpl抗體陰性組(尸=0.004)。(4)抗c-Mpl抗體陽性與rhTPO的療效減低相關。初次接受治療至第三個月結束時,54例抗c-Mp1抗體陽性的患者中,有27(50%)例接受了 rhTPO的治療,其中14(51.9%)例達到了臨床完全反應(complete response,CR)和有效(response,R)。133例抗c-Mpl抗體陰性的患者中,83(62.4%)例接受了 rhTPO的治療,其中62(74.7%)例獲得臨床CR和R。抗c-Mpl抗體陰性的患者對rhTPO的有效率高于抗c-Mpl抗體陽性組(尸=0.03)。使用Logistic回歸模型分析了抗c-Mpl抗體與治療效果的相關性,結果表明抗c-Mpl抗體的存在與rhTPO治療后臨床反應的效果呈負相關。經rhTPO治療達到CR和R的患者中,抗體陽性組中位起效時間為16天,抗體陰性組為9天(P ＝ 0.009)。然而,在地塞米松或美羅華治療組中,抗c-Mpl抗體陽性和陰性患者的治療效果無顯著差異(P0.05)。此外,經艾曲波帕治療的ITP患者中,3例抗c-Mpl抗體陽性且血清抗c-Mpl抗體水平高表達的患者中2例治療無效(NR),而2例抗c-Mpl抗體陰性的患者治療后均達到CR。(5)ITP患者經rhTPO治療后血清抗c-Mpl抗體表達水平降低。19例經rhTPO治療后患者的抗c-Mpl抗體滴度水平顯著低于治療前的抗體滴度水平(尸= 0.044)。而經美羅華、地塞米松和艾曲波帕治療后患者的抗c-Mpl抗體滴度水平較治療前無顯著差異。(6)抗c-Mpl抗體陽性的ITP患者血清純化IgG可以抑制體外巨核細胞和血小板生成。在rhTPO或艾曲波帕存在下的培養(yǎng)體系,均可發(fā)現抗c-Mpl抗體陽性組的巨核細胞生成較抗c-Mpl抗體陰性組顯著降低。此外,抗c-Mpl抗體陽性組的血小板生成亦明顯低于抗c-Mpl抗體陰性組。在rhTPO存在下,抗c-Mpl抗體陽性組與抗c-Mpl抗體陰性組相比,多倍體比例較低。而在艾曲波帕處理下,我們并沒有在此兩組之間觀察到明顯差異。此外,無論在rhTPO或者艾曲波帕處理下,抗c-Mpl抗體陽性組和陰性組之間在巨核細胞凋亡比例上沒有顯著差異。與健康對照組相比,抗c-Mpl抗體陽性組在巨核細胞生成、凋亡比例和血小板生成數量上均明顯降低。這些結果提示,即使存在促血小板生成劑,ITP患者中抗c-Mpl抗體存在可能對巨核細胞生成和血小板產生具有抑制作用。結論:(1)在ITP患者中可以檢測到抗c-Mpl抗體,但在正常人中均未檢測到,抗c-Mpl抗體有望成為ITP的臨床診斷指標之一。(2)抗c-Mpl抗體陽性的ITP患者巨核細胞和血小板計數下降,血清TPO水平升高。同時在體外實驗證實了抗c-Mpl抗體對巨核細胞和血小板生成的抑制作用,提示抗c-Mpl抗體可能參與ITP的病理生理過程。(3)抗c-Mpl抗體的存在與rhTPO療效降低有關,rhTPO治療有效的患者經治療后血清抗c-Mpl抗體表達水平降低。提示抗c-Mpl抗體可能會影響rhTPO治療的療效,對ITP的臨床藥物治療提供新思路。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R558.2
【圖文】：

圖１．邋ＴＷＳ１１９在體外能夠促進巨核細胞成熟、凋亡和血小板釋放，并呈濃度依逡逑賴性。逡逑圖邋Ａ：不同濃度邋ＴＷＳ１１９邋（０，Ｏ．ｌｕＭ，邋０．５（ｉＭ，ｌｐＭ，ｌ0ｎＭ，邋５0ｎＭ，ｌＯＯｐＭ）逡逑作用下培養(yǎng)體系的巨核細胞生成數量依次為７．００邋士邋１．３３邋ｘ邋ｌ0５，邋８．０２邋±邋１．９１邋ｘ邋ｉ0５，逡逑８．９０±２．０４邋ｘ邋ｉ0５，邋ｉｉ．８６±２．０７邋ｘ邋ｉ0５，邋ｉｉ．３２±２．］６邋ｘ邋ｉ0５，邋９．１７±０．９９邋ｘ邋ｉ0５，邋５．２９士逡逑０．９３ｘｌ0５。ＴＷＳ１１９邋１ｐＭ邋時巨核細胞數量高于邋０．５ｈＭ邋（尸＜０．０５）。逡逑圖邋Ｂ：不同濃度邋ＴＷＳ１１９邋（０，Ｏ．ｌｕＭ，０．５ｎＭ，ｌｐＭ，邋］0ｎＭ，５０ｐＭ，１００ｐＭ）逡逑作用下血小板生成數量依次為５．９４邋±１．９７邋ｘ邋ｌ0４，７．５１邋±１．８４邋ｘ邋ｌ0４，８．９４邋±１．３７邋ｘ逡逑１０４，１２．７７邋±３．１２邋ｘ邋１0４，１１．４５邋±３．０７邋ｘ邋１0４，６．６１邋±邋１．９２邋ｘ邋１0４，４．３０邋±邋１．８１邋ｘ邋１0４。逡逑ＴＷＳ１１９�。蜁r血小板生成數量高于０．５ｐＭ邋（尸＜邋０．０５邋）。逡逑

３．邋ＴＷＳ１１９對正常對照和部分ＩＴＰ血漿培養(yǎng)巨核細胞成熟和血小板釋作用。逡逑Ａ：加入ＴＷＳ１１９邋１ｆｉＭ后，健康對照組（對照組ｕｓ．對照組＋ＴＷＳ１１９，０．７９ｘ邋ｌ0５ＶｌＳ．６．０３±０．７0ｘ邋１0５，？尸＜邋0．0１）和Ａ組的巨核細胞生成數量．Ａ邋組邋＋ＴＷＳ１１９，７．１２±０．９２ｘｌ0５ｖ＞ｓ．８．０３邋土邋１．２５＞＜１0５，尸邋＜邋0．0１）顯著８：加入�。埽ぃ福保保瑰澹保溃春�，健康對照組（２．６７±０．８７＞＜１0＼１５．３．４６±０．９６＞＜＜邋０．０１）和邋Ａ邋組的血小板生成數量（１．６６邋±０．８０邋ｘｌ0４ＶｌＳ．邋２．２６邋±０．８９邋ｘｌ0４０１）顯著升高。逡逑邋Ｃ：加入邋ＴＷＳ１１９邋１邋ｎＭ邋后，健康對照組（２０．０８％邋士邋４．９４％邋ｖｓ．邋２３．８０％邋±４．７＜邋０．０５）和Ａ組的巨核細胞凋亡比例（１３．９９％邋±４．４５％邐１８．４７％邋±６．２＜邋０．０１）顯著升高。逡逑Ｄ、圖Ｅ：加入ＴＷＳ１１９邋ｌ｜ｕＭ后，Ａ組的巨核細胞多倍體比例（２邋４Ｎ，邋４

本文編號：2729442